Micro RNA 介绍与研究技术

1、现代生物技术专题报告现代生物技术专题报告小分子小分子RNA的相关研究的相关研究小组成员：吕瀛、周驹俊、陈志球小组成员：吕瀛、周驹俊、陈志球 陈婕、薛宁陈婕、薛宁CONTENTS小分子小分子RNA研究方法研究方法小分子小分子RNA的定义与分类的定义与分类小分子小分子RNA的功能的功能小分子小分子RNA的研究现状与前景的研究现状与前景小分子小分子RNA应用中存在的问题应用中存在的问题编码编码RNARNA非编码非编码RNA 近20 年来，非编码性小RNA 分子（non-codingsmall RNA）的发现和功能研究，大大改变了人们对RNA 分子的认知，也极大深化了人们对基因表达调控的理解。非编码性

2、小RNA 分子主要指长度为2030个核苷酸的内源或外源RNA 分子，亦有研究者将长度大于70 个核苷酸的非编码RNA分子也列入其中。微小RNA小干扰RNApiRNA较长的非编码RNA小分子小分子RNARNA.较长的非较长的非编码编码RNA核内小核内小RNA（snRNA）核仁小核仁小RNA（snoRNA)胞质小胞质小RNA（scRNA)催化性催化性RNA（核酶）（核酶）其它类型的其它类型的非编码非编码RNACnki相关文章数相关文章数小分子小分子RNA的功能的功能Company Logov传统功能传统功能v新研究功能新研究功能Company Logo用到的工具酶有：碱性磷酸酶T4多核苷酸激酶T4

3、 RNA ligase逆转录酶等通过总RNA提取，之后跑PAGE胶而得到纯化，得到200nt的核苷酸条带通过5Adaptor设计正向引物通过3Adaptor设计反向引物新新microRNA基因的克隆基因的克隆小分子RNA富集纯化RT-PCR克隆及测序末端修饰及连接已知序列Company Logo新新microRNA基因的克隆基因的克隆Total RNAPAGE胶分离 OH 35 P5 POH 35 P5 P5 P5 POH 3OH 35 0HPhosphataseT4RNA ligaseOH 35 P3 Adaptor5 0H5 0HOH 35 0HOH 3T4RNA polynuleotid

4、e kinaseOH 35 0HOH 3OH 3OH 35 POH 3OH 3OH 35 POH 35 Adaptor新新MICRORNA基因的克隆基因的克隆OH 35P5 Adaptor3 AdaptorReverse transcription PCR5P5P3 Adaptor5P3 Adaptor5POH 35P酶切位点OH 35POH 35POH 35POH 35POH 35P酶切位点酶切位点酶切位点PCR 扩增克隆得到cDNA克隆、酶切、质粒连接、表达分析等MICRO RNA主要研究技术手段主要研究技术手段MICRO RNA主要研究技术手段主要研究技术手段v生物信息学方法对基因功能进行预测生物信息学方法对基因功能进行预测v杂交技术对杂交技术对Micro RNA表达的研究表达的研究v通过敲除通过敲除Micro RNA的的Dicer 酶