第二章药物的鉴别

1、1第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验（Identification Test）2主要内容主要内容 鉴别方法鉴别方法 鉴别试验的项目和原理鉴别试验的项目和原理23 3 鉴别试验的概念鉴别试验的概念3 1 小结和习题小结和习题5 鉴别试验的条件及方法验证鉴别试验的条件及方法验证3 43一、概述一、概述鉴别试验鉴别试验的的定义定义鉴别试验鉴别试验的的对象对象 根据药物的分子结构、理化性质，采用根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。它是药品质量检验工作中的物的真伪。它是药品质量检验工作中的首项任务。首项任务。有标签内容的

2、药物有标签内容的药物不是对未知物进行定性分析不是对未知物进行定性分析4 鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。二、鉴别试验的项目二、鉴别试验的项目性性 状状 一般鉴别试验一般鉴别试验 专属性鉴别试验专属性鉴别试验5药物的性状（药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。包括外观、溶解度和物理常数等。（一）性状（一）性状u外观外观 指药物的聚集状态、

3、晶型、色泽以及臭、味等性质指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质u溶解度溶解度 u物理常数物理常数6药物的性状（药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。包括外观、溶解度和物理常数等。（一）性状（一）性状卡莫司汀卡莫司汀 【性状性状】 本品为无色或微黄或微黄绿色结晶或结晶本品为无色或微黄或微黄绿色结晶或结晶性粉末；无臭。性粉末；无臭。扑米酮扑米酮 【性状性状】 本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。 卡波姆卡波姆 【性状性状】本品为白色疏松状粉末；有特征性微臭；有本品为

4、白色疏松状粉末；有特征性微臭；有引湿性。引湿性。 1外观外观 指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。72. 溶解度溶解度 在一定程度上反映了药品的纯度。药在一定程度上反映了药品的纯度。药典采用典采用“极易溶、易溶、溶解、略溶、微溶、极极易溶、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。剂中的溶解性能。8去乙酰毛花苷去乙酰毛花苷 本品在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在水或氯仿中几乎不溶。本品在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在水或氯仿中几乎不溶。 丙硫氧嘧啶丙硫氧嘧

5、啶 本品在乙醇中略溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠试液或氨试液中本品在乙醇中略溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠试液或氨试液中溶解。溶解。丙酸氯倍他索丙酸氯倍他索 本品在氯仿中易溶，在醋酸乙酯中溶解，在甲醇和乙醇中略溶，在本品在氯仿中易溶，在醋酸乙酯中溶解，在甲醇和乙醇中略溶，在水中不溶。水中不溶。 93.物理常数物理常数 不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药品的纯杂程度。 药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值

6、、碘值、吸收系数。、羟值、碘值、吸收系数。10（1） 熔熔 点点1测定易粉测定易粉碎的固体碎的固体药品药品。 2测定不易粉碎测定不易粉碎的固体药品的固体药品( (如脂肪、脂如脂肪、脂肪酸、石蜡、肪酸、石蜡、羊毛脂等羊毛脂等) )。 3测定凡士林或测定凡士林或其他类似物质其他类似物质。 熔点：固体熔点：固体 液体的温度液体的温度11旋光度指偏振光旋转的度数。当平面偏振光通过含有某些光学活性物质的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。 具有光学异构体的药物有相同的物理性质和化学性质，但它们的旋光性能是不同的，一般分为左旋体、右旋体和消旋体。在有些药物中，两种光学异构体的药理作

7、用相同，如氯喹、可待因，但有很多药物的生物活性并不同，如奎宁左旋体治疗疟疾，奎尼丁右旋体治疗心律不齐。（2）比旋度区别或检查某些药品的纯杂程度区别或检查某些药品的纯杂程度用以测定药物的含量用以测定药物的含量。12（3 3）吸收系数）吸收系数替硝唑替硝唑 2-甲基甲基-1-2-（乙基磺酰基）乙基（乙基磺酰基）乙基-5-硝基硝基-1H咪唑咪唑吸收系数吸收系数 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含中约含12g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法(附附 录录 A)，在，在317nm的波长处测的波长处测定吸收度，吸收系数定吸收度，吸收系数为

8、为352378。 在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。液层厚度时的吸收度称为吸收系数。 有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为1 1（W/V)W/V)，厚度为，厚度为lcmlcm时的吸光度，用时的吸光度，用 表示。表示。%11cmE%11cmE13 一般鉴别试验（一般鉴别试验（general identification t

9、est)是依据某一类药是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪真伪。（二）一般鉴别试验（二）一般鉴别试验无机药物无机药物有机药物有机药物阴离子和阳离子的特殊反应阴离子和阳离子的特殊反应典型的官能团反应典型的官能团反应u 只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物u 数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在不适用数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在不适用14有机氟化物有机氟化物无机酸根无机酸根有机酸盐有机酸盐芳香第一胺芳香第一胺无机金属盐无机金属盐托烷生物碱

10、类托烷生物碱类药品药品几类典型一般鉴别试验几类典型一般鉴别试验15鉴别原理苯巴比妥及其钠盐、司可巴比妥、异戊巴比妥及其钠盐等原料药及其制剂的分子结构中均以丙二酰脲为母体，都能在弱碱性溶液中与硝酸银作用生成二银盐的白色沉淀；也能与铜吡啶试液作用显紫色。(1) (1) 丙二酰脲类丙二酰脲类16鉴别方法 (1) 取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。 (2) 取供试品约50mg，加吡啶溶液(110)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml,即显紫色或生成紫色沉淀丙二酰脲类丙二

11、酰脲类17NHNOOR1R2ONaNNOOR1R2ONaAg+AgNO3+Na2CO3+NaHCO3NaNO3NNOOR1R2ONaAgNNOOR1R2OAgAgAgNO3+NaNO3I I 与银盐反应与银盐反应丙二酰脲类丙二酰脲类18II II 与铜盐反应与铜盐反应NHNOOR1R2OHNHNHOOR1R2ONHNOOR1R2O+-H+ NNNHNOOR1R2ONNNNHOOR2R1ONHNOOR1R2O+2+Cu-2Cu丙二酰脲类丙二酰脲类P11519取供试品约取供试品约7mg，照，照氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（附录（附录 C）进行有机破坏）进行有机破坏，用水，用水20ml与与0.01mol/L

12、氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，待燃为吸收液，待燃烧完毕后，充分振摇；取吸收液烧完毕后，充分振摇；取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加，再加12醋酸钠的稀醋酸溶液醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至，用水稀释至4ml，加，加硝酸亚铈试液硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色；同时做空白对照试验。，即显蓝紫色；同时做空白对照试验。鉴别方法鉴别方法（2）有机氟化物）有机氟化物20例：例：氟康唑氟康唑 【鉴别鉴别】 (1) (1)取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml1ml中含中含200g200g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法( (附录附录 A

13、) A)测定测定，在，在261nm 261nm 与与267nm267nm的波长处有最大吸收，在的波长处有最大吸收，在264nm264nm的波长处有最小吸收。的波长处有最小吸收。 (2)(2)本品的红外本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致光吸收图谱应与对照品的图谱一致。 (3)(3)本品本品显有机氟化物的鉴别反应显有机氟化物的鉴别反应( (附录附录)。 2-(2,4-二氟苯基)-1,3-双(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-丙醇21（3）有机酸盐）有机酸盐包括：水杨酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐22水杨酸盐鉴别方法：（1）取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即 显紫色。（反

14、应式） （2）取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨 酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。 COOHOH水杨酸 （pKa2.98）23水杨酸盐水杨酸盐-FeCl3反应反应OHCOOH弱酸性中性orFeCl3COO-O-2Fe3Fe 紫色配合物反应适宜条件：反应适宜条件： 反应溶液反应溶液pH 46(强酸易使配合物分解强酸易使配合物分解) 反应宜在稀溶液中进行反应宜在稀溶液中进行24例：例：水杨酸镁水杨酸镁 【鉴别鉴别】 (1) (1) 取含量测定项下的溶液，照分光光取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录度法（附录 A A）测定。在）测定。在296 nm296 nm的波长处有的波长处有最大吸

15、收。最大吸收。 (2) (2) 本品的红外光吸收图谱应与本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集对照的图谱（光谱集6060图）一致。图）一致。 (3) (3) 本品的水溶液显镁盐与水杨酸盐的鉴别反应本品的水溶液显镁盐与水杨酸盐的鉴别反应（附录（附录）。）。 25酒石酸盐酒石酸盐鉴别方法-银镜反应：供试品的中性溶液，置洁净试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管内形成银镜。 26例：例：酒石酸美托洛尔酒石酸美托洛尔 【鉴别鉴别】 (1) (1) 取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml 1ml 中含中含20g 20g 的溶液，照分光光度法（附的溶液，照分光光度法（附

16、 录录 A A）测定，在测定，在224nm 224nm 的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。 (2) (2) 取本品约取本品约0.3g0.3g，置洁净的试管中，加水，置洁净的试管中，加水10ml10ml溶溶解，加氨制硝酸银试液置水浴中加热，银即游解，加氨制硝酸银试液置水浴中加热，银即游离并附在管的内壁成银镜。离并附在管的内壁成银镜。27（4）芳香第一胺）芳香第一胺取供试品约5mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1 mol/L 亚硝酸钠液数滴，滴加碱性萘酚试液数滴视供试品不同，发生由橙黄到猩红色沉淀。 普鲁卡因，苯佐卡因及磺胺类药物均呈此反应。 有一个氨基与苯环直接相连

17、NH2R28 氨苯砜氨苯砜 【鉴别鉴别】 (1) (1) 本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）。）。 (2) (2) 取本品，加甲醇制成每取本品，加甲醇制成每1ml 1ml 中含中含5g5g的溶液，照分的溶液，照分光光度法（附录光光度法（附录 A A）测定，）测定， 在在261nm261nm与与296nm 296nm 的波长的波长处有最大吸收。其吸收度分别为处有最大吸收。其吸收度分别为0.350.350.380.38与与0.590.590.620.62NH2+NaNO2+HClNNCl+NaCl+H2O2NNClOH+OHN=N+ NaCl +H2ORRRRN

18、aOH2（橙黄色）（橙黄色）29（5）托烷生物碱）托烷生物碱生物碱生物碱 生物碱（生物碱（alkaloid）是存在于生物体（主要为植物）中的一）是存在于生物体（主要为植物）中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性。多包含在环内，有显著的生物活性。 按照生物碱的基本结构，已可分为按照生物碱的基本结构，已可分为60类左右。类左右。 主要类型：有机胺类主要类型：有机胺类(麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱)、吡咯、吡咯烷类烷类(古豆碱、千里光碱、野百合碱古豆碱、千里光碱、野百合碱)、

19、吡啶类、吡啶类(菸碱、槟榔碱菸碱、槟榔碱、半边莲碱、半边莲碱)、异喹啉类、异喹啉类(小檗碱、吗啡、粉防己碱小檗碱、吗啡、粉防己碱)、吲哚类、吲哚类(利血平、长春新碱、麦角新碱利血平、长春新碱、麦角新碱)、莨菪烷类、莨菪烷类(阿托品、东莨菪阿托品、东莨菪碱碱)、咪唑类、咪唑类(毛果芸香碱毛果芸香碱)、喹唑酮类、喹唑酮类(常山碱常山碱)、嘌呤类、嘌呤类(咖啡咖啡碱、茶碱碱、茶碱)、甾体类、甾体类(茄碱、浙贝母碱、澳洲茄碱茄碱、浙贝母碱、澳洲茄碱)、二萜类、二萜类(乌头碱、飞燕草碱乌头碱、飞燕草碱)、其它类、其它类(加兰他敏、雷公藤碱加兰他敏、雷公藤碱)。30Vitali 反应反应ROOOH莨菪（l

20、iangdang)类HOOOH水解托烷类托烷类31COOHCHCH2OH莨菪酸+3 HNO3COOHCHCH2OH+NO2NO2O2NH2O3COOHCHCH2OH+NO2NO2O2NH2OKOHNOOKNO2O2NCHCH2OHCO2+（深紫色）（深紫色）32例：例：氢溴酸山莨菪碱氢溴酸山莨菪碱 【鉴别鉴别】 (1) (1) 本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录） (2) (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集287 287 图）一致图）一致(3) (3) 本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录本品的水溶液显

21、溴化物的鉴别反应（附录）。）。 33（6 6）无机金属盐）无机金属盐钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应 焰色反应焰色反应是某些金属或它们的挥发性化合物在无色火焰中灼烧时使火焰呈现特征的颜色的反应。灼烧金属或它们的挥发性化合物时，原子核外的电子吸收一定的能量，从基态跃迁到具有较高能量的激发态，激发态的电子回到基态时，会以一定波长的光谱线的形式释放出多余的能量，从焰色反应的实验里所看到的特殊焰色，就是光谱谱线的颜色。 每种元素的光谱都有一些特征谱线，发出特征的颜色而使火焰着色，根据焰色可以判断某种元素的存在。34取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰

22、即显各离子的特征颜色。钠离子显鲜黄色，钾离子显紫色，钙离子显砖红色。35例：例： 氨苄西林钠氨苄西林钠 【鉴别鉴别】 (1) (1) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰保留时间应与溶液的主峰保留时间应与 对照品溶液的主峰保留时对照品溶液的主峰保留时间一致。间一致。 (2) (2) 本品的红外光吸收图谱应与氨苄西本品的红外光吸收图谱应与氨苄西林林 三水物的对照图谱（光谱集三水物的对照图谱（光谱集658658图）一致。图）一致。 (3) (3) 本品显钠盐的火焰反应（附录本品显钠盐的火焰反应（附录）。）。36（3）铵盐加碱加热后放出氨或胺的反应测定原

23、理酰胺、内酰胺、磺酰胺、胺类和铵盐等能与酸生成盐的药物在过量碱作用下水解，受热时放出氨或胺、有氨或胺臭，并可使湿润的红色石蕊试纸变蓝。氨与硝酸亚汞反应析出单质汞。37NH4+OH-NH3+H2O RCONH2+NaOH RCOONa+NH3RNH2HX + NaOH RNH2+NaX + H2O NH3+2 Hg2(NO3)2+H2OOHgHgNH2.+2Hg+ 3 NH4NO34NO3红色石蕊试纸变蓝红色石蕊试纸变蓝硝酸汞试液湿润的试纸变黑硝酸汞试液湿润的试纸变黑38（7 7）无机酸根）无机酸根（1）氯化物 取供试品溶液，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；u分离，沉淀加氨

24、试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。u如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。 39取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰,混匀,加硫酸湿润, 缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。 40例例 盐酸妥卡尼盐酸妥卡尼 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约50mg50mg，加水，加水4ml4ml溶解后，加盐酸溶解后，加盐酸溶液溶液(9100)1ml(9100)1ml、重氮对硝基苯胺试液、重氮对硝基苯胺试液2ml2ml、氢、氢 氧化钠试液氧化钠试液4ml4ml与正丁醇与正丁醇2ml2ml，振摇，静置俟分层，振摇，静置俟分层

25、，正丁醇层显红色。，正丁醇层显红色。 (2)(2)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应本品的水溶液显氯化物的鉴别反应( (附录附录)。 41（2）硫酸盐取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。42例例硫酸特布他林硫酸特布他林 【鉴别鉴别】(1)(1)取本品约取本品约1mg1mg，置试管中，加水，置试管中，加水1ml1ml溶解，加缓冲溶解，加缓冲液液(pH9.5)(pH9.5)(取二羟甲基氨基甲烷取二羟甲基氨基甲烷36.

26、3g36.3g，加水溶解并稀释，加水溶解并稀释至至1000ml1000ml，用，用1mol/L1mol/L盐酸溶液调节盐酸溶液调节pHpH值至值至9.5)5ml9.5)5ml，加新，加新鲜制备的鲜制备的2 24-4-氨基安替比林溶液氨基安替比林溶液0.5ml0.5ml及新鲜制备的铁氰及新鲜制备的铁氰化钾溶液化钾溶液(225)2(225)2滴，混和，置水浴中加热，溶液显紫红滴，混和，置水浴中加热，溶液显紫红色。色。 (2)(2)取本品，加取本品，加0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml1ml中含中含0.1mg0.1mg的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法( (附录

27、附录 A) A)测定，在测定，在276nm276nm的的波长处有最大吸收。波长处有最大吸收。 (3)(3)本品的红外光吸收图谱应与对照本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致品的图谱一致( (附录附录 C) C)，如不一致时，再取本品适量，如不一致时，再取本品适量，溶于无醛甲醇中，置水浴蒸干后测定溶于无醛甲醇中，置水浴蒸干后测定。 (4)(4)本品的水溶液本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应显硫酸盐的鉴别反应( (附录附录)。 43（3）硝酸盐 （1）取供试品溶液，置试管中，加等量的硫酸，注意混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。 （2）取供试品溶液，加硫酸与铜丝(或铜屑)，加

28、热，即发生红棕色的蒸气。 （3）取供试品溶液，滴加高锰酸钾试液，紫色不应褪去(与亚硝酸盐区别)。44（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验 药物的专属鉴别试验（药物的专属鉴别试验（specific identification test)是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。 45CCCONONC OH5C2HH苯巴比妥PhenylbarbitalCCCONONC ONa

29、CH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥钠SecobarbitalCCCONONC OH5C2H5C2HH巴比妥5Barbital硫喷妥钠HCCCONONCSNaC2H5CH3CH2CH2CHCH3Thiopental Sodium 实例1-巴比妥类药物丙二酰脲母核46 一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别的鉴别不同药物类别的区别不同药物类别的区别。 专属鉴别试验，则是在专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础一般鉴别试验的基础上，上，利用各种利用各

30、种药物的化学结构差异药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终体，达到最终确证药物真伪确证药物真伪的目的。的目的。47三、鉴别方法三、鉴别方法 1 1）化学鉴别法）化学鉴别法 2 2）光谱鉴别法）光谱鉴别法 3 3）色谱法）色谱法 4 4）生物学法）生物学法48（一）、化学鉴别法化学鉴别法是根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应生成不同颜色，不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论的方法。特点：反应迅速、现象明显 49呈色反应 沉淀生成反应 生成气体

31、反应 生成荧光反应 褪色反应 生成衍生物测定熔点化学鉴别法501 1）化学鉴别法：）化学鉴别法： 使试剂褪色的鉴别反应使试剂褪色的鉴别反应 维生素维生素 【鉴别鉴别】 取本品取本品0.2g0.2g，加水，加水10ml10ml溶解后，照下述溶解后，照下述方法试验。方法试验。 (1) (1) 取溶液取溶液5ml 5ml ，加硝酸银试液，加硝酸银试液0.5ml 0.5ml ，即生成银的黑色沉淀。，即生成银的黑色沉淀。 (2) (2) 取溶液取溶液5ml 5ml ，加二氯靛酚钠试液，加二氯靛酚钠试液1 1 2 2 滴，试液的颜滴，试液的颜色即消失。色即消失。 (3) (3) 本品的红外光吸收图谱应与本

32、品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集对照的图谱（光谱集450450图）一致。图）一致。 51生成衍生物测定熔点生成衍生物测定熔点利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、缩氨基脲或水解甾体生成相应母体，测定熔点。52（二）、光谱鉴别法（二）、光谱鉴别法 定义：是以物质的物理和物理化学性质为基础的分析方法，需要特殊仪器。具有灵敏度高、信息量大等特点。l 紫外光谱法 (ultraviolet spectrophotometry)l 红外光谱法 (infrared spectrophotometry)l 近红外光谱法 (near-infrared spectrophotometry)l 原子吸收

33、法 (atomic absorption)531.紫外可见光谱鉴别法分子的紫外-可见吸收光谱法是基于分子内电子跃迁产生的吸收光谱进行分析的一种常用的光谱分析法。分子在紫外-可见区的吸收与其电子结构紧密相关。54当某种物质受到光的照射时，物质分子就会与光发生碰撞，其结果是光子的能量传递到了分子上。这样，处于稳定状态的基态分子就会跃迁到不稳定的高能态，即激发态： M（基态）+hv-M*（激发态）这就是对光的吸收作用。由于物质的能量是不连续的，即能量上一量子化的。只有当入射光的能量（hv）与物质分子的激发态和基态的能量差相等时才能发生吸收E=E2-E1= h=hc/而不同的物质分子因其结构的不同而具

34、有不同的量子化能级，即E不同，故对光的吸收也不同。55与有机化合物有关的价电子有与有机化合物有关的价电子有、和和n电子，主要跃迁有：电子，主要跃迁有：1NV跃迁：由基态跃迁至反键轨道：跃迁：由基态跃迁至反键轨道：-*、-*2NQ跃迁：非键电子跃迁到反键轨道：跃迁：非键电子跃迁到反键轨道：n-*、n-*3NR跃迁：跃迁：电子激发到更高能级或电离电子激发到更高能级或电离吸收波谱：吸收波谱： 远紫外紫外可见光配位场跃迁电荷转移跃迁*、频率56朗伯比尔定律朗伯比尔定律当入射光波长一定时（单色光），溶液吸光度当入射光波长一定时（单色光），溶液吸光度A只与溶只与溶液中有色物质浓度和比色皿厚度有关，成正比，

35、即液中有色物质浓度和比色皿厚度有关，成正比，即ALC = AkLC 式中：式中：k比例常数系吸系数比例常数系吸系数L比色皿厚度比色皿厚度C溶液浓度溶液浓度当当C为摩尔浓度，令为摩尔浓度，令k，称为摩尔吸光系数，称为摩尔吸光系数当当C为百分浓度，令为百分浓度，令kE，称为百分吸光系数，称为百分吸光系数57常用方法：常用方法：u测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长u规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度u规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收系数法u规定哪个吸收波长和吸光度比值法规定哪个吸收波长和吸光

36、度比值法u经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱值经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱值58例例1 1： 布洛芬布洛芬 【鉴别鉴别】 (1) (1) 取本品，加取本品，加0.40.4氢氧化钠溶液制成每氢氧化钠溶液制成每1ml1ml中含中含0.25mg0.25mg的溶液，照的溶液，照 分光光度法（附录分光光度法（附录 A A）测定，）测定，在在265nm265nm与与273nm273nm的波长处有最大吸收的波长处有最大吸收，在在245nm245nm与与271nm 271nm 的波长处有最小吸收的波长处有最小吸收，在在259nm259nm的波长处有一肩峰。的波长处有一肩峰。 (2) (2) 本品的红

37、外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集8585图）一致。图）一致。 592.红外光谱法红外光谱法 专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。 主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。 鉴别方法：中国药典和鉴别方法：中国药典和USP32均采用标准图谱对照法。均采用标准图谱对照法。 中国药典收载的光谱图，系用分辨率为中国药典收载的光谱图，系用

38、分辨率为2cm-1条件绘制，基线条件绘制，基线一般控制在一般控制在90%透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强吸收峰在吸收峰在10透光率以下。透光率以下。60红外光谱分析红外光谱分析 分子的振动能量比转动能量大，当发生振动能级跃迁时，不可避免地伴随有转动能级的跃迁，所以无法测量纯粹的振动光谱，而只能得到 分子的振动-转动光谱，这种光谱称为红外吸收光谱。 红外吸收光谱也是一种分子吸收光谱。 当样品受到频率连续变化的红外光照射时，分子吸收了某些频率的辐射，并由其振动或转动运动引起偶极矩的净变化，产生分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁,使相应于这些吸

39、收区域的透射光强度减弱。记录红外光的百分透射比与波数或波长关系曲线，就得到红外光谱。6162红外光区的划分红外光区的划分 红外光谱在红外光谱在可见光区和微波光区之间，波长范围约之间，波长范围约为为 0.75 0.75 -1000-1000m m，根据仪器技术和应用不同，习惯上又将根据仪器技术和应用不同，习惯上又将红外光区分为三个区：近红外光区（红外光区分为三个区：近红外光区（0.75 0.75 -2.5-2.5m m ），），中红外光区（2.5 - 25m ），远红外光区（远红外光区（2525- -1000- -1000m m ）。）。近红外光区（0.75 0.75 -2.5-2.5m m ）

40、 近红外光区的吸收带主要是由低能电子跃迁、含氢近红外光区的吸收带主要是由低能电子跃迁、含氢原子团（如原子团（如O OH H、N NH H、C CH H）伸缩振动的伸缩振动的倍频吸收等产生等产生的。的。63 波长波长 与波数之间的关系为：与波数之间的关系为： 波数波数/ / cmcm-1-1 = =10104 4 / /（ / / m m ） 中红外区的波数范围是中红外区的波数范围是4000 4000 400 400 cmcm-1-164红外光谱法的一般特点红外光谱法的一般特点1.专属性、专属性、2.测定快速、测定快速、3.不破坏试样、不破坏试样、4.试样用量少、试样用量少、5.操作简便、操作简

41、便、6.能分析各种状态的试样、能分析各种状态的试样、7.分析灵敏度较低、定量分析误差较大分析灵敏度较低、定量分析误差较大 定性的巨人、定量的矮子定性的巨人、定量的矮子65IR对样品的要求对样品的要求试样纯度应大于试样纯度应大于98%试样不应含水（结晶水或游离水）试样不应含水（结晶水或游离水）水有红外吸收，与羟基峰干扰，而且会侵蚀吸收池的盐窗。水有红外吸收，与羟基峰干扰，而且会侵蚀吸收池的盐窗。 所用试样应当经过干燥处理所用试样应当经过干燥处理试样浓度和厚度要适当试样浓度和厚度要适当(使最强吸收透光度在使最强吸收透光度在520%之间之间)66674.光谱鉴别法：原子吸收 利用原子蒸气可以吸收由该

42、元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度可以进行定性，定量分析68原子吸收光谱分析 的特点： 灵敏度高：其检出限可达 10 -9 g /ml ( 某些元素可更高 ) ； 选择性好 （分析不同元素时，选用不同元素灯，提高分析的选择性）； 具有较高的精密度和准确度；试样处理简单695.5.光谱鉴别法：核磁共振（光谱鉴别法：核磁共振（NMRNMR）自学）自学 70（三）射线粉末衍射法（三）射线粉末衍射法(自学）自学）71（四）、色谱法（四）、色谱法 利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱

43、行为（特征色谱行为（RfRf值或保留时间）进行鉴别试验。值或保留时间）进行鉴别试验。采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。72色谱起源加入石油醚分层加入石油醚分层胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素A、B Chromatography 原理: 基于物质在不同相之间具有不同的分配系数引起的分离 1906， M. S. Tswett73色谱分离的机理色谱分离的机理分离是一个物理的过程流动相（流动相（Mobile Phase）固定相（固定相（Stationary Phase）样品

44、（溶解于流动相中的溶质）样品（溶解于流动相中的溶质）74什么是液相色谱什么是液相色谱色谱液相色谱柱色谱纸色谱薄层色谱高高效效液液相相色色谱谱H HP PL LC C气相色谱75常用色谱法及其英文常用色谱法及其英文l薄层色谱法薄层色谱法 (Thin layer chromatography, TLC)l高效液相色谱法高效液相色谱法 (High performance liquid chromatography, HPLC)l气相色谱法气相色谱法 (Gas chromatography, GC)761. 薄层色谱法薄层色谱法 一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对一般采用对照品（或标准品

45、）比较法，要求供试品与对照品主斑点的颜色与位置应一致。照品主斑点的颜色与位置应一致。一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物质在相同的条件下可有不同的Rf值。因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件下比较Rf值可提供定性依据。 77薄层板种类薄层板种类:uG型型uGF- 254型型uH型型uHF-254型型 薄层板是在板基上铺一层吸附剂（或者吸干了固定相的载体）而形成的层析板78Rf(1)(2)(3)(4)l 同等条件下供试品与对照品的对比同等条件下供试品与对照品的对比l 供试品与对照品等体积混合供试品与对照品等体积混合l 与供试品化学类似结构的样品与对照品的对比与供试品化学类似结构的样

46、品与对照品的对比l 与供试品化学类似结构的溶液与供试品溶液混合与供试品化学类似结构的溶液与供试品溶液混合鉴别方法鉴别方法79（）薄层色谱法（）薄层色谱法硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 【鉴别鉴别】 (1) 取本品与阿米卡星标准品适量，分别加水制取本品与阿米卡星标准品适量，分别加水制成每成每1ml 中含中含10mg的溶的溶 液，照薄层色谱法（附录液，照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各试验，吸取上述两种溶液各10l ，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶 薄层板上，以氯仿甲醇浓氨溶液水薄层板上，以氯仿甲醇浓氨溶液水(1:4:2:1) 为展为展开剂，展开后，开剂，展开后， 晾干，喷晾干，喷 以

47、以0.2 茚三酮的水饱和正丁茚三酮的水饱和正丁醇溶液，在醇溶液，在100 加热加热10分钟，供试品溶液与标准品溶分钟，供试品溶液与标准品溶液液 所显主斑点的颜色与位置应相同。所显主斑点的颜色与位置应相同。 80(2) HPLC高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段：是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段：高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及

48、高灵敏度的检测器高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器广泛应用于各个领域：广泛应用于各个领域：医药医药 / 环保环保 / 石化石化 / 生命科学生命科学 / 食品及农业食品及农业 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段在技术，理论及应用上仍处于发展阶段81液相液相色谱的基本流程图色谱的基本流程图流动相 泵色谱柱检测器 泵输液分离 检测 记录AEGBCDF进样阀进样82HPLC的仪器配置的仪器配置83AU-0.0100.0000.0100.0200.0300.0400.0500.0600.0700.0800.0900.1000.1100.1200.1300.1400.1500.1600.1700.1800.1900.2000.210Minutes1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.00Method Conditions: Column: Zorbax SB C18 7.5 cm x 4.6 mm ID x 5 m Eluent A: 0.1% FAEluent B: Acetonitrile (0.1% FA)Temperature: 30 CFlow: 1 mL/minI