实验二 沉淀反应(2015修改)

1、实验二 沉淀反应一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验n原理：原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如将可溶性抗原层积于抗体之上，如 果二者相应，则可在抗原、抗体两果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。液接触界面形成白色的沉淀环。n目的：目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。的判定方法。一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应1 1被检抗原（沉淀原）的制备：被检抗原（沉淀原）的制备：（1 1）热浸法）热浸法 取可疑材料约取可疑材料约1 1克，研碎，加入克，

2、研碎，加入5- 5-10mL10mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min30min，取出，取出冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。（2 2）冷浸法）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭菌后，取菌后，取1cm1cm2 2或兽毛数克浸于或兽毛数克浸于5-105-10倍的倍的0.5%0.5%石炭酸生石炭酸生理盐水中，理盐水中，44浸渍浸渍18-2418-24小时，同上法过滤。小时，同上法过滤。一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应n实验材料：实验材料：2 2炭疽标准抗原炭疽标准抗原 3 3、炭疽阴

3、性抗原（健康组织浸出液）、炭疽阴性抗原（健康组织浸出液） 4 4阳性、阴性炭疽沉淀素血清阳性、阴性炭疽沉淀素血清5 5毛细吸管毛细吸管 沉淀反应管（沉淀反应管（ 0.3-0.4cm0.3-0.4cm ）一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应n实实 验验 步步 骤骤用毛细吸管吸取炭疽沉淀用毛细吸管吸取炭疽沉淀素，插入沉淀反应管底部，素，插入沉淀反应管底部，缓慢注入到距管底的缓慢注入到距管底的1/31/3处。处。用另一支毛细吸管吸取被检用另一支毛细吸管吸取被检材料，插入离沉淀管底近材料，插入离沉淀管底近1/31/3处，沿管壁缓慢加入到沉淀处，沿管壁缓慢加入到沉淀素的上面，边注边提使达到素的上面，边注边提

4、使达到2/32/3高度处即可。高度处即可。静置静置5 510min10min结果观察结果观察设阳性、阴性对设阳性、阴性对照照一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应试验组试验组阳性对照组阳性对照组阴性对照组阴性对照组一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应n结果判定结果判定： 两液面交界处出现清晰、致密两液面交界处出现清晰、致密 如线的白轮，是炭疽阳性。如线的白轮，是炭疽阳性。 无此现象为炭疽阴性。无此现象为炭疽阴性。一、环状沉淀反应一、环状沉淀反应二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验目的：目的：掌握双向琼脂扩散试验的原理、掌握双向琼脂扩散试验的原理、 操作方法及结果判定方法。操作方法及结果判定方法。n

5、原理：原理： 可溶性可溶性Ag与与Ab在含有电解质的半固体（在含有电解质的半固体（1%）琼）琼脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于组成它的带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而具有特异地不可透过性，而对其它的对其它的Ag与与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种表一种AgAb系统的沉淀物。系统的沉淀物。二、双向琼脂扩散试验

6、二、双向琼脂扩散试验1 1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原；、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原；2 2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清；、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清；3 3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清；、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清；4 4、平皿（、平皿（6cm6cm）、打孔器、微量加样器等；）、打孔器、微量加样器等；n实验材料：实验材料：二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验5 5、琼脂凝胶板：、琼脂凝胶板： 将琼脂糖将琼脂糖1.01.0克、克、NaCl 8.0NaCl 8.0克、蒸馏水克、蒸馏水100ml100ml装装入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml

7、7ml加入平皿加入平皿内（勿有气泡）使成约内（勿有气泡）使成约3mm3mm厚的凝胶，待冷却凝固厚的凝胶，待冷却凝固后按如下图方式打孔。后按如下图方式打孔。注意注意: :孔间距为孔的直径大小孔间距为孔的直径大小, ,打孔完毕要封底）打孔完毕要封底）二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验n实验步骤：实验步骤： 中间孔加标准抗原，中间孔加标准抗原，外周孔加被检血清及阳性外周孔加被检血清及阳性血清（如要测被检血清的血清（如要测被检血清的效价，外周孔可倍比稀释效价，外周孔可倍比稀释后依次加入）。加样后盖后依次加入）。加样后盖上皿盖，上皿盖，37扩散扩散24小时，小时，观察结果。观察结果。 二、双向琼脂

8、扩散试验二、双向琼脂扩散试验Ab生理盐水Ag?阳性：阳性：标准对照孔之间有明显的沉淀线时，标准对照孔之间有明显的沉淀线时， 受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与 阳性对照沉淀线融合。阳性对照沉淀线融合。阴性：阴性：受检孔与中央孔之间无沉淀线。受检孔与中央孔之间无沉淀线。n 结果判断：结果判断：二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验一种抗原一种抗原- -抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于反应中，由于抗体过剩抗体过剩或或抗原过剩抗原过剩，抗原与抗，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。眼可见的反应现象。抗体过剩：前带现象；抗体过剩：前