实验三：细菌分离接种技术和培养

1、实验三实验三 细菌分离、接种技术和培养法细菌分离、接种技术和培养法目的要求：目的要求：l 1 1、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。l 2 2、掌握平板划线、斜面培养基等接种方法。、掌握平板划线、斜面培养基等接种方法。l 3 3、熟悉细菌分离培养的环境和条件。、熟悉细菌分离培养的环境和条件。实验内容：实验内容： l1 1、 细菌划线分离培养：连续划线分离培养法细菌划线分离培养：连续划线分离培养法分区划线分离培养法分区划线分离培养法l2 2、 纯培养获得与移植：试管间的斜面移植；纯培养获得与移植：试管间的斜面移植；可疑菌落纯培养移植可疑菌落纯培养移植l3 3、

2、 液体培养基增菌和培养（示教）液体培养基增菌和培养（示教）l4 4、 半固体培养基穿刺培养（示教）半固体培养基穿刺培养（示教）实验三实验三 细菌分离、接种技术和培养法细菌分离、接种技术和培养法说明：说明： 病原菌的人工培养一般采用病原菌的人工培养一般采用35353737，培养时间多数为，培养时间多数为181824 h24 h，但有，但有时需根据菌种及培养目的作最佳选择，如细菌的药物敏感试验则应选用对数时需根据菌种及培养目的作最佳选择，如细菌的药物敏感试验则应选用对数期的培养物。将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散期的培养物。将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分

3、散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。一般作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。一般经过经过181824 h24 h培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为菌落（菌落（colonycolony）。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均）。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均为纯种，称为纯培养（为纯种，称为纯培养（pure culturepure culture）。从混杂的微生物群体中获得只含有）。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程

4、称为微生物的分离与纯化。微生物在固体培养某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物在固体培养基生长形成的单个菌落一般是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取基生长形成的单个菌落一般是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。单菌落而获得一种纯培养。细菌分离培养物纯培养菌的确定依据：细菌分离培养物纯培养菌的确定依据：l1. 1. 观察细菌分离培养物所获得细菌的菌落特征；观察细菌分离培养物所获得细菌的菌落特征；l2.2.结合显微镜检查细菌分离培养物细菌形态特征。结合显微镜检查细菌分离培养物细菌形态特征。细菌划线分离培养细菌划线分离培养可疑菌落纯培养移植可疑菌落

5、纯培养移植1区(1/10)4区3区2区(1/5)烧接种环烧接种环烧接种环烧接种环烧接种环烧接种环细菌平板细菌平板 分离方法分离方法细菌划线分离培养细菌划线分离培养病料的划线分离培养病料的划线分离培养细菌划线分离培养细菌划线分离培养Streptococcus pyogenes on blood agar, illustration b-hemolysis.Streptococcus pneumoniae on blood agar, illustration a-hemolysis.Staphylococcus aureus on blood agar, illustration b-hemolysis.Staphylococcus epidermidis on blood agar With on hemolysis细菌纯培养细菌纯培养细菌斜面细菌斜面 纯培养法纯培养法细菌纯培养细菌纯培养液体培养基液体培养基半固体培养基穿刺培养半固体