HPLC在化学纤维禁用偶氮染料、表面活性剂烷基苯磺酸钠的分析应用

1、HPLC在化学纤维禁用偶氮染料、表面活性剂烷基苯磺酸钠的分析应用主讲人：潘媛媛主讲人单位：赛默飞世尔科技(中国)有限公司UltiMate 3000液相色谱仪 拥有最全面的高效液相色谱级别：从纳升级液相色谱、常规液相色谱到半制备级液相色谱 通用及生化专用 HPLC 的生产、研发在欧洲德国（Softron / Gynkotek：HPLC及数据处理系统）荷兰（LC Packings：纳升及毛细管级液相色谱） 常规及超高效液相色谱柱；生化分析柱的生产及研发在美国总部各种硅胶基质反相柱、混合基质柱（Acclaim系列品牌）各种聚合物基质生化专用的高效离子交换柱、整体柱生化兼容液相色谱技术Hypersil

2、、Syncronis、Accucore系列硅胶柱；多孔石墨化炭黑柱 特殊的 HPLC 检测器（2009年收购的 ESA 公司）电喷雾检测器（Corona CAD）库伦检测器（CouloChem III和CoulArray）UltiMate 3000 液相色谱的各种组合 Binary and Quaternary UHPLC systems 1000 bar up to 5 mL/min 800 bar up to 8 mL/min Oven temp 5 - 110 C 200 Hz DAD, MWD, VWD, FLD Improved sub 2-m particle column com

3、patibility Ultrafast/ultra resolution system UHPLC auto method scouting 多种配置 应用领域广泛 流速范围从纳升级至半制备级 UHPLC Compatible Dedicated x2 Dual LC System 2 Systems-in-One Auto Appl. Switching Parallel and Tandem On-line SPE-LC Auto method Scouting Auto off-line 2D-LC Comprehensive on-line 2D-LC所有的UltiMate 3000

4、系统已全面兼容UHPLC+ 可靠性高；紧凑 积木式；灵活性 UHPLC Compatible 独特的 x2 双梯度液相色谱系统 各种高级液相色谱应用 串联及并联 在线样品处理 自动方法开发 自动离线多维色谱 在线多维色谱UHPLC Compatible UHPLC system for the Nano/Cap flow range 20 nL/min 50 L/min at up to 800 bar Continuous direct flow New standard in retention time precision Snap-in valves nanoViper fitting

5、 system for easy operationBasicStandardx2 DualRSLCx2 Dual RSLCRSLCnano双三元梯度泵DPG-3600SD/RS自动进样器 WPS-3000(TSL) 分流式进样环 压力耐受 620 bar (SD)1000 bar (RS) 进样体积： 0.01 -100 L 最大进样可更改至 500 L 进样周期：15s 超低交差污染率： 0.005% Caffeine 温控和非温控自动进样器 专利的阀切换技术6柱温箱 TCC-3000 控温范围 5-85C (最大室温以下18 C),RS为5-110C 有效的流动相预调节器 (2 L st

6、andard, optional 7 and 11 L) 有效的柱后冷却装置(standard cooler inserts: 2.2 L) 2个切换阀 (2P-6P, 2P-10P and 6P-7P, 1034 bar) 切换阀外置安装、维护简单、方便 最多可放置12根色谱柱 最长可放置30cm长色谱柱 4个色谱柱识别器7Dionex液相色谱检测器示差折光检测器VWD、DAD、MWD （常规型、快速型）CAD电喷雾检测器（常规型、快速型）库仑（阵列）检测器荧光检测器（常规型、快速型）质谱检测器色谱柱-Acclaim 系列-Dionex 除了完善常规反相色谱柱外；近年的主要的研发精力放在了混

7、合基质的色谱柱上 使用混合基质色谱柱益处不同类型物质同时分离可调整选择性简化流动相Acclaim PolarAdvantage (PA)Acclaim 300 C18 Acclaim 120 C18Acclaim 120 C82000 Acclaim SurfactantAcclaim PolarAdvantage II (PA2)Acclaim Organic Acid (OA) Acclaim Explosives E1Acclaim Explosives E2Acclaim Mixed-Mode HILIC (HPLC2007)Acclaim Mixed-Mode WAX (PittCo

8、n2007)(HPLC2003)(HPLC2002)(PittCon2001)(PittCon2005)(PittCon2004)(PittCon2006)20012002200320042005200620072008Acclaim 2.2 m RSLC (HPLC2008)Acclaim Mixed-Mode WCX (PittCon2008)20092010We started here Acclaim Trinity P1 (PittCon2009)More Acclaim 2.2 m RSLC Acclaim 300 3m Acclaim HILIC-10 3m Acclaim Ph

9、enyl 2011 Acclaim SEC-1000 5m 色谱柱-Hyper系列-Thermo5um, 1.7um，无氰基柱特殊色谱柱：LCMS柱、HyperCarb柱、PFP柱、Bio系列色谱柱色谱柱型号型号常规色谱柱Hypersil Gold系列Hypurity系列生物分子Biobasic系列；Betabasic系列极性和可选择性aQ、Aquastar等扩展pH型Hypurity系列；Hypercarb经典型Hypersil系列；Hypersil BDSLC/MSKappa cappillary系列；Dash HTS系列离子交换硅胶基质 SAX和SCX类型体积排阻HyperGel OP系

10、列；BioSEC系列保护柱相应的各类型SPE柱RP、IEX基质超高效色谱柱Syncronis系列增强核色谱柱Accucore C18、aQ 、Ph、 PFP、HILICThermo Fisher Syncronis 色谱柱色谱柱检测C18C8aQPhAminoSiO2HILIC硅胶粒径和粒径分布是是是是是是是孔径和比表面积是是是是是是是键合相载碳量是是是是是是色谱疏水保留是是是是疏水选择性是是是是空间选择性是是是是氢键容量是是是是对碱性化合物的活性是是是是离子交换容量（pH 2.7）是是是是阴离子交换检测是是正相检测是HILIC保留与选择性色谱柱装填反相装填检测是是是是正相装填检测是是HILI

11、C装填检测是双梯度液相色谱的配置 常规双梯度液相色谱系统常规双梯度液相色谱系统UltiMate 3000，DGP3600SDUltiMate 3000，DGP3600M（微流速系统）UltiMate 3000，DGP3600AB（分析流速；生物兼容系统）UltiMate 3000，DGP3600MB（微流速；生物兼容系统）配常规自动进样器、柱温箱（常规柱切换阀）、各种色谱柱及常规检测器 超高效（超高效（U-HPLC）双梯度液相色谱系统）双梯度液相色谱系统UltiMate 3000，DGP3600RS（RSLC）配RSLC自动进样器（专利的高压进样阀）、柱温箱（高压柱切换阀）、RSLC系列色谱柱

12、及高速紫外（包括DAD）检测器或其他类型的高速检测器11UltiMate 3000 双梯度所能解决的问题1）串联（Tandem）色谱：节省梯度平衡的冲洗时间，提高梯度方法的速度 快速分析-即在不改变已经经过认证的方法的前提下，提高分析速度2）并联（Parallel）色谱：对任何方法，都能通过共享自动进样器及柱温箱来提高一倍的分析速度 不同应用之间的快速切换：一台仪器同时为两种应用作准备，连续不间断运行两个不同应用 3）二维或多维分离：通过 2D 或 3D 提高分离度 3.1）多用于生化及蛋白质组学领域，目前主要集中在微柱、毛细管柱及纳升柱 3.2）包括近年流行的“全自动离线”多维色谱UltiM

13、ate 3000 双梯度所能解决的问题4）样品On-line SPE在线前处理分析集成 SPE 小柱作样品前处理提高自动化直接进较脏的样品（如：血样、食品样等）在线快速脱盐5）辅助系统：提高质谱的灵敏度；提供柱后衍生系统等使用左泵作为辅助泵通过柱后交换流动相增加挥发性有机溶剂比例、调节pH值、或添加辅助试剂以提高质谱的响应值智能化色谱解决方案 串联液相色谱 两个流路：一个用于分析（桔红色）；另一个用于离线色谱柱再生（蓝色）色谱柱在两个流路间切换从运行周期中除去冲洗及平衡色谱柱的时间 缩短运行时间 20-50%加配一个十通阀及同批次柱，带在线色谱柱再生功能用于串联应用的智能化液相色谱解决方案05

14、1015minutes051015minutes原始方法：原始方法：1根色谱柱根色谱柱串联方法：串联方法：2根色谱柱根色谱柱分析在线平衡分析离线平衡C1 离线平衡C2 离线平衡C1 离线平衡C2 离线平衡C1 离线平衡C2 离线平衡C2C1C2C1C2C1C2C1C1C1C1C116=+1 x 双梯度系统双梯度系统（DGLC+2个检测器）个检测器）2 x 单独单独LC系统系统智能化色谱解决方案 并联液相色谱智能化色谱解决方案 并联液相色谱 两套独立的流路共享一个自动进样器及柱温箱；变色龙软件把其配置为两套系统 提供两台独立系统的能力：独立控制；软件管理自动进样器共享可运行不同应用程序下的两套样

15、品橘色位置进样，阀切换，蓝色位置进样加配一个六通及一个检测器共享液相色谱部件智能化色谱解决方案 并联液相色谱Method A (7 min) runs on the right pump and column 1Method B (5 min) runs on the left pump and column 2Inj.Inj.Inj.Inj.Inj.Inj.Inj.Inj.Inj.二维色谱及多维色谱免疫亲和-反相二维色谱不同馏分再次分离012min51015min012min51015min智能化色谱解决方案 两维色谱免疫亲和免疫亲和-反相二维色谱法反相二维色谱法( IMAC-RP-LC)分

16、析磷酰化肽分析磷酰化肽不保留组分的二维分离不保留组分的二维分离保留组分的二维分离保留组分的二维分离免疫免疫亲亲和色和色谱谱不保留不保留组组分分免疫免疫亲亲和色和色谱谱可保留可保留组组分分Valve is in position 1Valve is in position 2一维免疫亲和色谱一维免疫亲和色谱Acclaim C18,120A二维反相分离二维反相分离ABAB 双三元液相色谱在偶氮染料和表面活性剂烷基苯磺酸钠的分析应用在线固相萃取（On-Line SPE）技术 特点：减低手工操作需求、节约时间；且重现性高方便于直接进样；更快、更经济可以自动化；无人照管操作过夜或过周末减少接触对人体有害

17、物质的机会 应用领域：食品及饮料分析实验室环保实验室制药及临床实验室 第一维SPE小柱从基体中分离待测物； 将待测物转移至分析柱上分离、测定(洗脱液无须吹干、定容) 分析过程中，SPE 小柱同时进行清洗、再生方便地、完全自动化 进大体积进样地行复杂样品的前处理样品分馏转移 / 分离分离 / 清洗智能化色谱解决方案 在线固相萃取 / 浓缩123456123456123456聚合物溶液中偶氮二异丁腈（AIBN）的分析 背景：偶氮二异丁腈（ABIN）聚合反应的引发剂。目前测定AIBN含量的方法主要是分光光度法，该方法样品基质干扰大。AIBN本身紫外吸收不是很强，因此灵敏度低。 AIBN的分解温度低，

18、因此检测器 不能用质谱（MS）或者是蒸发光散射检测器（ELSD）。样品沉降聚合物后，对样品溶液进行浓缩，由于此样品溶液中仍含有基质，常规浓缩法氮吹及冻干将基质也一并浓缩，基质干扰大、且易堵柱。 戴安方法采用On-line SPE-HPLC方法，浓缩及检测过程不涉及加热，且大部分基质被在线去除，干扰小。From Beijing Lab-Zhao Xiutai色谱条件：色谱条件：分析柱：Acclaim 120 C18 5um, 4.6 mm x 150 mm SPE柱：Acclaim 120 C18 卡套柱芯， 5 m 4.3*10mm流动相组成：左泵（SPE）：流动相：10%MeAC + 90%

19、H2O流速：1ml/min 右泵（分析）：流动相：50%MeAC+50% H2O流速：1ml/min柱温：20 进样器温度：20 检测波长：346 nm进样量：2.5ml时间（min）阀位置01-276-1131-27.08.810.011.312.513.815.016.318.0-15.00.010.020.011-stUV_VIS_223-stUV_VIS_235-stUV_VIS_247-stUV_VIS_2510-stUV_VIS_2mAUmin54321AIBNWVL:346 nm7.08.810.011.312.513.815.016.318.0-5.012.525.035.01

20、S2UV_VIS_22S2 加标UV_VIS_2mAUmin21AIBNWVL:346 nm聚合物中AIBN分析条件及谱图From Beijing Lab-Zhao Xiutai纺织品中线性十二烷基苯磺酸盐(LAS)的分析 背景：LAS是一种阴离子表面活性剂，生物降解性差，且具有微毒性。欧盟的生态标签(Eco-Labe1)是由欧盟执法委员会根据880/92法令建立的，在其最新标准中，将直链烷基苯磺酸盐(LAS)列入了禁用纺织品助剂的范围。 纺织品中LAS的分析方法：GB 23325-2009 纺织品 表面活性剂的测定 线性烷基苯磺酸盐，方法采用LC-MS/MS分析，检出限为2mg/kg。C10

21、-C14五种化合物的保留时间为4.67-5.23min。 戴安方法利用双三元高效液相系统（DGLC-3600），采用在线固相萃取方式（On-line SPE）对样品进行富集后再进行HPLC检测。100uL样品进样即可达到总含量0.15 mg/kg的检出限（通过增大进样体积还可以进一步降低检出限），该方法突出的优点是实现了不同碳链的LAS色谱峰可达到基线分离，不必使用质谱，紫外检测器即可。灵敏度高，回收率好，在线的SPE柱可重复多次使用，节约了成本，实现了自动化前处理。From Beijing Lab-Zhao XiutaiDetermination of SurfactantLinear Alkylbenzene