光度分析之一1教材

1、2022-6-19Analitical Chemistry1第八章第八章 吸吸 光光 光光 度度 法法8.1 8.1 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理8.2 8.2 光度分析的方法和仪器光度分析的方法和仪器8.3 8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度吸光光度法的灵敏度与准确度8.4 8.4 显色反应与分析条件的选择显色反应与分析条件的选择8.5 8.5 吸光光度法的应用吸光光度法的应用2022-6-19Analitical Chemistry2化学分析化学分析：常量组分：常量组分(1%), Er 0.1%0.2% 依据化学反应依据化学反应, 使用玻璃仪器使用玻璃仪器 化学分析与仪器分析方

2、法比较化学分析与仪器分析方法比较仪器分析仪器分析：微量组分：微量组分(105为高灵敏度为高灵敏度; 10104 4* *选择性好选择性好* *显色剂在测定波长处无明显吸收。显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好对照性好, , maxmax60 nm .60 nm .* *反应生成的有色化合物反应生成的有色化合物组成恒定，稳定组成恒定，稳定。* *显色条件易于控制，显色条件易于控制，重现性好重现性好。2022-6-19Analitical Chemistry428.4.2 显色条件的确定显色条件的确定c(R)1. 显色剂用量显色剂用量（c(M)、pH一定）一定）2022-6-19Analiti

3、cal Chemistry438.4.2 显色条件的确定显色条件的确定c(R)1. 显色剂用量显色剂用量（c(M)、pH一定）一定）Mo(SCN)32+ 浅红浅红Mo(SCN)5 橙红橙红Mo(SCN)6- 浅红浅红2022-6-19Analitical Chemistry448.4.2 显色条件的确定显色条件的确定c(R)1. 显色剂用量显色剂用量（c(M)、pH一定）一定）Fe(SCN)n3-n2022-6-19Analitical Chemistry452. 显色反应酸度显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定）一定）pHApH1pH pH2pH1pH2pH1pH2022-6-19Anal

4、itical Chemistry463. 显色温度及显色时间显色温度及显色时间另外，还有介质条件、有机溶剂、另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等表面活性剂等T1()T2()t(min)A2022-6-19Analitical Chemistry478.4.3 8.4.3 干扰及消除干扰及消除Co2, Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2 (蓝蓝)NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN测测Co2(含含Fe3+) : (掩蔽法掩蔽法)1.1.化学法化学法 2022-6-19Analitical Chemistry48Co2+, Zn2+,Ni2+,

5、 Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeRCoR, Zn2+ ,Ni2+ , Fe2+ 钴试剂钴试剂RH+测测Co2 :(生成络合物性质不同生成络合物性质不同)如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。则需采取分离法。2022-6-19Analitical Chemistry492. 物理法物理法 选择适当的测定波长选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 AA络合物络合物络合物络合物试剂试剂试剂试剂2022-6-19Analitical Chemistry50 1. 1. 仅络合物有吸收，仅络合物有吸收，

6、溶剂溶剂( (或蒸馏水）或蒸馏水）作参比。作参比。 如如 phenFephenFe2+2+ 标准曲线标准曲线2 2. .待测液有吸收待测液有吸收，被测液（不加显色剂）被测液（不加显色剂）作参比。作参比。 如如 测汽水中的测汽水中的 FeFe3. 3. 显色剂、或其他试剂也有吸收，显色剂、或其他试剂也有吸收，空白溶液（不含空白溶液（不含被测离子）被测离子）作参比作参比 例例: :邻二氮菲光度法测邻二氮菲光度法测Li2CO3中的中的 Fe， 参比溶液为不含参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂样品的所有试剂。4. 4. 干扰组分与显色剂有反应干扰组分与显色剂有反应, ,又无法掩蔽消除时：又无法掩

7、蔽消除时： 1 1）掩蔽被测组分掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比，再加入显色剂，作参比. .2 2）加入等量干扰组分加入等量干扰组分到空白溶液中到空白溶液中, ,作参比作参比. . - - 选择适当的参比溶液选择适当的参比溶液2022-6-19Analitical Chemistry518.5 吸光光度法的应用吸光光度法的应用1. 单一组分测定单一组分测定1) 金属离子金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟丁二酮肟, Co-钴试剂钴试剂2) 磷的测定磷的测定: DNA中含中含P9.2%, RNA中含中含P9.5%, 可得核酸量可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO

8、3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼黄磷钼黄( 小小)磷钼磷钼(V)蓝蓝( 大大)Sn2+2022-6-19Analitical Chemistry523) 蛋白质测定蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等溴甲酚绿、考马司亮蓝等4) 氨基酸测定氨基酸测定茚三酮茚三酮(紫色化合物紫色化合物)5) 水质检测水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6) 药物含量测定药物含量测定7) 紫外吸收紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。苯丙氨酸、蛋白

9、质等。2022-6-19Analitical Chemistry532. 多组分的测定多组分的测定 x 1, y 1, x 2, y 2由由x,y标液标液 在在 1, 2处分别测得处分别测得在 1处测组分处测组分x, 在 2处测组分处测组分yb) 在 1处测组分处测组分x; 在在 2处测总吸处测总吸收收,扣除扣除x吸收吸收,可求可求yc) x,y组分不能直接测定组分不能直接测定A1= x 1bcx+ y 1bcy(在 1处测得处测得A1) A2 = x 2bcx+ y 2bcy(在 2处测得处测得A2)2022-6-19Analitical Chemistry543. 3. 高浓度试液的测定高

10、浓度试液的测定-示差光度法示差光度法原理：原理： A1=Kbc1 A2=Kbc2 A1-A2=Kb(c1-c2) A=Kbc当试液的吸光度值超过当试液的吸光度值超过0.8时，可通过用一时，可通过用一准确被测物质的浓度为标准空白，是被测溶准确被测物质的浓度为标准空白，是被测溶液吸光度之处在液吸光度之处在0.20.8之间，以减少测定之间，以减少测定误差。误差。测得值为：测得值为：A=Kbc； c1=c2+ c2022-6-19Analitical Chemistry554. 4. 络合物组成的测定络合物组成的测定(1)(1)摩尔比法摩尔比法: : 固定固定cM , ,改变改变c cR R 1:13

11、:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 2022-6-19Analitical Chemistry56(2)(2)等摩尔连续变化法等摩尔连续变化法: :M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:2MRMRnn MR(ccc）常数常数2022-6-19Analitical Chemistry57表观形成常数的测定表观形成常数的测定 (设设M、R均无吸收均无吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0A00-=A AA c(M)=c(R)=c)2MR (1- 1-= = =MRcK MmRn型型 ?cc c 2022-6-19Analitical Chemistry585.5.一元

12、弱酸离解常数的测定一元弱酸离解常数的测定HL HLHLHLL=HL+LKccAKK +L+aaa(HL)H (HL)=+H +H KaH+L/HL高酸度下，几乎全部以高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得存在，可测得 AHLHLc(HL)；低酸度下，几乎全部以低酸度下，几乎全部以L存在，可测得存在，可测得 AL Lc(HL).代入整理：代入整理：L HLA AKAAa-p= pH+lg-或配制一系列配制一系列c相同相同,pH不同的溶液不同的溶液,测测A.2022-6-19Analitical Chemistry596. 双波长分光光度法消除干扰双波长分光光度法消除干扰在 2， A 2 = Ax2

13、+Ay2在在 1， A 1= Ax1+Ay1 A= A 2 - A 1 = Ax2+Ay2 (Ax1+Ay1) = Ax2 Ax1 = AxAy2 Ay1 Ax =( x2 x1)bcx消除了消除了y的干扰的干扰X被测被测Y干扰干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/nm2022-6-19Analitical Chemistry60双波长分光光度法消除浑浊背景干扰双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 1 2AA 1 -A 2 = A Ac例例 牛奶中微牛奶中微量量Fe的测定的测定A 2A 22022-6-19Analitical Chemistry617. 导数分光光度法导数分光光度法(不要求不要求

14、)A 图图混合物导数光谱混合物导数光谱01234A 图图2022-6-19Analitical Chemistry62常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定（含三种成分）常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定（含三种成分）1.氢氯噻嗪氢氯噻嗪.2.硫酸双肼肽硫酸双肼肽嗪嗪3. 盐酸可乐盐酸可乐定定4.常药降压片常药降压片 250 290 330 412312AA 2022-6-19Analitical Chemistry63肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用液用6的的HClO4稀释，然后稀释，然后用用GDX100

15、大孔树脂萃取，用大孔树脂萃取，用二氯甲烷二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，洗脱杀鼠剂，40挥干，剩余物用挥干，剩余物用0.1molL-1NaOH4mL溶解后，溶解后，紫外导数光谱测定。紫外导数光谱测定。A22ddA 0.0cdabDa.空白肝普通光谱空白肝普通光谱b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱敌鼠溶液的普通光谱c.空白肝二阶导数光谱空白肝二阶导数光谱d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱敌鼠溶液的二阶导数光谱2022-6-19Analitical Chemistry648.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 吸收曲线吸收曲线定定性分析的基础。性分析的基础。定量分析的基础定量分析的基础朗伯朗伯-比尔定律：比尔定律：A= bc=-lgT 式中各参式中各参数的物理意义，定量计算。数的物理意义，定量计算。8.2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。本部件。8.3 灵敏度的表示