实验1 谷胱甘肽ppt课件

1、实验一、不同方法从干酵实验一、不同方法从干酵母中提取谷胱甘肽的比较母中提取谷胱甘肽的比较2021-03-26实验目的实验目的n掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法；n掌握还原型谷胱甘肽定量的方法。实验原理实验原理n谷胱甘肽的性质n从活性干酵母中提取谷胱甘肽的原理及评价方法优劣的指标n提取的注意事项谷胱甘肽的性质谷胱甘肽的性质n性质性质n谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽，半胱氨酸侧链基团氨酸组成的三肽，半胱氨酸侧链基团上连有一个活泼的巯基决定了其有氧上连有一个活泼的巯基决定了其有氧化型化型GSSG和还原型和还原型GSH两两种形式。种形式。n谷胱甘肽的

2、分子量为谷胱甘肽的分子量为307.2，等电点，等电点为为5.93，溶于水、稀醇、有机酸、酯，溶于水、稀醇、有机酸、酯类，不溶于醇、醚、丙酮；在水溶液类，不溶于醇、醚、丙酮；在水溶液中易被氧化，在中易被氧化，在pH3.07.0环境下较环境下较稳定。稳定。n谷胱甘肽广泛存在于动、植物和微生谷胱甘肽广泛存在于动、植物和微生物体内，干酵母中含有约物体内，干酵母中含有约1谷胱甘谷胱甘肽，是提取谷胱甘肽最常用的原料。肽，是提取谷胱甘肽最常用的原料。n生理功能生理功能n抗氧化、清除自由基、解毒抗氧化、清除自由基、解毒CO、重金属、丙、重金属、丙烯氰）、增强免疫。烯氰）、增强免疫。NH2CHCOOHCH2CH

3、2CONHCHCH2SHCONHCH2COOHNH2CHCOOHCH2CH2CONHCH CONHCH2COOHSNH2CHCOOHCH2CH2CONHCH CONHCH2COOHS原理原理n提取原理提取原理n 谷胱甘肽是小分子物质，且在水中的溶谷胱甘肽是小分子物质，且在水中的溶解度较大，故可选择一些温和的方法从干酵解度较大，故可选择一些温和的方法从干酵母中提取谷胱甘肽。母中提取谷胱甘肽。n 在细胞不完全破碎的条件下，只要细胞在细胞不完全破碎的条件下，只要细胞壁表面出现一些裂缝，谷胱甘肽就可以扩散壁表面出现一些裂缝，谷胱甘肽就可以扩散到溶剂中。到溶剂中。n评价指标评价指标n还原态谷胱甘肽的提取

4、率；还原态谷胱甘肽的提取率；n杂质蛋白质、核酸等释放量少，便于后杂质蛋白质、核酸等释放量少，便于后续进一步分离纯化续进一步分离纯化吸附层析、离子交换吸附层析、离子交换层析；层析；n简便易行、提取效率高、成本低。简便易行、提取效率高、成本低。本卷须知本卷须知n提取温度要尽量低，但反复冻融谷胱甘肽易分解；提取温度要尽量低，但反复冻融谷胱甘肽易分解；n提取时间要尽量短，防止其被氧化；提取时间要尽量短，防止其被氧化；n谷胱甘肽在偏酸性的条件下易保持还原态；谷胱甘肽在偏酸性的条件下易保持还原态；n适当的固液比，既保证尽量多的谷胱甘肽被溶出也保证适当的固液比，既保证尽量多的谷胱甘肽被溶出也保证提取液中谷胱

5、甘肽的浓度较高，便于后续的分离纯化。提取液中谷胱甘肽的浓度较高，便于后续的分离纯化。n适当的搅拌速度，既保证适当的传质速度，便于谷胱甘适当的搅拌速度，既保证适当的传质速度，便于谷胱甘肽扩散到溶剂中，也保证工业生产中能耗适当。肽扩散到溶剂中，也保证工业生产中能耗适当。实验材料实验材料n试剂：活性干酵母粉，试剂：活性干酵母粉，36甲酸溶液，甲酸溶液，n 2H2SO4 溶液，乙酸：乙醇溶液，乙酸：乙醇v/v=2:1)溶溶液液n 5碘化钾溶液，碘化钾溶液，0.0001mol/L碘酸钾溶液，碘酸钾溶液，n 淀粉指示剂淀粉指示剂n仪器：离心机仪器：离心机实验步骤实验步骤n热水提取法：热水提取法：1g 干酵

6、母，加干酵母，加15mL 水，水，95度水浴度水浴10min，立即冷却，取，立即冷却，取8mL离心离心5000rpm，10min），取），取5mL上清液滴定，记录滴定体积。上清液滴定，记录滴定体积。n冷冻研磨处理后有机酸搅拌提取：冷冻研磨处理后有机酸搅拌提取：1g 干酵母，先干酵母，先在研钵中研细，加入在研钵中研细，加入10mL蒸馏水混匀，蒸馏水混匀，20度度冷冻呈半固体状，研磨冷冻呈半固体状，研磨5min，加入，加入5mL36乙酸，乙酸，室温下搅拌室温下搅拌15min，取，取8mL离心离心5000rpm，10min），取），取5mL上清液滴定，记录滴定体积。上清液滴定，记录滴定体积。n酸热处

7、理酸水搅拌提取：酸热处理酸水搅拌提取：1g 干酵母，加入干酵母，加入15mL 2 H2SO4，60度水浴下搅拌度水浴下搅拌15min，立即冷却，立即冷却，取取8mL离心离心5000rpm，10min），取），取5mL上清上清液滴定，记录滴定体积。液滴定，记录滴定体积。n有机酸稀醇搅拌提取：有机酸稀醇搅拌提取： 1g 干酵母，加入干酵母，加入15mL 乙酸乙醇混合液乙酸乙醇混合液v:v=2:1），室温下搅拌），室温下搅拌15min，取，取8mL离心离心5000rpm，10min），取），取5mL上清液滴定，记录滴定体积。上清液滴定，记录滴定体积。n注：待滴定的谷胱甘肽提取液置注：待滴定的谷胱甘肽提取液置4度冰箱保存，防度冰箱保存，防止其被氧化。止其被氧化。n氧化还原滴定法确定谷胱甘肽的含量氧化还原滴定法确定谷胱甘肽的含量n KIO35KI6HPO3 3I26KPO33H2On 碘酸根离子在酸性条件下具有氧化性，能碘酸根离子在酸性条件下具有氧化性，能与还原态的谷胱甘肽与还原态的谷胱甘肽GSH反响，当反响，当GSH全全部反应完时，碘酸根离子将碘化钾氧化为碘，部反应完时，碘酸根离子将碘化钾氧化为碘，碘使淀粉指示剂变蓝色，即为滴定终点。碘使淀粉指示剂变蓝色，即为滴定终点。n本卷须知：本卷须知：n在酸性溶液中，淀粉会缓慢