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文档简介

1、实验三实验三 沉淀反应沉淀反应 环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应 以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩 在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳；对流免疫电泳；微量免疫电泳 抗人血清抗牛血清待检血稀释液人血稀释液人血稀释液待检血稀释液抗牛血清抗人血清意义： 可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定 及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。 l(1)单向琼脂扩散（单扩）不同稀释度的Ag已知Ab意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig的含量。 l制备含抗体的琼脂板：l琼脂板凝固后依模板打孔l加样：参考血清和代检血清 原则：每孔10ul、加满孔、不含气泡、不溢出，每孔加样

2、量要准确均一 微量移液器的使用：各个微量移液器与相应血清一一对应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。l加样完置湿盒过夜后观察结果。l加样前判断孔内的琼脂是否已取出l加样时注意不要刮破琼脂以免影响沉淀线形状l加样时参考血清及待测标本应各用一支加样器，以免混淆，影响实验结果 (2)双向琼脂扩散已知Ab未知Ag132654中央孔FP诊断血清1，4阳性对照2 阳性病人血清（原液）3 阳性病人血清（1：10）5 阴性病人血清（原液）6 阴性病人血清（1：10）1图2实验内容：双扩 l附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系 Ab 表示Ag与Ab的分子量大小适中、浓度适宜 表示Ag的浓度大于Ab

3、表示Ab浓度的大于Agl优点：提高反应敏感度，缩短反应时间。l抗原抗体在电场中能定向移动，既限制了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应时间（1-2h即可），提高反应敏感度（10倍）。l火箭电泳 单扩+电泳不 同 稀 释度Ag已知Ab融 于琼脂板意义：用于制作不同稀释度FP含量的标准曲线，测定病人血清中FP含量。 l对流免疫电泳 双扩+电泳 已知Ab未知Ag意义： 用于HBsAg、FP检测及脑膜炎球菌分型测。？ Ag接电源正极，Ab接电泳负极 l 微量免疫电泳 先电泳后扩散 病人血清正常人血清已知Ab意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。 .配制1.5%琼脂板 .按图模式打孔及挖槽，槽内琼脂待抗原电泳完成后取出 .于圆孔（抗原孔）内加入抗原（可混加少许2% 溴甲酚兰，以观察白蛋白的泳动距离），然后按常规进行电泳（抗原端接阴极）。电泳时间23h（可根据白蛋白泳动距离判定） .取出凹槽的琼脂，加入抗体，将琼脂板移入湿盒中，置37恒温箱内2448h，取出。.观察沉淀弧生成情况，根据沉淀弧线的数量、位置和形状，与已知的标准（或正常）抗原、抗体形成的沉淀弧比较，分析、鉴定样

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