土传病害生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺的研究学习教案

1、会计学1土传病害土传病害(bnghi)生防菌哈茨木霉菌剂生产生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺的研究工艺的研究第一页，共21页。报告报告(bogo)(bogo)内容内容一、国内外研究现状与趋势一、国内外研究现状与趋势二、研究意义二、研究意义三、研究目标三、研究目标(mbio)与内容与内容四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线五、研究进度安排五、研究进度安排六、研究基础六、研究基础七、已具备的研究条件七、已具备的研究条件第1页/共21页第二页，共21页。一、国内外研究现状与趋势一、国内外研究现状与趋势作物枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的一类作物枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的一类土传性真菌病害。土传性真菌病害

2、。病原菌从根部侵入植物，引起维管束病病原菌从根部侵入植物，引起维管束病变，引起萎蔫死亡。变，引起萎蔫死亡。目前，枯萎病的防治主要是化学药剂防目前，枯萎病的防治主要是化学药剂防治法，抗病育种法以及轮作法。治法，抗病育种法以及轮作法。化学药剂对环境的危害严重，抗病品种化学药剂对环境的危害严重，抗病品种培育费时费力，轮作又限制，生物防治就培育费时费力，轮作又限制，生物防治就成为最受青睐成为最受青睐(qngli)(qngli)的办法。的办法。第2页/共21页第三页，共21页。生防微生物主要有木霉菌、丛枝菌根真菌、非致病性尖孢镰刀生防微生物主要有木霉菌、丛枝菌根真菌、非致病性尖孢镰刀菌。其中，木霉菌对多

3、种植物病害具有很好的生防作用，被认菌。其中，木霉菌对多种植物病害具有很好的生防作用，被认为为(rnwi)(rnwi)具有重要生防价值。具有重要生防价值。木霉菌已广泛用于各种作物枯萎病的防治中，如木霉菌已广泛用于各种作物枯萎病的防治中，如Thangavelu, Thangavelu, 2003; 2003; 杨春林杨春林, 2008; Ling N, 2009, 2008; Ling N, 2009。国内外已有商品化木霉制剂，较多为液体发酵液及其孢子菌剂国内外已有商品化木霉制剂，较多为液体发酵液及其孢子菌剂。采用固体发酵方式的较少。采用固体发酵方式的较少。一、国内外研究现状与趋势一、国内外研究现

4、状与趋势第3页/共21页第四页，共21页。 本实验室已筛选出一株哈茨木霉菌本实验室已筛选出一株哈茨木霉菌FJAT-9040FJAT-9040，研究表，研究表明，其对多种作物枯萎病有良好的防治明，其对多种作物枯萎病有良好的防治(fngzh)(fngzh)作用作用。二、研究意义二、研究意义为了该菌更好的产业化生产，利用微生物发为了该菌更好的产业化生产，利用微生物发酵床养猪产生的副产物酵床养猪产生的副产物垫料作为主要原料垫料作为主要原料(yunlio)(yunlio)进行固体发酵，形成哈茨木霉菌肥进行固体发酵，形成哈茨木霉菌肥菌剂。菌剂。一方面实现了资源的再利用，另一方面哈茨一方面实现了资源的再利用

5、，另一方面哈茨木霉菌肥菌剂在应用中可起到增强植物抗性及木霉菌肥菌剂在应用中可起到增强植物抗性及防病效果。防病效果。第4页/共21页第五页，共21页。（一）研究（一）研究(ynji)目标目标三、研究目标与内容三、研究目标与内容1 1、探究不同营养物质、培养条件对生防菌哈茨木霉产探究不同营养物质、培养条件对生防菌哈茨木霉产孢的影响。孢的影响。2 2、摸索生防菌哈茨木霉固体发酵的方式，为其扩大生摸索生防菌哈茨木霉固体发酵的方式，为其扩大生产提供可靠依据。产提供可靠依据。3 3、摸索生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营养成分的变摸索生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营养成分的变化，为其发酵过程中补料提供技术参数。

6、化，为其发酵过程中补料提供技术参数。4 4、探究生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺流程，为生防菌、探究生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺流程，为生防菌哈茨木霉菌剂工业化和商品化奠定基础。哈茨木霉菌剂工业化和商品化奠定基础。第5页/共21页第六页，共21页。三、研究目标与内容三、研究目标与内容（二）研究内容（二）研究内容1 1、哈茨木霉固体发酵、哈茨木霉固体发酵(f jio)(f jio)条件的研究条件的研究2 2、哈茨木霉固体发酵、哈茨木霉固体发酵(f jio)(f jio)方式的研究方式的研究3 3、哈茨木霉固体发酵、哈茨木霉固体发酵(f jio)(f jio)过程中营养成分的检测过程中营养成分的检测4 4

7、、哈茨木霉固体发酵、哈茨木霉固体发酵(f jio)(f jio)产物的保存期及菌体稳定性检产物的保存期及菌体稳定性检测测5 5、哈茨木霉菌剂的田间应用、哈茨木霉菌剂的田间应用第6页/共21页第七页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一（一）研究方法）研究方法生防菌哈茨木霉固体发酵条件的研生防菌哈茨木霉固体发酵条件的研究究培养基配方培养基配方(pi fng)(pi fng)的筛选的筛选垫料垫料麸皮麸皮(f p)(f p)比例比例麦粒麦粒(mi l)(mi l)含量含量碳源碳源及其及其浓度浓度氮源氮源及其及其浓度浓度响应面法筛选最佳配方响应面法筛选最佳配方培养条件培养条件的筛

8、选的筛选含含水水量量接接种种量量培培养养温温度度培培养养时时间间响应面法筛选最佳培养条件响应面法筛选最佳培养条件第7页/共21页第八页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一（一）研究方法）研究方法生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研究究非灭菌条件下对菌株生长非灭菌条件下对菌株生长(shngzhng)的影响的影响灭菌条件下对菌株生长灭菌条件下对菌株生长(shngzhng)的影响的影响固固体体发发酵酵方方式式不同灭菌温度不同灭菌温度(wnd)不同灭菌时间不同灭菌时间第8页/共21页第九页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一（一）

9、研究方法）研究方法生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研究究浅盘培养浅盘培养(piyng)法法蘑菇蘑菇(m gu)菌棒培养法菌棒培养法固固体体发发酵酵方方式式第9页/共21页第十页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一（一）研究方法）研究方法生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营养成分的检测养成分的检测近红外光分析仪近红外光分析仪碳源的碳源的变化变化氮源的氮源的变化变化水分的水分的变化变化营养成分的营养成分的检测检测第10页/共21页第十一页，共21页。不同不同(b tn)湿度湿度不同不同(b tn)温度温度不同不同(b (b

10、tn)tn)时间时间保存期及稳保存期及稳定性检测定性检测四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一（一）研究方法）研究方法哈茨木霉固体发酵哈茨木霉固体发酵产物产物保存期及菌保存期及菌体稳定性检测体稳定性检测孢子萌发情况孢子萌发情况第11页/共21页第十二页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（一）研究方法（一）研究方法生防菌哈茨木霉生防菌哈茨木霉FJAT-9040FJAT-9040菌剂菌剂 的的田间田间应用应用菌剂的田间应用菌剂的田间应用种子出苗种子出苗植株生长情况植株生长情况枯萎病防效枯萎病防效茄科：番茄科：番茄茄(fnqi)、茄子、茄子瓜类：黄瓜类：黄瓜、甜瓜瓜、

11、甜瓜番茄番茄(fnqi)、茄子茄子番茄番茄(fnqi)、茄子、茄子第12页/共21页第十三页，共21页。四、研究方法与技术路线四、研究方法与技术路线（二）技术路线（二）技术路线生防防菌哈菌哈茨木茨木霉霉FJAT-FJAT-90409040菌剂菌剂生产生产工艺工艺(gngy)的研究的研究发酵发酵(f jio)条件条件的研究的研究发酵发酵(f jio)方式方式的研究的研究营养成分营养成分的检测的检测产物的产物的保存期保存期和稳定和稳定性的检性的检测测菌剂菌剂的田的田间应间应用用第13页/共21页第十四页，共21页。五、研究进度安排五、研究进度安排2012年2013年4-52013年6-72013年

12、8-102013年菌株FJAT-9040固体发酵(f jio)条件的研究固体发酵(f jio)方式的研究固体(gt)发酵过程营养成分的检测固体发酵产物保存期及稳定性的检测菌剂的应用第14页/共21页第十五页，共21页。六、研究基础六、研究基础 张衡宇等对该菌株的研究主要包括生物学、液体发酵条件、对张衡宇等对该菌株的研究主要包括生物学、液体发酵条件、对不同不同(b tn)(b tn)枯萎病病原菌的抑制作用。枯萎病病原菌的抑制作用。 肖荣凤等对该菌株的肖荣凤等对该菌株的GFPGFP标记进行了研究，获得了标记进行了研究，获得了1 1株荧光性状株荧光性状稳定的菌株稳定的菌株FJAT-9295FJAT-

13、9295；同时对该菌株土壤定殖示踪进行了研究，研；同时对该菌株土壤定殖示踪进行了研究，研究表明菌株在育苗土中定殖最好，究表明菌株在育苗土中定殖最好， 泥土中定殖最差；种植茄子的定泥土中定殖最差；种植茄子的定殖效果比未种植的好。殖效果比未种植的好。（一）实验室研究（一）实验室研究(ynji)基础基础第15页/共21页第十六页，共21页。六、研究基础六、研究基础通过单因素方法通过单因素方法(fngf)筛选出了垫料与麸皮的最佳筛选出了垫料与麸皮的最佳产孢比例垫料：麸皮产孢比例垫料：麸皮9：1，产孢量为，产孢量为4.6107个个/ml。0.00E+002.00E+074.00E+076.00E+071

14、0：0 9：18：27：36：45：5 0：10垫料与麸皮（体积比）平均孢子数（个/ml）培养基配方的筛选培养基配方的筛选(shixun)(shixun)垫料与麸垫料与麸皮的比例皮的比例（二）本实验研究（二）本实验研究(ynji)基基础础第16页/共21页第十七页，共21页。六、研究基础六、研究基础通过单因素通过单因素(yn s)方法筛选出了外加麦粒的含量，方法筛选出了外加麦粒的含量，40%（体积比）（体积比）产孢量为产孢量为2.3108个个/ml。0.00E+001.00E+082.00E+083.00E+08010%20%30%40%50%麦粒含量（体积比）平均孢子数（个/ml）培养基配方

15、的筛选培养基配方的筛选麦粒麦粒(mi l)(mi l)含量的含量的筛选筛选第17页/共21页第十八页，共21页。六、研究基础六、研究基础通过通过(tnggu)单因素方法筛选出了外加碳源为蔗糖，添加量单因素方法筛选出了外加碳源为蔗糖，添加量为为0.1g/50ml。0.00E+004.00E+088.00E+08不加碳源葡萄糖蔗糖乳糖不同碳源平均孢子数（个/ml）0.00E+001.00E+082.00E+0800.1g0.2g0.3g0.4g0.5g蔗糖质量平均孢子数（个/ml）培养基配方培养基配方(pi fng)(pi fng)的筛选的筛选碳源及其碳源及其浓度的筛选浓度的筛选第18页/共21页第十九页，共21页。七、已具备的研究条件七、已具备的研究条件 该菌株的生物学特性、液体发酵条件、对不同枯萎病病该菌株的生物学特性、