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文档简介

CRISPRCas9技术的应用性研究作者：舒磊磊 甲芝莲 吴勇浒 索 伦 贾丽玲杂志：畜牧兽医学报报告人：滕娜摘 要旨在探索CRISPRCas9技术 的新应用,本研究通过在小鼠遗传操作中使 用 该 技术，创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和 PCR分析等手段，结果发现，针对DCX基因进行编辑，再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型，说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达；其次，该技术还成功应用于Pcdha基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的功能;最后,通过基因型鉴定发现，胚胎电转中使用CRISPRCas9会导致目的基 因 的 敲 除、反转和重复事件的发生。综 上 所 述，在小鼠胚胎电转中使用CRISPRCas9技术，能够成功编辑目的基因，从而实现活体组织内研究基因的在体功能。CRISPR/Cas 的基因座结构方法表型观察遗传操作脑片获取PCR分析基因敲除表达质粒的构建统计和分析构建sgRNA构建sgRNA的核苷酸序列结果CRISPRCas9转染 后 可 重 现 目 的 基 因 RNAi的表型结果结果结果CRISPRCas9可导 致 目 的 基 因 片 段 的 敲 除、反转和重复结果结果结果结果结果 基因簇敲除、反转和重复种事件精确修复的比例结 论本研究证明了在遗传操作中使用CRISPRCas9能够产生目的基因的敲

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