微生物学实验一

1、微生物学实验微生物实验课基本安排 必修课，36学时、2个学分； 采用模块化教学形式(3个模块，12个实验，11次课完成)； 操作考试(占50)实验论文（共三篇，每个模块写一篇）(占50)；微生物实验课要求（一）不允许无故旷课、早退和迟到；穿工作服；食品、饮料和饮用水等禁止带入实验室；注意水、电和火安全；正确使用化学试剂；正确操作各种仪器。微生物实验课要求（二） 每位同学做完实验后及时清理桌面，物品归位，清洁台面。 每次实验结束后，每排的4位同学留下值日，协助保持实验室清洁。微生物学实验模块环境微生物多样性观察（含4个单元实验）功能微生物的筛选、鉴定、培养条件优化和菌种选育（含5个单元实验）微生

2、物检测（含3个单元实验）实验一 环境微生物采集与分离模块一：环境微生物多样性观察一、实验目的1.了解环境与微生物的关系及其多样性；2.学习环境微生物（土壤、水体、人体等）采样的基本方法；3.初步掌握观察微生物的实验方法；4.了解光学显微镜显微观察的基本操作和油镜头的使用方法； 5.了解并熟悉微生物的稀释涂布分离方法与技术；6.树立严格的无菌意识和掌握正确的无菌操作方法。二、实验内容与方法（一）天然环境微生物样品的采集、分离、培养1.环境微生物样品采集（分组采集） 空气中微生物采集：牛肉膏蛋白胨平板和马铃薯培养基，打开皿盖在空气中暴露5min后盖上皿盖（全班室外和室内各一块）。 土壤微生物采集：

3、五点对角法取样，混匀，称取1 g土壤放入含9 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），振荡分散。 水体微生物采集与稀释：用灭菌三角瓶分别取污水和水库水约100 ml。2. 样品稀释 土壤样品的稀释：称量2 g土壤放入含18 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），混匀后用移液枪和枪头在离心管中进行10倍比逐级稀释成10-2,10-3的梯度样品。 水体微生物样品的稀释：将湖水和池塘水, 分别稀释成10-1,10-2, 10-3等系列。注意事项：土壤加入水后已稀释了10倍!逐级稀释的样品要混匀！0.1ml 样品样品0.9ml 无菌水无菌水注意无菌操作问题！ 为什么？使用灭菌器材取水和土样；使用酒精

4、灯灼烧实验器材；使用酒精灯火焰制造局部无菌环境，甚至使用超净工作台。3.样品的平板稀释涂布 取100l稀释液于固体培养基平板表面中央，用无菌的玻璃涂棒将样品液滴均匀涂布分散在平板表面。土壤样品：10-2,10-3样液（单号组10-2，双号组10-3） 1块 牛肉膏蛋白胨培养基 1块 高氏一号培养基 1块 马铃薯培养基水体样品：湖水:10-1，10-2, 池塘水:10-2,10-3样液（单号组库水，双号组污水） 2块 牛肉膏蛋白胨培养基Spread-Plate Technique涂布操作4. 培养将平板倒置倒置放入培养箱内进行培养。牛肉膏蛋白胨培养基： 30 24 h 下周每个班提前一天课前半小

5、时转接斜面, 培养高氏一号培养基： 28 1 week马铃薯培养基上： 28 1 week(三）口腔微生物的观察1.取样：用无菌棉签在口腔内反复擦拭几遍，然后将棉签涂布于载玻片上(事先放1/3滴水)。2.制片(单染色法) 涂片固定沙黄染色2分钟水洗至无色流液吸去残留水酒精灯干燥。3.显微镜油镜观察：按照低倍-高倍-油镜的顺序进行观察。单染色光学显微镜的基本结构1. 目镜（又称为接目镜或眼透镜）2. 物镜转换器3. 物镜4. 粗调旋钮5. 微调旋钮6. 载物台7. 光源8. 光阑和聚光器9. 推进器（又称为推片器） 油镜镜头的使用光源亮度适中，光圈75%左右，聚光镜调节至顶，干燥样品上滴加少许香柏油，用100镜头对准光路，用显微镜粗调将镜头与样品表面相接，然后用细调往与粗调相反方向调节直至出现清晰的影像。油镜清洗：擦镜纸擦去镜头上的油，擦