微生物实验室培养基管理

1、主要内容n培养基的订购和接收培养基的订购和接收n培养基的制备培养基的制备n培养基的测试培养基的测试n培养基的储存培养基的储存订购订购n根据实验室培养基清单所列存货量、根据实验室培养基清单所列存货量、实验室日常用量、供应商提供的到实验室日常用量、供应商提供的到货期来确定定货日及定货量货期来确定定货日及定货量n只能使用实验程序所列的培养基只能使用实验程序所列的培养基;若若实验程序未列出，培养基则用知名实验程序未列出，培养基则用知名公司的产品公司的产品接收接收n在培养基容器上标记：在培养基容器上标记：接收日期、到期日、接收日期、到期日、培养基名称培养基名称 n储藏储藏 大部分培养基、大部分培养基、药

2、品及试剂应保存在药品及试剂应保存在干燥、阴暗处，温度干燥、阴暗处，温度在在15-25之间，有之间，有些需要储藏在些需要储藏在2-8的冰箱内，具体操作的冰箱内，具体操作要按照培养基说明要按照培养基说明n每种培养基储藏柜建立说明并记录以下信息：每种培养基储藏柜建立说明并记录以下信息：培养基名称培养基名称，批号，规格数量，有效期，到货，批号，规格数量，有效期，到货日期，验收日期，存放地点，储存条件日期，验收日期，存放地点，储存条件n根据根据“先入先出先入先出”原则，按到期日早晚排列，保原则，按到期日早晚排列，保证证培养基保持新鲜及更新培养基保持新鲜及更新n开封超过一年的培养基视为过期培养基要处理开封

3、超过一年的培养基视为过期培养基要处理掉掉培养基入库登记表培养基入库登记表2.培养基的制备n培养基的准备和灭菌及分装应分别在单独的区培养基的准备和灭菌及分装应分别在单独的区域进行，按实验规程和说明进行并根据日常用域进行，按实验规程和说明进行并根据日常用量及保存期确定制备量。量及保存期确定制备量。n每次准备和灭菌都要在每次准备和灭菌都要在配置记录表配置记录表上记录以下上记录以下信息：信息：配置日期，名称，厂家，批号，使用量，配置日期，名称，厂家，批号，使用量，配置量，配置量，配置前后配置前后pH,灭菌锅编号，灭菌要求，灭菌锅编号，灭菌要求，操作人，备注操作人，备注 培养基配置记录培养基配置记录制备

4、前的准备工作 n仔细阅读使用方法，包括是否需要烧开、仔细阅读使用方法，包括是否需要烧开、灭菌、及添加剂，根据单位用量计算出灭菌、及添加剂，根据单位用量计算出需称重量需称重量n水水 要使用纯化水，如经蒸馏、去离子或要使用纯化水，如经蒸馏、去离子或反渗透得到的水，应符合环境保护局反渗透得到的水，应符合环境保护局（EPA）中关于饮用水的标准，）中关于饮用水的标准，每周每周对对其定期进行微生物和化学评估其定期进行微生物和化学评估n用带磁力搅拌的加热板、用带磁力搅拌的加热板、沸水浴或流动蒸汽来加沸水浴或流动蒸汽来加热以防烧焦或沸出，加热以防烧焦或沸出，加热时要保证磁力棒在搅热时要保证磁力棒在搅动动n器皿

5、和容器器皿和容器 使用硅酸硼使用硅酸硼玻璃、不锈钢、铝或别玻璃、不锈钢、铝或别的耐腐蚀材料，其容积的耐腐蚀材料，其容积至少要比所准备的培养至少要比所准备的培养基的体积大基的体积大10%n配制时先用半量的水将之充分振荡混匀配制时先用半量的水将之充分振荡混匀,再加入再加入剩余的水并洗掉粘在壁上的残余剩余的水并洗掉粘在壁上的残余n所有培养基都是热敏感的所有培养基都是热敏感的,不要加热超时不要加热超时n培养基不含明胶或琼脂的应用冷水或仅需微热培养基不含明胶或琼脂的应用冷水或仅需微热来溶解来溶解 n培养基含明胶或琼脂的必须加热至完全溶解培养基含明胶或琼脂的必须加热至完全溶解,用用沸水浴或流动蒸汽来加热沸

6、水浴或流动蒸汽来加热 n灭菌之前要检查是否灭菌之前要检查是否完全溶解完全溶解,是否有琼脂颗粒是否有琼脂颗粒粘壁粘壁 灭菌灭菌n灭菌前贴上灭菌条，标灭菌前贴上灭菌条，标上批号上批号，填写灭菌记录，填写灭菌记录表表n拧松盖或塞以防溢出拧松盖或塞以防溢出n高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌通常通常温度温度为为121，时间一般为，时间一般为（按装培养基的容器容（按装培养基的容器容积）：积）：1-100ml 15分分钟钟;100ml-1l 25分钟分钟;1l 30分钟分钟;管状设备及过滤管状设备及过滤漏斗漏斗 30分钟分钟;干物干物 60分分钟钟 具体时间具体时间及温度及温度应该应该查看使用说明及时间查看使用说明

7、及时间/体体积表积表n一个灭菌周期完成后，小心打开灭菌锅门使培一个灭菌周期完成后，小心打开灭菌锅门使培养基冷却养基冷却5-105-10分钟再拿出分钟再拿出n已灭菌培养基在盖子拧紧已灭菌培养基在盖子拧紧后放入恒温水浴锅中后放入恒温水浴锅中（一般为（一般为5055）n灭菌后培养基灭菌后培养基pH的调整：使培养基冷却至的调整：使培养基冷却至25，取单位体积的培养基，用取单位体积的培养基，用pH计测试并用计测试并用1mol/l的的HCl或或1mol/l的的NaOH调至培养基要求的调至培养基要求的pH范范围，再根据添加的酸或碱的量来计算校正全部围，再根据添加的酸或碱的量来计算校正全部同种培养基的同种培养

8、基的pHn培养基培养基不能重复灭菌不能重复灭菌灭菌记录灭菌记录培养基使用登记表培养基使用登记表倒平板和分装n应在无菌工作台中进行应在无菌工作台中进行n倒平板时的温度倒平板时的温度 45-5545-55之间之间, ,以防在盖以防在盖上形成蒸汽上形成蒸汽 ；琼脂温度；琼脂温度不对可导致培养基水过不对可导致培养基水过度蒸发而导致培养基收度蒸发而导致培养基收缩和凝结缩和凝结n分装用的瓶子或试管的体积应该是所分装培养基的分装用的瓶子或试管的体积应该是所分装培养基的1.51.5倍以上倍以上 n含热敏感成分添加剂的培养基，其热敏感成分用含热敏感成分添加剂的培养基，其热敏感成分用0.450.45的滤膜来过滤除

9、菌，并在培养基冷却到的滤膜来过滤除菌，并在培养基冷却到5050后才能加后才能加入入 n已凝的琼脂培养基不能放在加热板上直接加热，微波已凝的琼脂培养基不能放在加热板上直接加热，微波炉或水浴可用来再熔化已凝的琼脂培养基，注意加热炉或水浴可用来再熔化已凝的琼脂培养基，注意加热前要拧松盖子前要拧松盖子 n培养基培养基不能重复熔化不能重复熔化，这会破坏其成分并增加污染机，这会破坏其成分并增加污染机会会 n已灭菌的、熔化的培养基要放在已灭菌的、熔化的培养基要放在50恒温水浴中冷却恒温水浴中冷却并在并在6 6小时内分装小时内分装 n平板凝固后倒置平板进行培养和贮存，平板凝固后倒置平板进行培养和贮存，TBGT

10、BG等分装后要等分装后要放冰箱放冰箱 n象象BSBS等有沉淀的培养基倒平板时注意振荡使之浊度均等有沉淀的培养基倒平板时注意振荡使之浊度均一一 n平板上的气泡可用本生灯焰轻轻加热除去平板上的气泡可用本生灯焰轻轻加热除去 n平板上的水可造成微生物蔓延和菌落液化平板上的水可造成微生物蔓延和菌落液化, ,可在可在30-30-4040恒温箱中除去恒温箱中除去 npH6.0以下的酸性培养基配制时要在温和条件下，因为以下的酸性培养基配制时要在温和条件下，因为加热可造成琼脂和明胶分解加热可造成琼脂和明胶分解;若已造成分解可按若已造成分解可按5.0克克/升琼脂来补充升琼脂来补充 n平板架每次使用后用纯水冲洗，平

11、板架每次使用后用纯水冲洗，紫外灯紫外灯照射杀菌照射杀菌无菌实验 无菌实验是为了说明培养基被正无菌实验是为了说明培养基被正确地灭菌确地灭菌，保证在实验中出现的保证在实验中出现的污染不是由不正确的灭菌而来污染不是由不正确的灭菌而来n肉汤要肉汤要37培养培养24小时观察无菌后才能使用小时观察无菌后才能使用 n倒平板后要培养倒平板后要培养24小时观察无菌后才能使用：小时观察无菌后才能使用：细菌板放细菌板放37培养箱，真菌板放培养箱，真菌板放2828培养箱培养箱 n装在试管中的培养基培养装在试管中的培养基培养2424小时后若发现有小时后若发现有长菌，则该批培养基要长菌，则该批培养基要灭菌后灭菌后扔掉扔掉

12、n在倒平板的同时倒一在倒平板的同时倒一定数目的平板作为空定数目的平板作为空白对照，并在该批平白对照，并在该批平板将被使用的温度和板将被使用的温度和时间下培养，直到该时间下培养，直到该批平板用完，记录其批平板用完，记录其阳性率阳性率n若使用培养基来做倾若使用培养基来做倾注平板实验，要同时注平板实验，要同时用所有培养基倒一个用所有培养基倒一个空白板空白板作培养作培养 阴阳性对照 取样量应为总平板、试管或瓶子取样量应为总平板、试管或瓶子数的数的1-2%，用，用ATCC菌种接种菌种接种并应产生预期效果并应产生预期效果生长能力测试 n每种培养基都要测试其支持、鉴每种培养基都要测试其支持、鉴别或抑制适当菌

13、的能力别或抑制适当菌的能力n对完全培养基可根据实验室情况对完全培养基可根据实验室情况选用不同类型的代表种选用不同类型的代表种; ;对选择、对选择、鉴别培养基应选择最能显示其特鉴别培养基应选择最能显示其特征的微生物征的微生物 生长能力测试测试方法测试方法 n接种能产生接种能产生10-10010-100个菌落的已知微个菌落的已知微生物的生物的2424小时培养物小时培养物 n接种接种1010-3-3稀释度的已知微生物的稀释度的已知微生物的2424小时培养物小时培养物n具体的选择应根据具体实验室条件具体的选择应根据具体实验室条件来定来定, ,微生物应用微生物应用ATCCATCC菌种菌种 只有培养基其只

14、有培养基其pH在正确的范围内在正确的范围内,通过了无菌实验及生长测试通过了无菌实验及生长测试,各各种对照合格种对照合格,才能使用才能使用;若其中若其中任任意一项意一项不成立不成立,就没有达到实验就没有达到实验室能使用的标准而不能使用室能使用的标准而不能使用n若实验室的实验与测试培养基的实若实验室的实验与测试培养基的实验同时进行验同时进行, ,而培养基未达标而培养基未达标, ,那么那么所有的微生物实验将用合格的培养所有的微生物实验将用合格的培养基重新进行基重新进行 n若培养基实验失败，要检查灭菌记若培养基实验失败，要检查灭菌记录和无菌操作记录，找出失败原因录和无菌操作记录，找出失败原因储藏前要做

15、好标记：准备日期或接收日储藏前要做好标记：准备日期或接收日期、名称、货架期期、名称、货架期 成品培养基 n具体保藏方法按制造商说明，具体保藏方法按制造商说明，若无特别说明，一般保藏在阴若无特别说明，一般保藏在阴凉、干燥、蔽光处凉、干燥、蔽光处 脱水培养基 大部分培养基应保存在干燥、阴大部分培养基应保存在干燥、阴暗处，温度在暗处，温度在15-25之间，有之间，有些需要储藏在些需要储藏在2-8的冰箱内，的冰箱内，具体操作要按照制造商的建议具体操作要按照制造商的建议 实验室制备的培养基 n培养基只有在货架期内才能较好地支持培养基只有在货架期内才能较好地支持微生物的生长，不能使用超过货架期的微生物的生

16、长，不能使用超过货架期的培养基培养基n货架期可通过以下实验来定货架期可通过以下实验来定: :在一定时间在一定时间和储存条件下和储存条件下, ,接种一定浓度的标准菌于接种一定浓度的标准菌于供试培养基上供试培养基上, ,计算其恢复率计算其恢复率( (在其上生在其上生长菌落数与新鲜的刚制备好的培养基上长菌落数与新鲜的刚制备好的培养基上生长的菌落数的比值生长的菌落数的比值),),制备日至恢复率制备日至恢复率70%70%的日期就是其货架期的日期就是其货架期实验室制备的培养基及试剂（续）n以上是指非选择性培养基，在选择性培养以上是指非选择性培养基，在选择性培养基上即使是目标微生物其恢复率也是很低基上即使是目标微生物其恢复率也是很低的的n影响货架期的因素主要有影响货架期的因素主要有:配方和包装方式、配方和包装方式、储藏温度、光线、脱水和污染储藏温度、光线、脱水和污染 n瓶装培养基和肉汤大多数情况下（除非另瓶装培养基和肉汤大多数情况下（除非另外说明）储存在外说明）储存在2-8，在松盖的情况下保，在松盖的情况下保质期为一个月，拧紧盖子则可以保存三个质期为一个月，拧紧盖子则可以保存三个月；室温下即使拧紧盖子也只能保存月；室温下即使拧紧盖子也只能保存1-21-2