生化3第三章核酸化学

1、第三章第三章 核酸化学核酸化学1. 核酸的化学组成结构及其性质核酸的化学组成结构及其性质 2. 核酸的测定方法核酸的测定方法 3. 核酸的研究技术核酸的研究技术 4. 了解人类基因组计划了解人类基因组计划重点：重点：1. RNA. DNA一级结构的测定原理与方法一级结构的测定原理与方法 2.双螺旋结构要点，三叶草结构要点双螺旋结构要点，三叶草结构要点 3. 核酸研究的常用技术及应用核酸研究的常用技术及应用 4. 核酸含量的测定原理与方法核酸含量的测定原理与方法难点：难点：1. DNA一级结构测定的原理与方法一级结构测定的原理与方法 2. 核苷酸的两性离解核苷酸的两性离解 3. 双螺旋结构的要点

2、双螺旋结构的要点教学目的教学目的18681868年，年，F. MiescherF. Miescher从细胞核中分离得到一种酸性物质，从细胞核中分离得到一种酸性物质，即现在被称为核酸的物质。即现在被称为核酸的物质。and可分离可分离核酸的种类和分布核酸分为两大类：核酸分为两大类： 脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸 Deoxyribonucleic Acid Deoxyribonucleic Acid （DNADNA） 核糖核酸核糖核酸 Ribonucleic AcidRibonucleic Acid（RNARNA） 98 98核中（染色体）核中（染色体） 真核真核 线粒体（线粒体（mtDNAmtDNA）

3、 核外核外 质粒（质粒（plasmidplasmid） 叶绿体（叶绿体（ctDNActDNA）DNA DNA 拟核拟核 原核原核 核外：质粒（核外：质粒（plasmidplasmid） 病毒：病毒：DNADNA病毒病毒 mRNA mRNA (5%) (5%) 真核真核 tRNA (10-15%)tRNA (10-15%) rRNA rRNA（80%80%） SnRNASnRNA( (核内）核内） sRNA SnoRNAsRNA SnoRNA( (核仁）核仁）RNA mRNA ScRNARNA mRNA ScRNA( (胞内胞内) ) 原核原核 tRNAtRNA rRNA rRNA 病毒：病毒：

4、RNARNA病毒病毒核酸的功能核酸的功能1、DNA是遗传信息的载体是遗传信息的载体2、RNA的功能的功能 参与遗传与进化参与遗传与进化 参与蛋白质的生物合成参与蛋白质的生物合成 参与参与RNA转录后的加工修饰转录后的加工修饰 参与基因表达调节参与基因表达调节 催化等催化等第一节第一节 核酸的组成成分核酸的组成成分一一. .元素组成元素组成C H O N P(9%-9.9%) C H O N P(9%-9.9%) 核酸核酸核苷酸核苷酸核苷核苷磷酸磷酸碱基碱基戊糖戊糖嘌呤嘌呤嘧啶嘧啶核糖核糖脱氧核糖脱氧核糖核酸酶核酸酶核苷酸酶核苷酸酶核苷酶核苷酶鸟嘌呤鸟嘌呤腺嘌呤腺嘌呤尿嘧啶尿嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胸腺

5、嘧啶胸腺嘧啶RNA:P-9%,DNA:P-9.9%核酸的组成单位：核苷酸核酸的组成单位：核苷酸核酸的组成成分：碱基，戊糖，磷酸核酸的组成成分：碱基，戊糖，磷酸二二. . 组成成分及组成单位组成成分及组成单位 （一）、戊糖（一）、戊糖组成核酸的戊糖有两种。组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为所含的糖为 -D-2-脱氧核糖；脱氧核糖；RNA所含的糖则为所含的糖则为-D-核糖。核糖。OHHOHHOHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHHOHHD-核糖D-2-脱氧核糖NNNHNNH2腺嘌腺嘌AdenineNHNNHNONH2鸟嘌呤鸟嘌呤guanine尿嘧啶尿嘧啶uracilNHNHOO胞胞嘧啶嘧啶

6、CytidineNNHNH2ONHNHOOH3C胸胸腺嘧啶腺嘧啶Thy核苷核苷 戊糖戊糖+ +碱基碱基 糖与碱基之间的糖与碱基之间的C-NC-N键，称为键，称为C-NC-N糖苷键糖苷键(OH)(OH)胞嘧啶核苷尿嘧啶核苷鸟嘌呤核苷腺嘌呤核苷NNOHHONNNH2HONNOHH2NNNNNNNNH2OHHOHHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHOHHOHHOHHOHHHOCH2OHHOHHOHHHOCH2胞嘧啶核苷尿嘧啶核苷鸟嘌呤核苷腺嘌呤核苷NNOHHONNNH2HONNOHH2NNNNNNNNH2OHHOHHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHOHHOHHOHHOHHHOCH2OHHO

7、HHOHHHOCH2腺嘌呤脱氧核苷腺嘌呤脱氧核苷鸟嘌呤脱氧核苷鸟嘌呤脱氧核苷胸腺嘧啶脱氧核苷胸腺嘧啶脱氧核苷胞嘧啶脱氧核苷胞嘧啶脱氧核苷HHHHCH3OH次黄苷（肌苷）次黄苷（肌苷）I黄嘌呤核苷黄嘌呤核苷 X二氢尿嘧啶核苷二氢尿嘧啶核苷 D取代核苷的表示方式取代核苷的表示方式7-7-甲基鸟苷甲基鸟苷 m m7 7G G（四）、核苷酸（四）、核苷酸（nucleotide）H（五）（五）.核苷酸衍生物核苷酸衍生物1.1.继续磷酸化继续磷酸化O-POO-NNNNN H2OHHO HHO HHO C H2O-POO-O-POO-三磷酸腺苷 (ATP)AMPADPATP核酸中也存在一些不常见的稀有碱基。

8、稀有碱基的种类很多，核酸中也存在一些不常见的稀有碱基。稀有碱基的种类很多，大部分是上述碱基的甲基化产物。大部分是上述碱基的甲基化产物。2.稀有碱基稀有碱基3.3.环化磷酸化环化磷酸化l cAMPl cGMP4.4.肌苷酸及鸟苷酸肌苷酸及鸟苷酸( (强力味精强力味精) )IMP GMP第二节、第二节、RNARNA的分子的分子结构结构一、一、 RNARNA的一级结构的一级结构（一）连接方式（一）连接方式55335PdAPdCPdGPdTOH 3 5PAPCPGPUOH 或5ACGTGCGT 3 5ACGUAUGU 3 ACGTGCGT ACGUAUGUT53OH U53OH l5-5-磷酸端（常用

9、磷酸端（常用5-P5-P表示）；表示）；3-3-羟基端（常用羟基端（常用3-OH3-OH表表示）示）l多聚核苷酸链具有方向性，当表示一个多聚核苷酸链时，必须多聚核苷酸链具有方向性，当表示一个多聚核苷酸链时，必须注明它的方向是注明它的方向是5353或是或是3535。多聚核苷酸的表示方式多聚核苷酸的表示方式DNARNA二、二、RNA的降解的降解1、RNA的化学降解的化学降解n碱降解：碱降解：RNA用稀碱降解产物为用稀碱降解产物为2-核苷酸和核苷酸和3-核苷酸混合物。核苷酸混合物。DNA抗碱抗碱(高温不抗碱高温不抗碱)n酸降解：水解速度酸降解：水解速度 嘌呤糖苷键嘌呤糖苷键 嘧啶糖苷键嘧啶糖苷键 脱

10、氧核糖糖苷键脱氧核糖糖苷键核糖糖苷键核糖糖苷键 糖苷键糖苷键脂键脂键n在低温的酸性条件下在低温的酸性条件下DNA，RNA则稳定则稳定2.酶法降解酶法降解核酸酶有核酸酶有:外切酶，内切酶和磷酸酯酶外切酶，内切酶和磷酸酯酶 牛胰牛胰RNaseI 产物：产物：3-嘧啶核苷酸（结尾）嘧啶核苷酸（结尾） 内切酶内切酶 Rnase T1 产物：产物：3-鸟嘌呤核苷酸（结尾）鸟嘌呤核苷酸（结尾） Rnase U2 产物：产物：3-嘌呤核苷酸（结尾）嘌呤核苷酸（结尾） SPDase (牛脾牛脾) 5-端开始，产物：端开始，产物：3-核苷酸核苷酸 外切酶外切酶 VPDase (蛇毒蛇毒)3-端开始，产物：端开始

11、，产物：5-核苷酸核苷酸 磷酸单酯酶（磷酸单酯酶（PNase） 5-磷酸磷酸 三、三、RNA一级结构的测定一级结构的测定 用用-32p ATP标记标记5末端末端（一）、末端基团分析（一）、末端基团分析1、碱解、碱解5- pGGCCGAoH3 pGp+2Gp+2Cp+A2、外切酶、外切酶 : 如：如：SPDase5- pGGCCGAoH3 pGp+2Gp+2Cp+A3、末端标记、末端标记（二）酶的部分降解及产物的分离（二）酶的部分降解及产物的分离1、尿素柱层析、尿素柱层析2、双向电泳、双向电泳3、凝胶电泳、凝胶电泳（三）小片段核苷酸的顺序测定（三）小片段核苷酸的顺序测定1 1、按序降解法、按序降

12、解法2 2、核酸酶外切酶部分降解法、核酸酶外切酶部分降解法3 3、核酸内切酶降解法、核酸内切酶降解法（四）（四）. .由小片段核苷酸的顺序推测由小片段核苷酸的顺序推测RNARNA分子顺序分子顺序 pAGCUG pAGCU +GpAGCUG pAGC+U+G pAG+C+U+G pA+G+C+U+G VPDase（一）（一）RNA的二级结构的二级结构四四.RNA的高级结构的高级结构占占RNA总量的总量的15一种氨基酸对应最少一种一种氨基酸对应最少一种RNA分子量分子量25000左右，大约由左右，大约由7090个核苷酸组成，沉降系数为个核苷酸组成，沉降系数为4S左右。左右。l分子中含有较多的修饰成

13、分。分子中含有较多的修饰成分。l3-末端都具有末端都具有CpCpAOH的结构。的结构。1.特点特点2.三叶草结构要点三叶草结构要点（二）（二）tRNAtRNA的三级结构的三级结构第三节第三节 DNADNA的分子结构的分子结构一级结构及测定一级结构及测定1.加减法加减法2.双脱氧法双脱氧法3.化学修饰法化学修饰法二二.DNA.DNA的二级结构的二级结构2.0 nm小小沟沟大大沟沟 双螺旋双螺旋DNADNA的结构参数的结构参数类型类型旋转方向旋转方向结晶状态结晶状态螺旋直径螺旋直径（nm）螺距螺距（nm）每转碱基每转碱基对数目对数目碱基对间碱基对间垂直距离垂直距离（nm）碱基旋转角碱基旋转角度度A

14、DNABDNAC- DNAzDNA右右75%Na+右右92%Na +右右66%Li +左左 人工合成人工合成2.02.31.921.82.83.43.14.511109.3120.2550.340.330.2732.73638-60H-DNA三、三、DNADNA的三级结构的三级结构DNADNA双螺旋的进一步双螺旋的进一步扭曲构成三级结构，扭曲构成三级结构，负超螺旋负超螺旋 原核原核 双链环状双链环状DNADNA（dcDNAdcDNA） 病毒病毒 单链环状单链环状DNADNA（scDNAscDNA） 单链线性单链线性DNADNA（ssDNAssDNA）第四节第四节 核酸及核苷酸的性质核酸及核苷酸

15、的性质一、溶解性一、溶解性DNA在在PH4.2时溶解度最低。时溶解度最低。RNA在在PH2-2.5时溶解度最低。时溶解度最低。1.水溶水溶性性微微 溶于水，不溶于有机溶剂溶于水，不溶于有机溶剂,水中水中溶解度溶解度DNA达达2%，RNA达达4%2.盐溶性盐溶性DNA-蛋白，溶于蛋白，溶于1mol/L Nacl ，低盐不溶。，低盐不溶。 RNA-蛋白，溶于蛋白，溶于0.14mol/L Nacl ，高盐不溶。，高盐不溶。3.不同不同PH的溶解性的溶解性二二. .两性性质两性性质1.1.腺嘌呤腺嘌呤2.2.鸟嘌呤鸟嘌呤: :4.4.尿嘧啶尿嘧啶 胸腺嘧啶胸腺嘧啶3.3.胞嘧啶胞嘧啶核苷酸两性离解及等

16、电点核苷酸两性离解及等电点三、核酸的紫外吸收特性三、核酸的紫外吸收特性在核酸分子中，由于在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸具有独特的紫外线吸收光谱，一般在收光谱，一般在260260nmnm左右有最大吸收峰，左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组可以作为核酸及其组份定性和定量测定的份定性和定量测定的依据。依据。以以A A260260/A/A280280进行定性、进行定性、定量定量DNADNA和和RNARNA溶液中加入溶液中加入溴化乙锭（溴化乙锭（EBEB），在），在紫外下发出荧光紫外下发出荧光四、核酸的变性与复性四、核酸的变

17、性与复性（一）（一）. . 变性变性变性变性: :稳定核酸双螺旋次级键断裂，稳定核酸双螺旋次级键断裂，空间结构破坏，变成单链结构的过空间结构破坏，变成单链结构的过程。核酸的的一级结构程。核酸的的一级结构( (碱基顺序碱基顺序) )保持不变。保持不变。变性表征变性表征: : 生物活性部分丧失、粘度下降、生物活性部分丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效应）色效应）变性因素变性因素: : pHpH（11.311.3或或5.05.0）变性剂（脲、）变性剂（脲、甲酰胺、甲醛），低离子强度甲酰胺、甲醛），低离子强度 加热加热热变性和热变性和T Tm m : :D

18、NADNA的变性过程的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将紫外吸收的增加量达最大量一半时的温度称熔解温度，用通常将紫外吸收的增加量达最大量一半时的温度称熔解温度，用T Tm m表示。表示。 一般一般DNADNA的的T Tm m值在值在70-8570-85 C C之间。之间。DNADNA的的T Tm m值与分子中的值与分子中的G G和和C C的的含量有关。含量有关。G G和和C C的含量高，的含量高，T Tm m值高。因而测定值高。因而测定TmTm值，可反映值，可反映DNADNA分分子中子中G, CG, C含量，可通过经验公式计算

19、：（含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)G+C)%=(Tm-69.3)* *2.442.44（二）（二）. . 核酸的复性核酸的复性变性核酸的互补链在适当的条件下，重新缔合成为双螺旋结构变性核酸的互补链在适当的条件下，重新缔合成为双螺旋结构的过程称为的过程称为复性复性。DNADNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复，具有减色效应。到部分的恢复，具有减色效应。将热变性的将热变性的DNADNA骤然冷却至低温时，骤然冷却至低温时，DNADNA不可能复性。变性的不可能复性。变性的DNADNA缓慢冷却

20、时可复性，因此又称为缓慢冷却时可复性，因此又称为“退火退火”。 退火温度退火温度T Tm m2525复性影响因素复性影响因素 片段浓度片段浓度/ /片段大小片段大小/ /片段复杂性（重复序列数目）片段复杂性（重复序列数目）/ / 纯度纯度/ /溶液离子强度溶液离子强度 第五节第五节 核酸及其组分的分离纯化与测定核酸及其组分的分离纯化与测定一一. .分离纯化的一般原则分离纯化的一般原则1.1.防止核酸酶降解防止核酸酶降解2.2.防止化学因素降解防止化学因素降解3.3.防止物理因素降解防止物理因素降解二二.DNA.DNA的分离纯化的分离纯化三三.RNA.RNA的分离纯化的分离纯化四四. .核酸组分

21、的分离纯化核酸组分的分离纯化 破细胞（破细胞（1 1mol/LNACLmol/LNACL） 离心去沉淀（含离心去沉淀（含RNA-PrRNA-Pr） 上清（含上清（含DNA-PrDNA-Pr） SDSSDS法法/ /酚法（去蛋白）酚法（去蛋白） 离心去沉淀（变性蛋白）离心去沉淀（变性蛋白） 上清（含上清（含DNADNA） 乙醇沉淀乙醇沉淀 离心收集沉淀（离心收集沉淀（DNADNA） 细胞（饱和酚处理）细胞（饱和酚处理）离心去沉淀（含离心去沉淀（含DNA-PrDNA-Pr）上清液调节上清液调节PIPI（RNA PIRNA PI） 离心去上清离心去上清收集沉淀（总收集沉淀（总RNARNA）不同的不同

22、的RNARNA分离时可用：分离时可用： DEAE-SephadexDEAE-Sephadex 超离心超离心 Olig-dtOlig-dt 亲和层析亲和层析1.1.离子交换法：离子交换法：四种核苷酸之间的分离采用离子交换法四种核苷酸之间的分离采用离子交换法 阳离子交换剂洗脱次序：阳离子交换剂洗脱次序：理论次序理论次序 U G A CU G A C实际次序实际次序 U G C AU G C A阴阴离子交换剂洗脱次序：离子交换剂洗脱次序：理论次序理论次序 C A G C A G U U实际次序实际次序 C A U GC A U G2.凝胶过滤法凝胶过滤法: :碱基碱基, ,核苷核苷, ,核苷酸之间的

23、分离采用核苷酸之间的分离采用SephadexSephadex-G10/G25-G10/G25洗脱次序：核苷酸洗脱次序：核苷酸 核苷核苷 碱基碱基核苷一磷酸核苷一磷酸, ,核苷二磷酸核苷二磷酸, ,核苷三磷酸的分离采用柱层析和核苷三磷酸的分离采用柱层析和薄层层析法分离薄层层析法分离. . 柱层析洗脱次序柱层析洗脱次序 AMP ADP ATPAMP ADP ATP 薄层层析迁移次序薄层层析迁移次序 AMP ADP ATPAMP ADP ATP3.DEAE-3.DEAE-纤维素法纤维素法: : 五五.核酸及其组分含量的核酸及其组分含量的测定与纯度测定测定与纯度测定（一）（一）. .核酸含核酸含 量的

24、测定方法量的测定方法1.1.紫外吸收法紫外吸收法1ug1ug/ml DNA A/ml DNA A260260 = 0.02 1A = 0.02 1A260260 = 50 Ug = 50 Ug/ml DNA/ml DNA1ug/ml RNA A1ug/ml RNA A260260 = 0.022-0.024 1A = 0.022-0.024 1A260260 = 40 Ug = 40 Ug/ml RNA/ml RNA2.2.定糖法定糖法 (20-250(20-250ugug RNA,40-400ug DNA) RNA,40-400ug DNA)苔黑酚法：苔黑酚苔黑酚法：苔黑酚+ +核糖核糖+

25、+浓浓HClHCl+FeCl+FeCl3 3 绿色绿色 A A670-680670-680二苯胺法：二苯胺二苯胺法：二苯胺+ +脱氧核糖脱氧核糖+ +浓浓H H2 2SOSO4 4 蓝色蓝色 A A595-620595-6203.3.定磷法定磷法 (10-100(10-100ug ug 核酸核酸) )4.4.凝胶电泳凝胶电泳EB( 0.5ug/ml)EB( 0.5ug/ml)染色染色, , 最小检出量最小检出量1 1ngngVitCVitCH H3 3POPO4 4 + +钼酸铵钼酸铵 黄色磷钼酸铵黄色磷钼酸铵 磷钼蓝磷钼蓝 A A650-660650-660（二）（二）. 核酸纯度的核酸纯度

26、的测定测定1.1.紫外吸收法紫外吸收法测定测定A260与与A280A260A280=1.8-2.01.8-2.0DNA:DNA:2.2.凝胶电泳凝胶电泳3.3.等密度梯度等密度梯度2.02.0RNA:RNA:A260A280第六节第六节核酸研究的常用技术核酸研究的常用技术一一.DNA.DNA的凝胶电泳的凝胶电泳（一）琼脂糖凝胶电泳（一）琼脂糖凝胶电泳1.1.琼脂糖凝胶浓度及选择琼脂糖凝胶浓度及选择2.2.琼脂糖凝胶电泳的分辨率琼脂糖凝胶电泳的分辨率3.3.琼脂糖凝胶电泳的用途琼脂糖凝胶电泳的用途( (分离分离, ,测量测量, ,回收回收, ,印迹印迹) )（二）（二）PAGEPAGE电泳电泳1

27、. PAGE1. PAGE浓度及选择浓度及选择2. PAGE2. PAGE电泳的分辨率电泳的分辨率3.PAGE3.PAGE电泳的用途电泳的用途（三）影响凝胶电泳（三）影响凝胶电泳RfRf值的因素值的因素1.1.分子大小分子大小 2.2.分子构象分子构象 3.3.凝胶浓度凝胶浓度4.4.电流电压电流电压 5.5.温度温度二二. .印迹技术与分子杂交印迹技术与分子杂交（一）（一）. .印迹技术印迹技术概念概念: :核酸的杂交中，经过凝胶电泳分离的核酸的杂交中，经过凝胶电泳分离的DNA/RNADNA/RNA分子，杂交分子，杂交之前通过毛细管吸附作用之前通过毛细管吸附作用/ /电导作用将凝胶中电导作用

28、将凝胶中DNA/RNADNA/RNA分子原封分子原封不动地转移到滤膜上。不动地转移到滤膜上。滤膜滤膜: :硝酸纤维素滤膜，硝酸纤维素滤膜， DEAE-DEAE-纤维素滤膜纤维素滤膜印迹种类印迹种类: :Southern blotting:Southern blotting:（19751975）Northern blotting:Northern blotting:（19791979，AlwineAlwine) )（19791979，Towbin,Immunoblotting-Western;1982, ReihartTowbin,Immunoblotting-Western;1982, Rei

29、hart,Eastern),Eastern)电转移技术电转移技术: :(1983,(1983,AubertinAubertin) )（二）（二）. .核酸杂交核酸杂交核酸杂交的概念核酸杂交的概念:DNA:DNA单链与在某些区域有互补序列的异源单链与在某些区域有互补序列的异源DNADNA单链或单链或RNARNA链形成双螺旋结构的过程。这样形成的新分子称为链形成双螺旋结构的过程。这样形成的新分子称为杂交杂交DNADNA分子分子。核酸杂交方法：核酸杂交方法： Southern blottingSouthern blotting杂交技术杂交技术: : Northern blotting Norther

30、n blotting杂交技术杂交技术: : 点杂交技术点杂交技术: : 菌落菌落/ /噬菌体的原位杂交技术噬菌体的原位杂交技术: :（三）（三）. .杂交检测方法杂交检测方法放射自显影放射自显影点杂交点杂交三三.PCR.PCR技术技术- -DNA PolymeraseDNA Polymerase Chain Reaction Chain Reaction（一）基本步骤（一）基本步骤引物引物1 1pmol/ulpmol/ul,dNTP200umol/l,dNTP200umol/l,TaqTaq酶酶2 2u/100ulu/100ul94 94 c c5-10min5-10min褪火褪火45s-60

31、s保保温温72 72 c1min（二）（二）PCRPCR技术的应用技术的应用1. 1. 遗传病，疑难病的诊断及产前检查遗传病，疑难病的诊断及产前检查2 .2 .病原体的检测病原体的检测3 .3 .癌基因的检查癌基因的检查4 .4 .基因组测序基因组测序5 .5 .基因探针的制备基因探针的制备6 .6 .基因突变的分析及定位诱变基因突变的分析及定位诱变7 .7 .cDNAcDNA库的构建库的构建,DNA,DNA重组重组, ,基因分离与克隆基因分离与克隆8. 8. 法医及刑事鉴定法医及刑事鉴定（三）（三） PCRPCR技术的特点技术的特点1 .1 .引物引物設設计计:(:(引物的长度一般为引物的长

32、度一般为18182525bpbp) ) 扩扩増増长度一般在长度一般在200200800800bpbp之间之间2 .2 .扩扩増増效率效率: 2: 2n n,DNA,DNA量增加量增加10106 610109 9倍倍3 .3 .扩扩増増温度温度: G: GC C含量和含量和TmTm值值, ,一般在一般在404060%60%之间，之间， 两条相差两条相差2 23 , 72 .3 , 72 .4.4.末端核苷酸末端核苷酸:3:3端不得有任何修饰端不得有任何修饰第七节人类基因组计划简介第七节人类基因组计划简介一.人类基因组计划概况人类基因组计划概况概况概况: : 1986 1986年，由年，由R.DulbeccoR.Dulbecco提出提出(Science)(Science)人类基因组计划人类基因组计划( (human genome p