探究：酵母菌种群数量的变化实验复习过程

1、探究探究(tnji)： 培养液中酵母菌培养液中酵母菌 种群数量的变化种群数量的变化第一页，共21页。探究探究(tnji)：培养液中酵母菌种群数量的：培养液中酵母菌种群数量的变化变化目的要求目的要求1、学习利用血球计数、学习利用血球计数(j sh)板进行微生物计数板进行微生物计数(j sh)的的方法方法2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化3、注意样方法的应用、注意样方法的应用4、体会影响种群数量变化的因素、体会影响种群数量变化的因素第二页，共21页。1、酵母菌的繁殖、酵母菌的繁殖(fnzh)方式主要是方式主要是:2、酵母菌的呼吸、酵母菌的呼吸(hx)方式

2、是方式是:兼性厌氧兼性厌氧(可进行可进行(jnxng)有氧呼吸和无有氧呼吸和无氧呼吸氧呼吸)回顾思考回顾思考: :出芽生殖出芽生殖3、酵母菌酵母菌的培养条件要注意那些问题的培养条件要注意那些问题? 比如要用适宜的温度培养比如要用适宜的温度培养,调节好调节好PH值值,溶溶氧量的控制等。氧量的控制等。 酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母菌酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培养液可以用液体培养基（培养液）来培养。培养液中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品的制作中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品的制作有密切关系。有密切关系。第三页，共21页。培养液中酵母菌种群数量开始

3、培养液中酵母菌种群数量开始(kish)一段时间是一段时间是“J”型增长，由于型增长，由于营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，PH值的改变，种群数量呈值的改变，种群数量呈“S”型增长。型增长。探究：培养液中酵母菌种群探究：培养液中酵母菌种群(zhn qn)数量的变化数量的变化问题：培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温问题：培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温度会影响度会影响(yngxing)(yngxing)酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响(yngxing)(yngxing)酵母菌的生长吗？酵母菌的生长吗？ 作出

4、假设作出假设 根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：讨论探究思路讨论探究思路 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（数板（2mm2mm2mm2mm方格）、滴管、显微镜等，都由老师提供。方格）、滴管、显微镜等，都由老师提供。 在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。第四页，共21页。实验设计实验设计 将将9支试管分成支试管分成ABC三组，每组三组，每组3支。支。A组为实验组，组为实验组，装培养液装培养液10

5、mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度28。B组装培养液组装培养液10 mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度5，与与A组形成温度条件对照组形成温度条件对照(duzho)。C组不装培养液，组不装培养液，只装无菌水只装无菌水10mL,酵母菌母液酵母菌母液0.1mL,环境温度环境温度28，与与A组形成营养条件对照组形成营养条件对照(duzho)。 第五页，共21页。实验操作：实验操作：(1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；(2)、预先设计分装。先每次用、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL培养液到

6、培养液到A组组和和B组试管，用另一支组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL无菌水到无菌水到C组试管。待组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。的名称、组别、日期。(3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌；、用高压蒸汽灭菌锅灭菌；(4)、接种菌种：用灭菌干净的、接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母酵母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）(5)

7、、培养：将、培养：将 A、C试管置于试管置于 28的恒温箱中培养。将的恒温箱中培养。将 B试管置于试管置于5的恒温箱中培养。（的恒温箱中培养。（5的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5时时代替。）代替。）(6)、计数和记录：每天取样时间、计数和记录：每天取样时间(shjin)大体一致，每次每组按序号取大体一致，每次每组按序号取一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计数后，立分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计

8、数后，立即将数据填到记录表格中。即将数据填到记录表格中。第六页，共21页。 分析结果分析结果(ji gu)，得出结论，得出结论 将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果(ji gu)是否是否支持你所做的假设。支持你所做的假设。 酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈 “S”型增长型增长(zngzhng)，但之后会下降。温度、，但之后会下降。温度、营养成分会影响酵母菌种群数量的变化。营养成分会影响酵母菌种群数量的变化。探究探究(tnji)的的结论：结论：第七页，共21页。一、怎样进行酵母菌的计数？一、怎样进行酵

9、母菌的计数？ 提示：对一支试管中的培养液提示：对一支试管中的培养液(可定为可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的，中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测的方法：先将盖玻片放可以采用抽样检测的方法：先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余培养玻片边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片刻，待酵母菌细胞液用滤纸吸去，稍待片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数数 量，再以

10、此为根据量，再以此为根据(gnj)，估算试管，估算试管中的酵母菌总数。中的酵母菌总数。第八页，共21页。 介绍介绍:血球血球(xuqi)计数板的构造计数板的构造1、血球计数板：是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞，、血球计数板：是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量数量，如单位体细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量数量，如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台(pngti)，中间的平台，中间的

11、平台(pngti)较宽，其中间又被一短横槽较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。刻有一个方格网。第九页，共21页。化化放大后的方格网计数室放大后的方格网计数室 I H G F E D C B A251616252、方格、方格(fn )网网的构成：的构成：方格网上刻有方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分为室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分为16中格中格(zhn )，每一中格，每一中格(zhn )又分为又分为25小格；另一种是小格；另一种是大方格内

12、分为大方格内分为25中格中格(zhn )，每一中格，每一中格(zhn )又分又分为为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由同的特点，即每一大方格都是由1625=2516=400个小方个小方格组成。格组成。第十页，共21页。3、使用、使用(shyng)方法方法: 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的盖玻片，将稀释(xsh)后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内，加盖盖玻片。第十一页，共21页。5、单位换

13、算、单位换算(hun sun): 以以1mm1mm为例，大方格的为例，大方格的长和宽各为长和宽各为1mm，深度为，深度为0.1mm，其体积为，其体积为0.1mm3。换算换算(hun sun)为为1mL：1000/0.1= 104即即1mL是是104 个个0.1mm3 。 4、计数、计数(j sh)室的规室的规格：格：计数计数(j sh)室长室长宽有：宽有：1mm1mm, 2mm2mm,3mm3mm等等深度均为深度均为0.1mm。第十二页，共21页。 如果使用规格为如果使用规格为16格格25格的计数室，要格的计数室，要按对角方位，取左上、右上、左下、右下按对角方位，取左上、右上、左下、右下4个中

14、个中格格(即即100个小格个小格)的酵母菌数。的酵母菌数。 如果使用规格为如果使用规格为25格格16格的计数室，除格的计数室，除了取其了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中个对角方位外，还需再数中央的一个中格格(即即80个小方格个小方格)的酵母菌数（五点取样法）。的酵母菌数（五点取样法）。 出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个即可作为两个(lin )菌体计算。菌体计算。 6、如何、如何(rh)计数呢？计数呢？第十三页，共21页。规格规格(gug)为为25格格16格的计数室，五点格的计数室，五点取样法取样法第十四页，共21页。7、盖玻片

15、下的培养液厚度为、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm，请推算出将一个，请推算出将一个小方格小方格(fn )范围内的酵母菌数，换算成范围内的酵母菌数，换算成10ml培养培养液中酵母菌总数的公式。液中酵母菌总数的公式。 每每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （以（以1mm1mm为例）：为例）： （1）16格格25格的血球计数格的血球计数(j sh)板计算公式板计算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(100小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/100)400 104 稀释倍数稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数稀释倍数 （2）

16、25格格x16格的血球计数板计算公式格的血球计数板计算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(80小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/80)400 104 稀释倍数稀释倍数即：一小即：一小(y xio)方格内酵母菌个数方格内酵母菌个数 4 106稀释倍数稀释倍数第十五页，共21页。 课本课本(kbn)中大方格的长和宽各为中大方格的长和宽各为2mm，深度为，深度为0.1mm，其体积为，其体积为0.4mm3。换算为。换算为1mL：1000/0.4 = 2.5103 ，即，即1mL是是 2.5103个个 0.4mm3。 则：每则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式菌液中所含的酵母菌个数计算公式（2

17、mm 2mm ） ：（1）16格格25格的血球计数格的血球计数(j sh)板计算公式板计算公式 酵母细胞数酵母细胞数/ml=(100小格内酵母细胞个数小格内酵母细胞个数/100)400 2.5103稀释倍稀释倍数数即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀释倍数稀释倍数（2）25格格x16格的血球计数板计算公式格的血球计数板计算公式: 酵母细胞酵母细胞(xbo)数数/ml=(80小格内酵母细胞小格内酵母细胞(xbo)个数个数/80)400 2.5103 稀释倍数稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数即：一小方格内酵母菌个数106稀释倍数稀释倍数第十六页，共21页。使酵母菌混合使酵母菌

18、混合(hnh)均匀。均匀。不需要不需要(xyo)，因不同时间取样已形成对，因不同时间取样已形成对照。照。 需要需要(xyo)。尽量减少误差。对每个样。尽量减少误差。对每个样品计数三次品计数三次,取其平均值。取其平均值。二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建议二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？ 三、本探究需要设置对照吗？如果需要三、本探究需要设置对照吗？如果需要,请请讨论对照组应怎样设计和操作，如果不需要，讨论对照组应怎样设计和操作，如果不需要，请说明理由。请说明理由。 四、需要做重复实验吗？四、需要做重复实验吗？第十七页

19、，共21页。 时间（d） 酵母菌细胞数量（酵母菌细胞数量（ 106个个/mL） A组 B组 C组A1A2A3平均B1B2B3平均C1C2C3平均1234567五、怎样五、怎样(znyng)记录结果？记录表怎样记录结果？记录表怎样(znyng)设计？设计？ 第十八页，共21页。. 只计数相邻两边及其顶角的酵母只计数相邻两边及其顶角的酵母(jiom)细胞数细胞数 稀释培养液。稀释的目的是便于稀释培养液。稀释的目的是便于(biny)酵母菌悬液的计数，以每小方酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。倍即可。八、血球计数八、血球计数(j sh)板的清洁板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须燥。通过