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文档简介
1、转基因植物图片2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong番木瓜优良抗病品种番木瓜优良抗病品种 2022-5-6Copyright Jiangyong金大米金大米 2022-5-6Copyright Jiangyong地雷探测草地雷探测草 拟南芥拟南芥2022-5-6Copyright Jiangyong不会引起过敏的大豆不会引起过敏的大豆 2022-5-6Copyright Jiangyong转基因芥菜可减轻土壤污染转基因芥菜可减轻土壤污染 2022-5-6Copyright Jiangyong彩色玉米彩色玉米2022-5-6C
2、opyright Jiangyong巨型鲑鱼巨型鲑鱼 2022-5-6Copyright Jiangyong荧光鱼荧光鱼 2022-5-6Copyright Jiangyong超级奶牛超级奶牛 2022-5-6Copyright Jiangyong培育出人耳的小鼠培育出人耳的小鼠2022-5-6Copyright Jiangyong转基因猪转基因猪2022-5-6Copyright Jiangyong 2022-5-6Copyright Jiangyong理论基础理论基础 uDNADNA是遗传物质的证明是遗传物质的证明uDNADNA双螺旋结构和中心法则的确立双螺旋结构和中心法则的确立u遗传密码
3、的破译遗传密码的破译工程技术工程技术u基因转移载体的发现基因转移载体的发现u工具酶的发现工具酶的发现uDNADNA合成和测序技术的发现合成和测序技术的发现uDNADNA体外重组的实现体外重组的实现u重组重组DNADNA表达实验的成功表达实验的成功u第一例转基因动物的问世第一例转基因动物的问世uPCRPCR技术的发明技术的发明2022-5-6Copyright Jiangyong 基因的剪刀基因的剪刀限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 基因的针线基因的针线DNADNA连接酶连接酶 基因的运输工具基因的运输工具运载体运载体分子手术刀分子手术刀-限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶( (限制酶限制酶) )
4、磷酸二酯键磷酸二酯键 EcoRI、SmaI限制酶限制酶提醒提醒 切割的化学键为切割的化学键为磷酸二酯键。磷酸二酯键。在切割目的基因在切割目的基因和运载体时要求用和运载体时要求用同一种限制酶,目同一种限制酶,目的是产生相同的黏的是产生相同的黏性末端。性末端。将一个基因从将一个基因从DNADNA分子上切割下分子上切割下来,需要来,需要2 2个限制个限制酶,同时产生酶,同时产生4 4个个黏性末端黏性末端2022-5-6Copyright Jiangyong限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶( (限制酶限制酶) )来源:来源:主要从原核生物中分离主要从原核生物中分离化学本质:化学本质:蛋白质蛋白质作用:
5、作用:能够识别双链能够识别双链DNADNA分子的某种特定分子的某种特定核苷酸序列,并使每一条链中特定部位的核苷酸序列,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。特性:特性:特异性。即限制酶识别特定的脱氧特异性。即限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列,切割特定位点核苷酸序列,切割特定位点切割后的切割后的DNADNA末端末端:黏性末端;平末端:黏性末端;平末端分子缝合针分子缝合针-DNA-DNA连接酶连接酶种类种类T T4 4 DNA DNA连接酶:连接酶:既能既能“缝合缝合”双链双链DNADNA片段互补的黏性末端,片段互补的黏性末端,也能也能“缝合缝合”双
6、链双链DNADNA的平末的平末端(效率低)端(效率低)Ecoli DNAEcoli DNA连接酶:连接酶:只能将只能将双链片段互补的黏性末端连接双链片段互补的黏性末端连接常用载体常用载体 质粒质粒 噬菌体的衍生物噬菌体的衍生物 动植物病毒动植物病毒基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体(分子运输车)(分子运输车)2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong (1) (1)载体是基因运输工具,在基因操作过程中,载体是基因运输工具,在基因操作过程中,使用载体有使用载体有两个目的两个目的:一是用它作为运载工具,:一是用它作为运载工
7、具,将目的基因送到宿主细胞中去;二是利用它在宿将目的基因送到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)(2)种类种类:质粒:质粒( (既存在于原核生物细菌中,也存既存在于原核生物细菌中,也存在于真核生物酵母菌中在于真核生物酵母菌中) )、噬菌体的衍生物、动噬菌体的衍生物、动植物病毒。植物病毒。 (3) (3)本质本质:DNA(DNA(其中质粒为环状其中质粒为环状DNADNA分子分子) ) (4) (4)作为载体必须具备作为载体必须具备三个条件三个条件: 能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 有有1 1个或
8、多个限制酶切点,以便与外源基因连接。个或多个限制酶切点,以便与外源基因连接。 具有某些标记基因,以便进行筛选。具有某些标记基因,以便进行筛选。2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong注意问题注意问题(1)(1)一般来说,天然载体往往不能同时具一般来说,天然载体往往不能同时具备载体必须具备的条件,所以在基因工备载体必须具备的条件,所以在基因工程中需要根据不同的和需要,对载体进程中需要根据不同的和需要,对载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。乎都是经过改建的。2022-5-6C
9、opyright Jiangyong (2) (2)作为载体必须具有多个限制酶切点,而作为载体必须具有多个限制酶切点,而且每种酶的切点且每种酶的切点最好只有一个最好只有一个。因为某种限。因为某种限制性内切酶只能识别单一切点,若载体上有制性内切酶只能识别单一切点,若载体上有一个以上的酶切点,则切割重组后可能丢失一个以上的酶切点,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点,则酶切后既若只有某种限制酶的一个切点,则酶切后既能把环打开接纳外源能把环
10、打开接纳外源DNADNA片段,又不会丢失片段,又不会丢失自己的片段。自己的片段。2022-5-6Copyright Jiangyong(3)(3)大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等细大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等细菌中都有质粒。它存在于细菌的细胞质中,菌中都有质粒。它存在于细菌的细胞质中,上面一般含几个到几百个基因,控制着细上面一般含几个到几百个基因,控制着细菌的抗药性、固氮、抗生素合成等性状。菌的抗药性、固氮、抗生素合成等性状。由于土壤农杆菌很容易感染植物细胞,使由于土壤农杆菌很容易感染植物细胞,使细胞生有瘤状物。所以科学家培育转基因细胞生有瘤状物。所以科学家培育转基因植物时,常常用土壤农杆
11、菌中的质粒做载植物时,常常用土壤农杆菌中的质粒做载体。体。(4)(4)注意与细胞膜上载体的区别,两者的化注意与细胞膜上载体的区别,两者的化学本质和作用都不相同。学本质和作用都不相同。操作操作在绿色纸上写上在绿色纸上写上GGCTCCCGGGAATTCATTTTGCCGAGGGCCCTTAAGTAAAAC 在红色纸上写上在红色纸上写上 TCCCGGGAATTCCCGGGAATTCTA AGGGCCCTTAAGGGCCCTTAAGAT 如果用如果用EcoR限制酶,情况限制酶,情况? 用什么酶连接?用什么酶连接?如果用如果用Sma限制酶,情况限制酶,情况? 用什么酶连接?用什么酶连接?操作中涉及到的用具和材料分别操作中涉及到的用具和材料分别 绿色纸绿色纸 红色纸红色纸 剪刀剪刀 透明胶条透明胶条 连接好的绿红纸条连接好的绿红纸条归纳归纳 什么是基因工程什么是基因工程? P1? P1 什么水平什么水平? ? 原理?变异种类?基因重组种类?原理?变异种类?基因重组种类? 几种酶几种酶DNADNA连接酶、聚合酶、限制酶、解旋连接酶、聚合酶、限制酶、解旋酶酶(解旋哪里断开,复制哪里接上去,什(解旋哪里断开,复制哪里接上去,什么时候用到?)么时候用到?)2022-5-6Copyright Jiangyong基因工程的别名基因工程的别名基因拼接技术或基
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