急性毒性试验设计

1、急性毒性试验设计急性毒性试验设计组员：程旺、高思杰、后若兰组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚高阳、陈刚一、急性毒性一、急性毒性 急性毒性指人或动物急性毒性指人或动物一次一次或或24 h之内之内多次多次接触外源化学物后，在短接触外源化学物后，在短期内所发生的毒性效应，包括致死期内所发生的毒性效应，包括致死效应。效应。意义？一次：指瞬间给实验动物染毒，如经一次：指瞬间给实验动物染毒，如经口、经静脉注射染毒。口、经静脉注射染毒。24 h之内多次：指外源化学物毒性过之内多次：指外源化学物毒性过低，需给予动物较大剂量。低，需给予动物较大剂量。 急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强急性毒性效应出现的快

2、慢和毒性反应的强度与外源化学物的度与外源化学物的性质性质和染毒剂量的大小和染毒剂量的大小有关。有关。 如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯丙烯腈是什么东西丙烯腈是什么东西 ？实验目的n确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数致死量致死量LD50，并根据并根据LD50进行急性毒性进行急性毒性分级分级，n掌握实验动物随机分组的方法和经口灌掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。胃的技术。n观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。提供依据；为毒理学机制研究提供线索。随机分配的方

3、法有哪些？丙烯腈经口急性毒性试验设计丙烯腈经口急性毒性试验设计实验目的n确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数确定丙烯腈急性毒性的强度，求出半数致死量致死量LD50，并根据并根据LD50进行急性毒性进行急性毒性分级分级，n掌握实验动物随机分组的方法和经口灌掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。胃的技术。n观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。提供依据；为毒理学机制研究提供线索。器材与试剂器材与试剂n1、实验动物 健康成年小鼠n2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子 n3、实

4、验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液实验方法实验方法 1、物种和品系、物种和品系 对外源化学物毒性反应与人近似对外源化学物毒性反应与人近似 易于饲养管理，方便实验操作易于获得易于饲养管理，方便实验操作易于获得 繁殖生育力强，数量较大能够保障繁殖生育力强，数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。品系纯化，价格低廉。 一、 实验动物选择实验动物选择2、 实验动物的年龄与体重实验动物的年龄与体重 动动 物物 大鼠大鼠 小鼠小鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 犬犬 猫猫成年年龄（周）成年年龄（周） 3 2 2 34 34 34 体重（克）体重（克） 150 15 250 1.5kg 715kg 1kg寿命（年）

5、寿命（年） 23 23 68 49 1520 1012n动物数量动物数量：动动物物46组，每组组，每组至少至少10只只n性别性别：雌雄各半雌雄各半n年龄年龄：成年动物：成年动物n生理与健康状况：生理与健康状况：未产未孕者、健康未产未孕者、健康动物动物n实验动物的预检实验动物的预检n实验动物的给药实验动物的给药前禁食处理前禁食处理。3、实验动物的一般要求、实验动物的一般要求健康动物标志健康动物标志发育正常、体态丰满、外观无畸形；发育正常、体态丰满、外观无畸形；被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；眼睛明亮；眼睛明亮；表皮无溃疡

6、、无结痂（注意尾巴）；表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）；各天然孔干净、无分泌物；各天然孔干净、无分泌物；行动灵活、反应敏捷行动灵活、反应敏捷。实验实验动物的标记动物的标记染色法染色法 编号方法：小鼠头部为编号方法：小鼠头部为1 1号，顺时号，顺时针编号，用苦味酸编个位数，用针编号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位数伊红编十位数。染色法染色法优点：优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。简单方便，不痛苦，无损伤。缺点：缺点： 时间较长时，染色剂易褪色；时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。标记容易模糊不清。随机化分组随机化分组 将实验动物编号，从随机数字表上任意横将实验动物编号，从随机数字表上任意

7、横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。随机数字，所得余数即为所属组别。20只动物的完全随机分配只动物的完全随机分配动物编号动物编号1234567891011121314151617181920随即数字随即数字5483805390755378934772095466954468676786除除4后余数后余数23012312130122300332所属组别所属组别二二三三四四一一二二三三一一二二 一一三三四四一一二二二二三三四四四四三三三三二二完全随机分配

8、后各组所属动物号完全随机分配后各组所属动物号 组别组别动物编号动物编号一一47912二二1581320 14三三26101518 19四四311161720只动物完全随机分配的结果 组别组别动物编号动物编号一一4791219 二二1581314 三三2 6101518 四四311161720 剂量选择及分组n剂量选择剂量选择 广泛查阅文献资料，估计毒性中值广泛查阅文献资料，估计毒性中值预试，求出待测化学物预试，求出待测化学物0 %100 %或或 10 %90 %的大致致死剂量范围的大致致死剂量范围设计正式试验的剂量和分组设计正式试验的剂量和分组 受试物的配制方法受试物的配制方法（1）受试化学物

9、的量取）受试化学物的量取：n固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。n称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定容，计算浓度mg/ml，备用。n吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。吸量法吸量法，计算公式为：X式中： X应吸取受试物的容积； A设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）； V容量瓶容积（ml）； d受试化学物比重；A Vd1000受试物的配制方法（2）受试化学物的稀释）受试化学物的稀释n等浓度稀释法：n等容量稀释法：n各个剂量组的溶液的配制可以有两种方法：染毒途径的选择染毒途径的选择n经消化道染毒：经口灌胃法经消化道染毒：

10、经口灌胃法 采用专用小鼠灌胃针。采用专用小鼠灌胃针。 左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作。直体位，腹部面向操作。 右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。 如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物行插入，以免

11、穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。立即死亡。 观察指标观察指标n中毒症状：确定靶器官中毒症状：确定靶器官 行动：不安定、多动、发声；行动：不安定、多动、发声； 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常；调、姿态异常； 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。n死亡和死亡时间死亡和死亡时间 n病理学检查及其他指标病理学检查及其他指标 LD50的计算的计算nLD50测定是以动物死活为指标的质反应，当测定是以动物死活为指标的质反应，当死亡

12、呈正态分配时，一般具有以下特点：死亡呈正态分配时，一般具有以下特点：n剂量对数值与动物死亡频数之间为正态分剂量对数值与动物死亡频数之间为正态分布曲线关系；布曲线关系；n剂量对数值与死亡率之间为正剂量对数值与死亡率之间为正“S”型曲线；型曲线；n从实验数据可计算从实验数据可计算LD50以外的其它信息。以外的其它信息。n计算计算LD50的常用方法的常用方法:n概率单位法概率单位法nBliss法法n改良寇氏（改良寇氏（Krber）法等）法等LD50的计算（的计算（改良寇氏法改良寇氏法） m=Xk- i (p-0.5)pqSmin式中：式中： mlgLD50; i相邻两剂量组之对数剂量差值相邻两剂量组之对数剂量差值 Xk最大剂量的对数值最大剂量的对数值 p死亡率死亡率 q存活率（存活率（1- p ） p各剂量组死亡率总和各剂量组死亡率总和 n每组动物数每组动物数急性毒性评价 外源化学物相对毒性分级标准外源化学物相对毒性分级标准 急性毒性分级（急性毒性分级（WHO）LD50的局限性的局限性n消耗动物量大消耗动物量大n获得的信息有限获得的信息有限n动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、血液学和其它化验检查所提供的毒性信息血液学和其它化验检查所提供的毒性信息n有许多因素影响有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得值的