临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用

1、临床免疫分析发展趙势及化学发光技术应用-免疫扩散-免疫沉淀/免疫凝集-ELISA-IFA-RIA-ICT化学发光荧光偏振-微粒子酶放大化学发光-电化学发光-时间分辨免疫荧光-抗体芯片透射和散射比浊-流式细胞技术免疫学和自动化技术在临床免疫学诊断领域中的应用将丸大加速标记免疫学分析技术发後坊程*免疫吳光分析(Coons,1941)*放射免疫分析(Berson和Yalow,I960)*酶联免疫吸附分析(Engvall,1971)*金标免疫分析(Faulk和Taylor,1971)*化学发光免疫分析(Arakawa,1977)*对间分辨关光免疫分析(Soini和Hemmila,1979)*勒化学发光

2、免疫分析(Leland,1990)近代临床免疫诊断技术发展历程临床免疫诊断技术的发展基本历经了以下三个阶段:化学发光免疫诊断技术（CLIA）酶联免疫诊断技术（ELISA）放射免疫诊断技术（RIA）近代临床免疫诊断技术发展历程方法1中国、欧美放射免疫法(RIA)1.兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院；2产品处于衰退期；3.厂商试剂与仪器共同开发，试剂基木系列化。1. 兴起于20世纪60年代，现己基木退出临床应用；2. 产品生命周期己终结；3. 厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化酶联免疫法(ELISA)1.兴起于20世纪80年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基

3、本方法；2产品处于成熟期；3.厂商试剂和仪器共同开发，试剂尚未系列化。1.兴起于20世纪70年代，现仍在临床应用；2产品处于衰退期；3.厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化。化学发光免疫法(CLIA)1.导入于20世纪90年代，逐步进入各大中医院；2产品处于快速成长期；3.正逐步实现试剂和仪器共同开发，试剂逐步系列化1.兴起于20世纪80年代，现己被临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法；2产品处于成熟期；3.厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高，试剂系列化状态好。数射免疣枝*（RIA丿*技术成熟度高*放射性（125I）污染和危害1251的半衰期短，试剂有效期短*标记物125I的稳定性

4、差，批间、批内的变异较大标准曲线有效期短，必须每次定标*作繁琐，出报告时间长*无法保存备用ORosalynYalow,1977酶免疫分析技术（ElA）:成本低廉:定性、半定量和定量均可以检测<*0.D值在低中浓度范围与酶活性呈线性关系:可以肉眼简单判读或酶标仪准确判读结果化学发光免疫分析tCUAJ灵敏度高，检测低限达lomolif测定范围宽，可达9个数量级自动化程度高，操作简单*试剂稳定性好，无污染有效期624月BayerDiagnostiesBAYERACS180Access®2ImmunoassaySystem电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescen

5、ceimmunoassay,ECLI)是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。*最先进的免疫学分析技术之一*非开放性试剂系统；试剂价格过高免複禽检验枚术安屐撻势阵列芯片液相悬浮芯片化学发光时间分辨荧光AlphaScreen金标免疫层析检测磁珠免疫层析检测化学发光免疫分析发展史CLIA简史：本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应

6、分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。l=Ji原理：发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与催化的酶的量成正比，由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量.CLIA试剂盒国产化程度已经较高，质量与国外产品的差距逐渐减小。A缺乏国产化的自动检测仪器类型原理试剂发光类型化学发光免疫分析(CLIA)化学发光物质直接标记抗原(体)口丫噪酯异鲁米诺闪光型化学发光酶免疫

7、分析(CLEIA)在酶免疫分析完成后加入底物鲁咪诺系统AMPPD系统辉光型电化学发光免疫分析(ELCIA)电致化学发光与电化学手段相结合三联毗噪钉三丙氨系统闪光型荧光免疫分析根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)荧光素闪光型【化学发光免疫分析种类1.直接化学发光A卩丫噪酯发光原理：纳米磁珠分离后的叮噪酯标记的抗原抗体复合物在含也。?的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。特点：发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，

8、测试速度快，但发光标记物叶噪酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。代表仪器：拜耳公司的ACS180,雅培Architecto发光原理图抗原形成复合物游离物洗去4-H2O2¥0H-【化学发光免疫分析种类】异鲁米诺发光艮理：发光过程和原理与卩丫噪酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完£整个过程，测试速度最快，而且克服了卩丫唳酯在缓冲液不稳定、易水解的爬点。弋表仪器：德国Byk-Sangtec公司的LIAISON原理图抗体包被形成复合物抗原fill游离物洗去磁性微粒+H202+胃化皿0H-发光【化学发光免疫分析种类I2、=发(-AP)評灌瞬躍DLuminol薛酶体系：水

9、解反应，起光较慢，发光强度较弱，灵敏度咼。辣根酶体弟：氧化还原反应，起光较快，发光强度较大。：VitrosECi(鲁米喏)，美国贝克曼公司的ACCESSHRP-LUMINOL)、北京源德(HRP-HRP-LUMINOL)、科美东雅(AMPPD)、威国緞"海威咼(Arpluminol)州安英国强生VitrosECi（鲁采喏丿VitrosECi（鲁米喏）原理图包被亲和素塑科小孔HRP标记抗体形成复合物游离物洙去+H2O24Luminol发光【化学发光免疫分析种类】3、电化学发光*原理:纳米磁珠分离后的三联毗噪钉标记的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化还原反应，发岀可见光，通过光电

10、倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。*特点：激发发光过程复杂，时间长，每一个发光过程约需25秒，测试速度慢。*代表仪器：瑞士ROCHE公司的ELECSYS1010和ELECSYS2010。罗氏fRocheDiagnosticsJ电化学发光检测技术(ELECSYS1010ELECSYS2010)标记更争空双抗体夬心由操作步骤B><ll/i结合了活化的三联毗味钉衍生物即Ru(bpy)3+N務基琥珀酰胺酯(NHS)的抗-HBs和结合了生物素的抗HBs与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟EuinrhiLd.k打匕*Z-豪、+#_z、+RuIIfiiuiElvi

11、pp-jIl-iJT&Hfih将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠.HBs连接为一体，形成双抗体夹心法Ru(bpy)32+NHSI标记抗体抗原磁珠颗粒生物耒标记抗住.亲和素蠕动泵将形成的Ru(bpy)3“一抗体一抗原一抗体一磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的抗HBs(与生物素结合的和与Ru(bpy)32+结合的抗体)也被吸出测量室4蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程5终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定【化学发光免疫分析种类J4、此歿火九4.1时间分辨免疫荧光(TRFIA)美国PerkinElmer芬兰Wallac新波达安基因42光激化学发光(Lica)博阳43多种技术综合美国雅培