特殊毒性作用及其试验与评价方法学习教案

1、会计学1特殊毒性作用及其试验特殊毒性作用及其试验(shyn)与评价方与评价方法法第一页，共40页。野生型His+突变型突变型 His-正向(zhn xin)突变回复突变物理化学等因素物理化学等因素(yn s)(yn s)处理处理受受 试试 物物His-His-培养基培养基接种能生长有致突变性有致突变性不能生长无致突变性无致突变性+第2页/共40页第二页，共40页。; TA102,检测碱基置换及移码。第3页/共40页第三页，共40页。第4页/共40页第四页，共40页。移码（frame shift）大段损伤（Large deletion or insertion ）第5页/共40页第五页，共40页

2、。,* 后果：三联密码子的改变，可能出现同义(tn y)密码，错义密码或终止密码，从而使基因表达改变。第6页/共40页第六页，共40页。第7页/共40页第七页，共40页。第8页/共40页第八页，共40页。质粒与染色体之间可能出现转移位置的小段DNA。这种位置的转动称为转座（transposition)* 后果：a.gene突变； b.产生新的gene c.染色体畸变；d.生物进化。第9页/共40页第九页，共40页。色体宽度的无着丝粒断片,常成双出现。* 环状染色体(ring chromosome)* 倒位(inversion): 断片倒转180再重接。第10页/共40页第十页，共40页。 ex

3、change, SCE):用5-Brdurd掺入DNA合成代替了T，产生染色单体差示染色，可见到两条姐妹染色单体染色一深一浅，如某一染色体在姐妹染色单体间发生了同源节段内换，同源节段染色一深一浅，这种现象称SCE。用以分析染色体畸变。(图示)第11页/共40页第十一页，共40页。各有一互补链不带Brdude的原链第二周期插入Brdu产生同等干扰带Brdu的新链合成(hchng)出现差示染色断裂(dun li)、重排同位节段互换第12页/共40页第十二页，共40页。染色体畸变染色体畸变裂隙裂隙(gap)(gap) 断裂断裂(break) (break) 断片断片(fragment)(fragme

4、nt)和缺失和缺失(deletion)(deletion) 微小体微小体(minute body)(minute body) 无着丝点环无着丝点环环状染色体环状染色体 双着丝点染色体双着丝点染色体 倒位倒位(inversion)(inversion) 易位易位(translocation)(translocation) 插入插入(insertion)(insertion)和重复和重复(duplication) (duplication) 辐射体辐射体 第13页/共40页第十三页，共40页。2n-1,2n-2,2n+1,2n+2,染色体数目畸变的原因： a.不分离； b.染色体丢失； c.染色体

5、桥； d.核内复制。第14页/共40页第十四页，共40页。第15页/共40页第十五页，共40页。,微小体微小体,环状环状,粉碎粉碎,多射体多射体* 剂量设计及分组剂量设计及分组:最高剂量组最高剂量组: LD50的的1/8-1/10;中间剂量组中间剂量组: 最高剂量组的最高剂量组的1/15;最低剂量组最低剂量组: 最高剂量组的最高剂量组的1/20。第16页/共40页第十六页，共40页。色体分离改变色体分离改变,表明受试物对表明受试物对遗传物质遗传物质产生了损伤。产生了损伤。（五）分子生物学方法（五）分子生物学方法（PCR检检测）测）第17页/共40页第十七页，共40页。 第18页/共40页第十八

6、页，共40页。第19页/共40页第十九页，共40页。或者以实际接触量为低剂量，以其10倍量为高剂量。（三）观察内容产前剖腹产，检查活胎，死胎，吸收胎，黄体数及外形和内脏畸形情况。第20页/共40页第二十页，共40页。第21页/共40页第二十一页，共40页。评价：致畸危险指数300, 说明致畸危险性小；致畸危险指数100300，为中等致畸危险性；致畸危险指数100, 为致畸危险性较大。第22页/共40页第二十二页，共40页。 2. 除了解受试物有无致癌作用的可能性外,还要确定其最小致癌作用剂量:第23页/共40页第二十三页，共40页。第24页/共40页第二十四页，共40页。 3. 病毒感染细胞:

7、常用RLV/RE Cell 和SA7/SHE Cell第25页/共40页第二十五页，共40页。.一般9个月可结束试验,本法多适用于PAH类物质 雌性SD大鼠乳腺癌诱发试验:一般试验期9个月。第26页/共40页第二十六页，共40页。第27页/共40页第二十七页，共40页。法，简写为 CPBS法，即：Carcinogenicity predication and battery selection method（致癌性预测与试验组合选择）。第28页/共40页第二十八页，共40页。 试验项目数：一般项目数越多，预测(yc)就越准，但费用会增大。一般使用奇数项目数，如3项或5项就比4项或6项要好。第2

8、9页/共40页第二十九页，共40页。第30页/共40页第三十页，共40页。 a+i： 某短期试验的敏感性。 a-i： 某短期试验的特异性，如缺乏此参数，取值可为0.5代之。第31页/共40页第三十一页，共40页。第32页/共40页第三十二页，共40页。或雌或雌16到到20只，雄只，雄8到到10只只第33页/共40页第三十三页，共40页。（断奶（断奶(dun ni)或出生周）或出生周） 给予给予(jy)(jy)受试物到周受试物到周 第一次交配第一次交配第二次交配第二次交配观察三个月，喂饲普通饲料，观观察三个月，喂饲普通饲料，观察其生长发育情况察其生长发育情况 断乳后给予受试物到周断乳后给予受试物

9、到周 观察三个月，喂饲普通饲料，观观察三个月，喂饲普通饲料，观察其生长发育情况察其生长发育情况 断乳后给予受试物到周断乳后给予受试物到周 第34页/共40页第三十四页，共40页。F F断奶，检查发育情况断奶，检查发育情况F F出生，每窝留只幼仔出生，每窝留只幼仔F F交配交配断奶，给予受试物断奶，给予受试物F F（每窝选留幼仔只，雌雄各半）（每窝选留幼仔只，雌雄各半）第第 周周雌雄交配雌雄交配出生第周给予受试物（出生第周给予受试物（F F）第35页/共40页第三十五页，共40页。v除上述除上述(shngsh)个指标外，个指标外，还应该注意出生幼仔是否有畸形还应该注意出生幼仔是否有畸形存在，对死亡的幼仔应进行畸形存在，对死亡的幼仔应进行畸形检查，可为下一步致畸试验提供检查，可为下一步致畸试验提供参考参考%100(%)交配雌性动物数妊娠雌性动物数受孕率第36页/共40页第三十六页，共40页。孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断