基因工程克隆技术高考生物复习知识落实专题

1、基因工程克隆技术高考生物复习知识落实专题题组题组1基因工程基因工程1(2010全国全国，5)下列叙述符合基因工程概念的是下列叙述符合基因工程概念的是 () AB淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗淋巴细胞中的抗 体基因体基因 B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干 扰素的菌株扰素的菌株 C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素发生改变，通过筛选获得青霉素 高产菌株高产菌株 D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其自

2、然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌整合到细菌 DNA上上B第1页/共34页解析解析：基因工程是在生物体外，通过对基因工程是在生物体外，通过对DNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切”和和“拼拼接接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使目的基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产性繁殖，使目的基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。所以物。所以B为基因工程，而为基因工程，而A为动物细胞工程，为动物细胞工程，C为诱变育种，为诱变育种，D无人为无人为因素不属于基因工程。因素不

3、属于基因工程。第2页/共34页2(20102010浙江理综，浙江理综，2 2)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过 程中，下列操作错误的是程中，下列操作错误的是 () A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B用用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C将重组将重组DNA分子导入烟草原生质体分子导入烟草原生质体 D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞A第3页/共34页解析解析：限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花

4、叶病毒限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒的遗传物质是的遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；项错误；DNA连连接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，B项正确；受体细胞项正确；受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，C项正确；项正确；目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因

5、细胞，草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，D项正项正确。确。第4页/共34页题组题组2克隆技术克隆技术6(2010广东理综，广东理综，24)新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。 下列技术下列技术(或仪器或仪器)与应用匹配正确的是与应用匹配正确的是(双选双选) () APCR技术技术扩增蛋白质扩增蛋白质 B杂交瘤技术杂交瘤技术制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C光学显微镜光学显微镜观察叶绿体的基粒观察叶绿体的基粒 D花粉离体培养花粉离体培养培育单倍体植物培育单倍体植物BD第5页/共34页7(2010浙江理综，浙江理综，4)下列关于动物细

6、胞培养的叙述，正确的是下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是 () A培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D恶性细胞系的细胞可进行传代培养恶性细胞系的细胞可进行传代培养 解析解析：由于接触抑制，动物细胞培养时只能形成单层细胞，由于接触抑制，动物细胞培养时只能形成单层细胞，A项错项错 误；克隆培养法在培养时，由于所有子代细胞来自于一个亲代细误；克隆培养法在培养时，由于

7、所有子代细胞来自于一个亲代细 胞，所以基因型一般都相同，胞，所以基因型一般都相同，B项错误；二倍体细胞的传代培养次数项错误；二倍体细胞的传代培养次数 通常是有限的，只有少数细胞遗传物质发生改变，才能无限增殖，通常是有限的，只有少数细胞遗传物质发生改变，才能无限增殖，C 项错误；恶性细胞系的细胞具有癌变的特点，可进行传代培养，项错误；恶性细胞系的细胞具有癌变的特点，可进行传代培养，D项项 正确。正确。 答案答案：D第6页/共34页考点考点1基因工程相关知识考查基因工程相关知识考查1基因工程的基本工具的比较基因工程的基本工具的比较限制酶限制酶DNA连接酶连接酶载体载体作用作用切割目的基因和载体切割

8、目的基因和载体拼接拼接DNA片段，形成片段，形成重组重组DNA携带目的基因进携带目的基因进入受体细胞入受体细胞作用作用部位部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键酯键第7页/共34页作用作用特点特点(条件条件)(1)识别特定的核识别特定的核苷酸序列苷酸序列(2)在特定位点上在特定位点上切割切割(1)EcoliDNA连接酶连接酶只能连接黏性末端只能连接黏性末端(2)T4DNA连接酶能连连接酶能连接黏性末端和平末端接黏性末端和平末端(1)能在宿主细胞内能在宿主细胞内稳定存在并大量复稳定存在并大量复制制(2)有多个限制酶切有多个限制酶切割位点割位点(3)具

9、有特殊的标记具有特殊的标记基因基因常用常用类型类型EcoR限制酶限制酶Sma限制酶限制酶EcoliDNA连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶质粒、质粒、噬菌体的衍噬菌体的衍生物、动植物病毒生物、动植物病毒第8页/共34页2.将目的基因导入受体细胞中的方法的比较将目的基因导入受体细胞中的方法的比较生物种类生物种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞常用方法常用方法农杆菌转化法农杆菌转化法显微注射法显微注射法Ca2处理法处理法受体细胞受体细胞体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞转化过程转化过程目的基因插入目的基因插入Ti质质粒的粒的T-DNA上上农杆菌农杆菌导入植物导入植物细胞细

10、胞整合到受体整合到受体细胞的染色体细胞的染色体DNA表达表达目的基因表达载目的基因表达载体提纯提纯体提纯提纯取取卵卵(受精卵受精卵)显微显微注射注射受精卵发受精卵发育育获得具有新获得具有新性状的动物性状的动物Ca2处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞重重组表达载体与感组表达载体与感受态细胞混合受态细胞混合感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNA分子分子第9页/共34页3.PCR技术与技术与DNA复制的比较复制的比较DNA复制复制PCR技术技术区区别别场所场所细胞内细胞内(主要在细胞核内主要在细胞核内)细胞外细胞外(主要在主要在PCR扩增仪内扩增仪内)酶酶DNA解旋酶、普通的解旋酶、普通的DNA聚合酶

11、等聚合酶等耐热的耐热的DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)温度条温度条件件细胞内温和条件细胞内温和条件需控制温度，在较高温度下进需控制温度，在较高温度下进行行合成的合成的对象对象DNA分子分子DNA片段或基因片段或基因联系联系模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成原料：均为四种脱氧核苷酸原料：均为四种脱氧核苷酸(即即dCTP、dATP、dGTP和和dTTP)酶：均需要酶：均需要DNA聚合酶进行催化聚合酶进行催化引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的聚合酶从引物的3端开端开始连接脱氧核苷酸始连接脱氧核苷酸第10页/共34页4.目

12、的基因的检测内容和方法的比较目的基因的检测内容和方法的比较类型类型步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子水平分子水平检测检测第一步第一步目的基因是否插目的基因是否插入受体细胞染色入受体细胞染色体的体的DNA上上DNA分子杂交分子杂交技术技术(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第二步第二步目的基因是否转目的基因是否转录出录出mRNA核酸分子杂交核酸分子杂交技术技术(DNA和和mRNA之间之间)同上同上第三步第三步目的基因是否翻目的基因是否翻译出蛋白质译出蛋白质蛋白质分子杂蛋白质分子杂交交(抗原抗原抗体抗体之间之间)同上同上个体水平个体水平鉴定鉴定包括

13、抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等定功能是否相同等第11页/共34页5.两种基因治疗途径及其特点两种基因治疗途径及其特点途径途径方法方法特点特点不同点不同点体外基因体外基因治疗治疗从患者体内获得某种、细胞扩从患者体内获得某种、细胞扩增增输入体内输入体内(实例中第一个实例中第一个)操作复杂，但操作复杂，但效果较为可靠效果较为可靠体内基因体内基因治疗治疗直接向患者体内组织中转移基直接向患者体内组织中转移基因因(实例中第二个实例中第

14、二个)方法简便，但方法简便，但效果难以控制效果难以控制相同点相同点都属于基因治疗，都是将正常的外源基因导入靶细胞，以都属于基因治疗，都是将正常的外源基因导入靶细胞，以代替、修复、纠正缺陷基因。目前两种方法都处于临床实代替、修复、纠正缺陷基因。目前两种方法都处于临床实验阶段验阶段第12页/共34页6.基因工程的应用基因工程的应用表现方面表现方面具体内容具体内容植物基因工程植物基因工程抗虫转基因植物抗虫转基因植物抗病转基因植物抗病转基因植物抗逆转基因植物抗逆转基因植物利用转基因改良植物品质利用转基因改良植物品质动物基因工程动物基因工程提高动物生长速度提高动物生长速度用转基因动物生产药物用转基因动物

15、生产药物(如乳腺生物反应器如乳腺生物反应器)用转基因动物作器官移植的供体用转基因动物作器官移植的供体用于改善畜产品的品质用于改善畜产品的品质基因工程药物基因工程药物控制药品合成的相应基因控制药品合成的相应基因基因治疗基因治疗体外基因治疗体外基因治疗体内基因治疗体内基因治疗第13页/共34页7.基因工程与蛋白质工程的比较基因工程与蛋白质工程的比较项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别过程过程设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构设设计预期的蛋白质结构计预期的蛋白质结构推测推测氨基酸序列氨基酸序列找到对应的脱找到对应的脱氧核苷酸序列氧核苷酸序列合成合成DNA表达出蛋白质表达出蛋白质

16、获取目的基因获取目的基因构建表达载构建表达载体体导入受体细胞导入受体细胞目的基目的基因的检测与鉴定因的检测与鉴定实质实质定向改造或生产人类所需的定向改造或生产人类所需的蛋白质蛋白质定向改造生物的遗传特性，定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型以获得人类所需的生物类型或生物产品或生物产品结果结果生产自然界没有的蛋白质生产自然界没有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质联系联系蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋

17、白质，必须通过基因修饰或基因合成实现过基因修饰或基因合成实现第14页/共34页1对对DNA连接酶、连接酶、DNA聚合酶等的理解聚合酶等的理解名称名称作用作用参与的生理过程参与的生理过程及应用及应用DNA连接酶连接酶连接两个连接两个DNA片段片段限制性核酸限制性核酸内切酶内切酶切割某种特定的脱氧切割某种特定的脱氧核苷酸序列核苷酸序列基因工程基因工程DNA聚合酶聚合酶在脱氧核苷酸链上添加单在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸DNA复制复制RNA聚合酶聚合酶在核糖核苷酸链上添加单在核糖核苷酸链上添加单个核糖核苷酸个核糖核苷酸转录转录解旋酶解旋酶使碱基间氢键断裂形成脱使碱基间氢键断裂形成脱氧

18、核苷酸链氧核苷酸链DNA复制及转录复制及转录逆转录酶逆转录酶以以RNA为模板合成为模板合成DNA逆转录、基因工程逆转录、基因工程第15页/共34页2.基因工程与蛋白质工程的比较基因工程与蛋白质工程的比较基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程操作环境操作环境生物体外生物体外生物体外生物体外操作核心操作核心基因基因基因基因操作起点操作起点目的基因目的基因预期的蛋白质功能预期的蛋白质功能结果结果人类需要的基因产物人类需要的基因产物自然界不存在的蛋白质自然界不存在的蛋白质第16页/共34页【例例1】 (沈阳质检沈阳质检)转基因植物油是由转基因植物通过压榨或浸出法加转基因植物油是由转基因植物通过压榨或浸出

19、法加 工制得的，因其出油率高而被广泛采用。我国是植物油消费大国，工制得的，因其出油率高而被广泛采用。我国是植物油消费大国， 每年都从国外进口大量的转基因植物油。每年都从国外进口大量的转基因植物油。 (1)在培育转基因油料植物的过程中，基因操作需要的工具酶是在培育转基因油料植物的过程中，基因操作需要的工具酶是 _。在基因表达载体中，目的基因。在基因表达载体中，目的基因 的首端必须含有的首端必须含有_，它是，它是_识别和结合位点。识别和结合位点。 (2)请写出一种将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法：请写出一种将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法： _。若受体细胞为植物体细。若受体细胞为植

20、物体细 胞，可采用胞，可采用_技术获得转基因植物体，该技术所依据技术获得转基因植物体，该技术所依据 的原理是的原理是_。限制性核酸内切酶和DNA连接酶启动子RNA聚合酶农杆菌转化(或基因枪、花粉管通道)法植物组织培养植物细胞的全能性第17页/共34页(3)若要检测若要检测(2)中获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因，可采用中获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因，可采用_技术。而想要得知上述植物是否真的出油率高，应技术。而想要得知上述植物是否真的出油率高，应如何做？如何做？_。(4)若利用蛋白质工程继续提高油料植物的出油率，其设计流程应从预若利用蛋白质工程继续提高油料植物的出油率，其设计流程

21、应从预期的期的_出发，设计预期的出发，设计预期的_结构，推测出应有的结构，推测出应有的_序列，然后找到相对应的序列，然后找到相对应的_序列，再用转基因序列，再用转基因技术改变其现有性状。技术改变其现有性状。DNA分子杂交将该植物制出的植物油与同等质量的非转基因植物制出的植物油称重将该植物制出的植物油与同等质量的非转基因植物制出的植物油称重比较比较蛋白质功能蛋白质氨基酸脱氧核苷酸第18页/共34页考点考点2克隆技术相关知识整合克隆技术相关知识整合1细胞工程的几个过程流程图比较细胞工程的几个过程流程图比较细胞工程技术细胞工程技术技术过程图示技术过程图示植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细

22、胞杂交第19页/共34页动物细胞培养动物细胞培养动物细胞的融动物细胞的融合合核移植核移植单克隆抗体的单克隆抗体的制备制备第20页/共34页2.植物组织培养与动物细胞培养的比较植物组织培养与动物细胞培养的比较植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基的物理培养基的物理性质性质固体固体液体液体(合成培养基合成培养基)培养基的成分培养基的成分水、无机盐、维生素、蔗水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂等糖、氨基酸、琼脂等葡萄糖、氨基酸、无机盐、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等维生素、动物血清等结果结果新的植株或组织新的植株或组织新

23、的细胞系或细胞株新的细胞系或细胞株应用应用微型繁殖微型繁殖作物脱毒作物脱毒生产人工种子生产人工种子单倍体育种单倍体育种突变体的利用突变体的利用细胞产物的工厂化生产细胞产物的工厂化生产蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产皮肤移植材料的培育皮肤移植材料的培育检测有毒物质检测有毒物质生理、病理、药理学研生理、病理、药理学研究究条件条件均需无毒环境无菌操作，适宜的营养、温度、均需无毒环境无菌操作，适宜的营养、温度、pH、O2等等第21页/共34页3.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较细胞工程细胞工程植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合实质内容实质内

24、容改变遗传物质、产生新的性状，改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品获得细胞产品(使后代具有双使后代具有双亲的特性亲的特性)理论基础理论基础植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性细胞增殖细胞增殖诱导手段诱导手段物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒诱导过程诱导过程去细胞壁去细胞壁(纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶)原生质体融合原生质体融合(获得杂种原生质体获得杂种原生质体)植物细胞培养植物细胞培养(获得植株获得植株)获得分离的单个动物细胞

25、获得分离的单个动物细胞(胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理)诱导融合诱导融合动物细胞培养动物细胞培养(细胞产品细胞产品)应用应用白菜白菜甘蓝等杂种植物甘蓝等杂种植物单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备(杂交瘤杂交瘤细胞细胞)第22页/共34页受精作用、原生质体融合、动物细胞融合受精作用、原生质体融合、动物细胞融合受精作用受精作用原生质体融合原生质体融合动物细胞融合动物细胞融合不不同同点点细胞类型不同细胞类型不同精子与卵细胞精子与卵细胞体细胞体细胞体细胞体细胞细胞来源不同细胞来源不同来自同种生物来自同种生物个体个体一般来自不同一般来自不同种的生物个体种的生物个体般来自不同种般来自不同种的生物个体的生物个体染色

26、体数目变染色体数目变化不同化不同2N2N2N，不，不一定是一定是2N22N2N，不，不一定是一定是2N2融合条件不同融合条件不同不需人工诱导不需人工诱导需人工诱导需人工诱导需人工诱导需人工诱导相相同同点点都有两个细胞融合成一个细胞，并且融合成这个细胞的遗传物都有两个细胞融合成一个细胞，并且融合成这个细胞的遗传物质都是由原来的两个细胞决定的质都是由原来的两个细胞决定的第23页/共34页【例例2 2】 野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗 寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰

27、专家共同做实验研究， 用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强 的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：第24页/共34页(1)过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中“酶解酶解”所用的酶所用的酶应应 该包括该包括_。(2)过程可用聚乙二醇过程可用聚乙二醇(PEG)，其目的是，其目的是_。(3)请用文字和箭头表示出技术过程的实验流程：请用文字和箭头表示出技术过程的实验流程：_。 由此过程可以看出植物细胞有形成完整个体的可能性，这是由此过程可以看出植物细

28、胞有形成完整个体的可能性，这是 _的表现。的表现。(4)在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可以取样，在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可以取样， 通过通过_实验来鉴别细胞壁是否已经再生。实验来鉴别细胞壁是否已经再生。(5)请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：_。纤维素酶、果胶酶诱导原生质体融合融合细胞融合细胞 愈伤组织愈伤组织 幼苗幼苗植物细胞具有全能性植物细胞的质壁分离与复原可以克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍第25页/共34页【例例3】 (潍坊质检潍坊质检)人人CD20单克隆抗体是治疗一些恶性肿瘤的特效药单克隆抗体是治

29、疗一些恶性肿瘤的特效药 物，目前主要是通过培养哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已经物，目前主要是通过培养哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已经 培育出世界上第一头转入了培育出世界上第一头转入了CD20抗体基因的转基因牛，可以从它产抗体基因的转基因牛，可以从它产 的牛奶中直接提取的牛奶中直接提取CD20抗体。这项技术成熟后，有望使这一特效药抗体。这项技术成熟后，有望使这一特效药 的生产成本降至现在的的生产成本降至现在的1/10。请回答：。请回答： (1)单克隆抗体的制备过程需先将单克隆抗体的制备过程需先将_和和 _融合，这一过程的诱导方法与植物体细胞杂交不同的融合，这一过程的诱导方法与植物体细

30、胞杂交不同的 是是_。 (2)动物细胞培养需要在含动物细胞培养需要在含_混合气体的培养箱中进混合气体的培养箱中进 行，培养液中通常需加入行，培养液中通常需加入_等一些天然成分。等一些天然成分。 (3)转基因技术的核心是转基因技术的核心是_。该过程用到的工。该过程用到的工 具酶有具酶有 _和和_。经过免疫的B淋巴细胞骨髓瘤细胞用灭活的病毒诱导95%空气加5%CO2血清、血浆基因表达载体的构建限制性核酸内切酶(限制酶)DNA连接酶第26页/共34页听课心得听课心得审题关键：审题关键：“单克隆抗体单克隆抗体”、“植物体细胞杂交植物体细胞杂交”、“混合气体混合气体”、“天然成分天然成分”、“核心核心”

31、、“工具酶工具酶”命题来源命题来源：单克隆抗体、植物体细胞杂交、动物细胞培养、转基：单克隆抗体、植物体细胞杂交、动物细胞培养、转基因。因。思路分析：思路分析：单克隆抗体的制备首先是将经过免疫的单克隆抗体的制备首先是将经过免疫的B B淋巴细胞与骨淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，其诱导方法与植物体细胞杂交不同的是用灭活的髓瘤细胞融合，其诱导方法与植物体细胞杂交不同的是用灭活的病毒诱导。动物体细胞培养需要满足以下条件：无菌无毒的环境病毒诱导。动物体细胞培养需要满足以下条件：无菌无毒的环境、营养、温度和、营养、温度和pHpH以及气体环境。气体环境必须是含以及气体环境。气体环境必须是含95%95%的空气加的空

32、气加5%5%的的COCO2 2，O O2 2是细胞代谢所必需的，是细胞代谢所必需的，COCO2 2是维持培养液的是维持培养液的pHpH。在使用。在使用合成培养基培养动物细胞时，由于人们对一些细胞所需的营养物合成培养基培养动物细胞时，由于人们对一些细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此通常需加入血清、血浆等一些天然成质还没有完全搞清楚，因此通常需加入血清、血浆等一些天然成分。转基因技术的核心是基因表达载体的构建，用到的工具酶是分。转基因技术的核心是基因表达载体的构建，用到的工具酶是限制性核酸内切酶和限制性核酸内切酶和DNADNA连接酶。连接酶。第27页/共34页解析解析：限制性核酸内切酶用于提

33、取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒的遗传物质是的遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；项错误；DNA连连接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，B项正确；受体细胞项正确；受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，C项正确；项正确；目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力，筛选时应该

34、用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，D项正项正确。确。第28页/共34页4.目的基因的检测内容和方法的比较目的基因的检测内容和方法的比较类型类型步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子水平分子水平检测检测第一步第一步目的基因是否插目的基因是否插入受体细胞染色入受体细胞染色体的体的DNA上上DNA分子杂交分子杂交技术技术(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第二步第二步目的基因是否转目的基因是否转录出录出mRNA核酸分子杂交核酸分子杂交技术技术(DNA和和mRNA之间之间)同上同上第三步第三步目的基因是否翻目的基因是否翻译出蛋白质译出蛋白质蛋白质分子杂蛋白质分子杂交交(抗原抗原抗体抗体之间之间)同上同上个体水平个体水平鉴定鉴定包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等定功能是否相同等第29页/共34页6.基因工程的应用基因工程的应用表现方面表现方面具体内容具体内容植物基因工程植物基因工程抗虫转