酶标仪应用总结1-吸收光检测

1、生物大分子定量生物大分子定量Absorbance 260 nmAbsorbance 260 nmAbsorbance 280 nmAbsorbance 280 nm生物大分子定量生物大分子定量核酸定量核酸定量（A260）原理：原理：核酸的嘌呤和嘧啶环含有共轭双键，对260nm左右的紫外光有较强的吸收；通过测量260nm的吸光值可计算出DNA、 RNA、寡聚核苷酸的浓度。检测实验：检测实验：260/280 Ratio TestDirect dsDNA Quantitation Direct Oligonucleotide Quantitation Direct RNA Quantificatio

2、n Particulate Test A320Phenol Test EDTA Inhibition Assay核酸定量定量核酸定量定量（A260）260/280 Ratio Test： 用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样。纯净的样品，纯的品，纯的DNA A260/280比值为比值为 1.8 ；纯的纯的RNA A260/280比值为比值为 2.0 。样品中如含有杂蛋白及苯酚，样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。比值即明显降低。 对于纯的核酸溶液，测定对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数

3、计算，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，通常以溶液中核酸的量，通常以1OD值相当于值相当于50gmL双螺旋双螺旋DNA，或，或40gmL单螺旋单螺旋DNA（或（或RNA），或），或20gmL寡核苷酸计算。寡核苷酸计算。 Particulate Test A320：检查经纯化、离心后仍残留在溶液中的不溶性颗粒，样本纯净时，扣除本底后的ODA320值应该为零。Phenol Test：核酸样品的A260/A2701,当比值2.0, 小于2.0 时表示存在EDTA污染。核酸定量定量核酸定量定量（A260）DNA我们知道，在我们知道，在260nm和和1cm光路经下，光路经下，1 1 OD 的的

4、DNA溶液的浓度是溶液的浓度是50 g/mlOD=消光系数消光系数*样品浓度样品浓度*光路径光路径微孔板微孔板 光路径光路径？DNADNA浓度？浓度？光路径长度校正无需标准曲线定量核酸光路径长度校正无需标准曲线定量核酸光路径长度校正光路径长度校正 纯水在纯水在977nm下有一个非常强的吸收峰，在下有一个非常强的吸收峰，在1cm比色皿比色皿中，其在中，其在977nm和和900nm下的吸光度的差为下的吸光度的差为0.18OD，而在此波长下其他物质是没有吸收的，因此可以巧妙地而在此波长下其他物质是没有吸收的，因此可以巧妙地利用纯水的这一特性，来校正不同样品之间的光路径长利用纯水的这一特性，来校正不同样品之间的光路径长度。度。 核酸样品溶液中肯定含有纯水，先测定微孔板中待测样核酸样品溶液中肯定含有纯水，先测定微孔板中待测样品在品在977nm和和900nm下的吸光度的差值下的吸光度的差值OD，然后根，然后根据以下公式计算出光路径长度据以下公式计算出光路径长度b：1cm0.18bODb 0.18OD 然后测定待测样品在然后测定待测样品在260nm下的吸光度下的吸光度OD260nm，根据根据朗伯比尔定律表达式，即可计算出样品