刘姝颍梅毒实验室检测工作概况和要求

1、梅毒实验室检测梅毒实验室检测 工作概况和要求工作概况和要求 安徽省皮肤病防治所安徽省皮肤病防治所 刘姝颖刘姝颖 20152015年年1111月月主要内容主要内容梅毒实验室检测概述梅毒实验室检测概述l重要性重要性l常用检测方法常用检测方法l工作要求工作要求现场督导发现的问题现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动监测性病病种监测性病病种梅毒梅毒淋病淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣尖锐湿疣生殖器疱疹生殖器疱疹性病实验室在性病防治中的作用性病实验室在性病防治中的作用效果评价效果评价临床服务临床服务疫情监测疫情监测科学研究科学研究实验室诊断实验室诊断第十一条第

2、十一条 省、市和县级疾病预省、市和县级疾病预防控制机构职责防控制机构职责l组织开展本行政区域性病组织开展本行政区域性病实验室质量管理实验室质量管理第十三条第十三条 开展性病诊疗业务的开展性病诊疗业务的医疗机构职责医疗机构职责l开展实验室检测质量控制开展实验室检测质量控制5性病防治管理办法性病防治管理办法梅毒控制相关政策梅毒控制相关政策l卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）l卫生部2011年2月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案l国务院2012年1月13日中国预防控制艾滋病五年行动计划（21011-2015年）梅毒控制主要措施：梅毒

3、控制主要措施：提高梅毒实验室检测质量提高梅毒实验室检测质量加强梅毒筛查力度加强梅毒筛查力度主要内容主要内容梅毒实验室检测概述梅毒实验室检测概述l重要性重要性l常用检测方法常用检测方法l工作要求工作要求现场督导发现的问题现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动常用梅毒实验室检测方法常用梅毒实验室检测方法病原学检测病原学检测血清学检测血清学检测病原学检测病原学检测原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视

4、野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（方法：（1 1）暗视显微镜检查）暗视显微镜检查 （2 2）镀银染色法）镀银染色法 （3 3）核酸检测）核酸检测意义：螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早意义：螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。如未见到

5、梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。 梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法(1) (1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）（非特异性梅毒抗体）(2) (2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。（特异性梅毒抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）（非特异性抗体）未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗

6、体可长未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐期存在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴性。减少滴度至转为阴性。方法包括：方法包括： （1 1）快速血浆反应素环状卡片试验）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)(RPR) （2 2）甲苯胺红不加热血清试验（）甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）等）等 非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后疗后3 3个月，个月， RPR/TRUST RPR/TRUST试验抗体滴度下

7、降试验抗体滴度下降2 2个个稀释度，稀释度，6 6个月下降个月下降4 4个稀释度。个稀释度。 一期梅毒一期梅毒1 1年后转为阴性年后转为阴性 二期梅毒二期梅毒2 2年后转为阴性。年后转为阴性。 晚期梅毒晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，治疗后血清滴度下降缓慢，2 2年后年后约约50%50%病人血清反应仍为阳性。病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。可作为梅毒筛查试验。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故（1）可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；（2）结合梅毒螺旋体抗原血清学试验鉴别梅毒

8、现症感染和既往感染VDRL试验用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。梅毒病期敏感性(%)(%)特异性(%)(%)一期86（77-99）-二期100隐性98(95-100)（一般滴度1:8，但不排除1:8）晚期73非梅毒-98(93-99)梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体抗原血清学试验原理抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺感染梅毒螺旋

9、体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。身阳性。梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（ELISAELISA） 化学发光免疫分析法（化学发光免疫分析法（CLIACLIA） 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法- -梅毒快速检测梅毒快速检测 (RT) (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（

10、梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WBWB）梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验作为非梅毒螺旋体抗原血清试验( (如如RPRRPR等等) )初筛阳性标本的初筛阳性标本的确证试验，排除确证试验，排除RPR RPR 假阳性。假阳性。不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。清试验结果进行诊断。不能作为疗效观察的指标。不能作为疗效观察的指标。梅毒血清学试验结果解释梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据（梅毒临床诊断参考依据）17试验结果参考结果解释*梅毒螺旋体抗原血清试验

11、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性阳性可能为现症梅毒阴性阳性非梅毒螺旋体血清试验假阳性阳性阴性临床治愈的早期梅毒（既往感染者）或极早期梅毒阴性阴性排除梅毒感染或极早期梅毒*该结果解释不适用于胎传梅毒、神经梅毒梅毒梅毒IgMIgM抗体（抗体（TP-IgMTP-IgM） IgM抗体的产生是感染后的早期体液免疫应答反应。IgM分子比较大，所以不能通过胎盘屏障。因此若在新生儿血中检测到IgM抗体是先天梅毒的诊断依据。目前已有商品化的TP-IgM检测试剂盒，检查到IgM抗体可作为对先天梅毒临床诊断的依据，其特异性较高，但敏感性较低。因此，IgM阴性，不能排除先天梅毒感染。18梅毒实验室检测基本策略梅毒实验室检

12、测基本策略-血清学检测血清学检测19非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验n排除试验假阳性排除试验假阳性n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验：初筛试验 TPPA：确证试验：确证试验2021阳性主要内容主要内容梅毒实验室检测概述梅毒实验室检测概述l重要性重要性l常用检测方法常用检测方法l工作要求工作要求现场督导发现的问题现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室检测基本要求梅毒实验室检测基本

13、要求一、人员 检测技术人员需经过上岗培训。接受上岗培训内容应包括：梅毒检测相关基础知识、梅毒实验室检测技术基本实验操作要求、结果解读及临床意义、质量保证与生物安全等。二、试剂 常规血清学检测应采用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂。因不同厂家生产的同一种试剂的敏感性和特异性存在一定的差异，建议选择临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。所有试剂须严格按要求妥善保存，并控制在有效期内使用。23梅毒实验室检测基本要求梅毒实验室检测基本要求三、设备及环境 实验室应根据开展的方法配备基本的仪器设备24检 测 方 法仪器设备暗视野梅毒螺旋体检测镀银染色梅毒螺旋体检测快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)

14、暗视野显微镜普通光学显微镜水平旋转仪甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）水平旋转仪梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)震荡仪酶联免疫吸附试验（ELISA）酶标仪、洗板机梅毒快速检测 (RT)无需特殊仪器不同方法所需主要仪器设备 20142014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果( (非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验) ) 试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%) 特异性特异性(%) 上海科华 97.78 99.55 北京金豪 97.78 99.55 上海荣盛 96.67 100.00 厦门英科 95.56 98.18 北京万泰 91.11 98

15、.64 20142014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果( (梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验-ELISA)-ELISA) 试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%) 特异性特异性(%) 北京华大 100.00 100.00 北京万泰 100.00 100.00 北京现代 100.00 100.00 北京金豪 100.00 99.48 珠海丽珠 100.00 98.95 潍坊三维 100.00 83.25 上海科华 99.1 100.00 北京科卫 99.1 100.00 厦门英科 98.29 100.00 北京科美(化学发光) 100.00 10

16、0.00 20142014年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果年全国梅毒诊断试剂临床质量评估结果( (梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验- -免疫层析法免疫层析法) ) 试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%) 特异性特异性(%) 杭州艾博 99.15 100.00 北京蓝十字 99.74 92.15 Determin 99.15 98.95 广州万孚 98.29 100.00 厦门英科 98.29 98.43 北京万泰 97.74 90.58 主要内容主要内容梅毒实验室检测概述梅毒实验室检测概述l重要性重要性l常用检测方法常用检测方法l工作要求工作要求现场督导发现的问题现场督导发现的

17、问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动现场核查发现的不足与问题现场核查发现的不足与问题使用不符合要求的实验室检测方法进行诊断使用不符合要求的实验室检测方法进行诊断实验室开展项目不全，未掌握各种试验的适应实验室开展项目不全，未掌握各种试验的适应症，不具备诊断条件症，不具备诊断条件部分医院无开展部分医院无开展TRUSTTRUST试验的梅毒水平旋转仪，试验的梅毒水平旋转仪，或无开展或无开展TPPATPPA的微量振荡器的微量振荡器实验室检测方法标注有误或不规范实验室检测方法标注有误或不规范现场核查发现的不足与问题现场核查发现的不足与问题部分实验室缺乏原始记录或登记不规范而无法查部分实验室缺乏

18、原始记录或登记不规范而无法查找核实报告病例的相关数据找核实报告病例的相关数据试剂来源多，质量难以保障试剂来源多，质量难以保障多数医疗机构对仪器未定期校准和记录多数医疗机构对仪器未定期校准和记录部分检验人员培训不足，操作台无标准作业指导部分检验人员培训不足，操作台无标准作业指导书书实验室检验人员与临床医生、疫情管理人员沟通实验室检验人员与临床医生、疫情管理人员沟通不够不够主要建议主要建议制定性病实验室检测的作业指导书，放置在操作制定性病实验室检测的作业指导书，放置在操作台台加强仪器设备的校准与维护，确保正确的运转加强仪器设备的校准与维护，确保正确的运转对检验人员开展培训对检验人员开展培训, ,加

19、强对性病检测方法和临床加强对性病检测方法和临床结果解释的培训结果解释的培训规范实验室检测方法规范实验室检测方法规范完善检测结果信息登记规范完善检测结果信息登记检测结果登记示例主要内容主要内容梅毒实验室检测概述梅毒实验室检测概述现场督导发现的问题现场督导发现的问题梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动l开展现况开展现况l申请流程申请流程梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动关于开展梅毒血清学实验室室间质量评关于开展梅毒血清学实验室室间质量评价工作的通知价工作的通知( (卫办疾控卫办疾控20112011186186号号) )要求：自要求：自20112011年始在全省范围内开展梅毒年始在

20、全省范围内开展梅毒血清学实验室室间质量评价血清学实验室室间质量评价 ，各地认真，各地认真组织辖区内县（区）级以上医疗机构参加组织辖区内县（区）级以上医疗机构参加全省统一组织的每年两次的室间质评全省统一组织的每年两次的室间质评, ,督督促室间质评不合格的医疗保健机构实验室促室间质评不合格的医疗保健机构实验室进行限期整改进行限期整改 梅毒实验室室间质评活动梅毒实验室室间质评活动具体参评项目具体参评项目TPTP（非）、（非）、TPTP（特（特TPPATPPA）、）、TPTP（特（特ELISAELISA）、）、TP(ELISA-S/COTP(ELISA-S/CO值）、值）、TP(TP(特除特除ELIS

21、AELISA、TPPATPPA）。）。省临床检验中心（省临床检验中心（）负责统）负责统一发放全省质控标本（上下半年各一次）一发放全省质控标本（上下半年各一次）省皮肤病防治所负责结果的收集、分析、省皮肤病防治所负责结果的收集、分析、汇总、上报及反馈工作。汇总、上报及反馈工作。 首次室间质评活动首次室间质评活动20112011年年1111月首次梅毒血清学室间质评，月首次梅毒血清学室间质评，全省共全省共129129家二级以上医疗机构参加梅家二级以上医疗机构参加梅毒血清学室间质评活动，毒血清学室间质评活动，8181家合格，合家合格，合格率格率62.7

22、9%62.79%20112011年我省五个国家级性病监测点的年我省五个国家级性病监测点的1111家医疗机构参加全国性病实验室室间质家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价活动，量评价活动，7 7家合格，合格率家合格，合格率63.63%63.63%20142014年室间质评年室间质评全省梅毒实验室室间质评全省梅毒实验室室间质评,219,219家二级家二级以上医疗机构参加，以上医疗机构参加，191191家医疗机构合家医疗机构合格格, ,合格率合格率 87.21%87.21%。国家级性病监测点的十二家医疗机构国家级性病监测点的十二家医疗机构参加全国性病实验室室间质量评价，参加全国性病实验室室间质量评

23、价，参与率为参与率为100%100%，梅毒合格率，梅毒合格率91.67%91.67%、衣原体合格率衣原体合格率100%100%，淋球菌，淋球菌83.33%83.33%2014年我省梅毒室间质评参加率年我省梅毒室间质评参加率市市机构数机构数参加数参加数参加率（参加率（% %）市市机构数机构数参加数参加数参加率参加率（% %）合肥合肥3636333391.6791.67六安六安1818131372.2272.22芜湖芜湖1717161694.1294.12黄山黄山1717121270.5070.50亳州亳州1111101090.9090.90淮南淮南13139 969.2369.23安庆安庆181

24、8161688.8988.89滁州滁州1616111168.7568.75铜陵铜陵7 76 685.7185.71蚌埠蚌埠1919131368.4268.42宿州宿州1515121280.0080.00淮北淮北8 85 562.5062.50宣城宣城1414111178.5778.57马鞍马鞍山山10106 660.0060.00池州池州9 97 777.7877.78阜阳阜阳2020111155.0055.002014年参加率指标：年参加率指标：85 %85 %2014年我省梅毒室间质评合格率年我省梅毒室间质评合格率市市参加机构参加机构数数合格机构数合格机构数（两项）（两项）合格率（合格率（% %）市市参加机构参加机构数数合格机构数合格机构数（两项）（两项）合格率（合格率（% %）芜湖芜湖16161616100100亳州亳州10109 990.0090.00宣城宣城11111111100100淮南淮南9 98 888.8988.89滁州滁州11111111100100池州池州7 76 685.7185.71马鞍山马鞍山6 66 6100100淮北淮北5 54 480.0080.00铜陵铜陵6 66 6100100蚌埠蚌埠1313101076.9276.92宿州宿州1212111191.6791.67安庆安庆1616121