地中海贫血基因检测试剂结果判读

1、地中海贫血基因检测试剂结果判读亚能生物技术（深圳）有限公司1.-地中海贫血基因检测试剂结果判读基因型临床表现型临床相关-3.7/（右缺失）-4.2/（左缺失）CS/QS/WS/静止型l病理生理改变非常轻微，临床一般无症状。红细胞形态正常，出生时脐带血中Hb Barts含量为0.010.02但3个月后即消失（少部分可见MCV79fl，MCH27pg，红细胞脆性试验阳性)。l遗传学：父母中至少一方为地中海贫血。l左缺失涉及整个2珠蛋白基因缺失，要比右缺失贫血程度要严重。l轻型地贫无需特殊治疗。/-SEA-3.7/-3.7-3.7/-4.2-4.2/-4.2标准型l尚能代偿性地合成相当数量的链，临床

2、上亦无症状或有轻度贫血症状，肝脾无肿大。红细胞形态有轻度改变，血液学检查可呈现平均红细胞体积和平均红细胞血红蛋白的降低 (如大小不等、中央浅染、异形等；红纽胞渗透脆性降低；变性珠蛋白小体阳性； HbA2和HbF含量正常或稍低。患儿脐血Hb Barts含量为0.0340.140，于生后6个月时完全消失。)l实验室检查：出生时HbBarts可占5%15%，几个月后消失，红细胞有轻度形态改变，可见靶形红细胞，血红蛋白稍降低或正常，MCV79fl，MCH27pg，红细胞脆性试验阳性。l遗传学：父母一方或双方为地中海贫血。l一般不需要治疗。-3.7/-SEA-4.2/-SEAT/-SEA（点突变：HbC

3、S，HbQS，HbWS等）HbH病l慢性溶血性贫血，此型临床表现差异较大，出现贫血的时间和贫血轻重不一（少数患者血红蛋白可低于60g/L或高于100g/L）。大多在婴儿期以后逐渐出现贫血，疲乏无力，肝脾大，轻度黄疽；年龄较大患者可出现类似重型地贫的特殊面容。合并呼吸道感染或服用氧化性药物，抗疟药物等可诱发急性溶血而加重贫血，甚至发生溶血危象。l实验室检查：红细胞渗透脆性减低；变性珠蛋白小体阳性；HbA2及HbF含量正常。红细胞形态基本同重型地中海贫血所见，红细胞内可见包涵体。骨髓中红细胞系统增生极度活跃。血红蛋白电泳出现HbH区带，HbH成分占5%30%(个别患者HbH成分可小于5%或高达40

4、%)，也可出现少量Hb Barts（出生时HbBarts可达15%以上）。随年龄增长，HbH逐渐取代Hb Barts，其含量约为0.0240.44。包涵体生成试验阳性。非缺失型血红蛋白H病可出现微量HbConstantSpring。l遗传学：父母双方均为地中海贫血。-/-HbBarts胎儿水肿综合症l胎儿常于3040周时流产，死胎或娩出后半小时内死亡，胎儿呈重度贫血，黄疽，水肿，肝脾肿大，腹水，胸水。体腔积液，胎盘巨大且质脆。孕妇可有妊娠高血压综合征。l实验室检查：脐血血红蛋白明显降低，红细胞中心浅染、形态不一、大小不均，有核红细胞显著增多，靶形红细胞增多。血红蛋白电泳：Hb Barts成分7

5、0%，少量Hb Portland，可出现微量HbH。无HbA、HbA2和HbF。2-地中海贫血基因检测试剂结果判读位点名称检测的突变类型Type of ThalassemiaCD41-42-TTCT0CD43GT0IVS-654CT+28AG+29AG+30TC0 or unclear32CA+CD71-72+A0EGAGAAG+位点名称检测的突变类型Type of ThalassemiaCD17AT0CD31-C0CD14-15+G0CD27-28+C0IVS-1GA 、GT0IVS-5GC+CAP+1AC+Initiation codonATGAGG0临床表现型基因型临床表现轻型-地贫0/

6、+/（0或+地贫的杂合子状态）l临床表现：临床无症状或轻度贫血，脾不大或轻度大。病程经过良好，本病易被忽略，多在重型患者家族调查时被发现。病理生理改变介于重型和轻型之间。l实验室检查：血红蛋白正常，MCV、MCH和红细胞脆性试验常降低，网织红细胞正常。HbA23.5%或正常，HbF正常或轻度增加（不超过5%）。l遗传学：父母至少一方为地中海贫血。中间型-地贫+/+（+地贫的双重杂合子和某些基因型纯合子，或两种不同基因型的双重杂合子）l多于幼童期出现症状，其临床表现介于轻型和重型之间，中度贫血，脾脏轻或中度大，黄疽可有可无，骨骼改变较轻，血红蛋白和红细胞数可维持在一定水平，一般不必输血，偶尔就医

7、。l临床表现：多在25岁时出现贫血，症状和体征较重型轻，可有“地中海贫血”面容。l实验室检查：外周血象和骨髓象的改变如重型红细胞渗透脆性减低HbF含量约为0.400.80，HbA2含量正常或增高。l遗传学：父母均为地中海贫血。重型-地贫0/0+/+/0l临床表现：患儿出生时无症状，至312个月开始发病，呈慢性进行性贫血，面色苍白，肝脾大，发育不良。常有轻度黄疽，症状随年龄增长而日益明显。由于髓代偿性增生导致骨骼变大，髓腔增宽，先发生于掌骨，以后为长骨和肋骨； 1岁后颅骨改变明显，表现为头颅变大，额部隆起，颧高，鼻梁塌陷，两眼距增宽，形成地中海贫血特殊面容。患儿常并发气管炎或肺炎。当并发含铁血黄

8、素沉着症时，因过多的铁沉着于心肌和其它脏器如肝，胰腺，脑垂体等而引起该脏器损害的相应症状，其中最严重的是心力衰竭，它是贫血和铁沉着造成心肌损害的结果，是导致患儿死亡的重要原因之一。本病如不治疗，多于5岁前死亡。l实验室检查：血红蛋白60g/L，呈小细胞低血色素性贫血，红细胞形态不一、大小不均，有靶形红细胞（10%以上）和红细胞碎片，网织红细胞增多，外周血出现较多有核红细胞。骨髓中红细胞系统极度增生。首诊HbF达30%90%l遗传学：父母均为地中海贫血l当地贫复合地贫时，患者不仅有地贫的缺陷同时又有地贫基因的缺失，这使得和珠蛋白琏的不平衡状态有所改善，表现临床症状可以较轻，实验室检查中凸显的是地

9、贫特征，因此临床上要重视这种复合地贫患者的检出，避免漏诊。另外患者为复合地贫时，他无论与任何一种轻型地贫者婚配均存在1/4生育重型地贫患儿的风险，因此，当夫妇一方为地贫另一方为地贫时，地贫的一方一定要检查地贫基因，以排除复合地贫的存在。l当夫妇一方分别为地贫，另一方为地贫基因携带时，他们生育复合型地贫患儿的风险为1/4，因此出生后子代的基因确诊对其今后的婚配指导是很有必要的。l地中海贫血患者多次输血后容易造成体内铁的过度沉积，并可损害心脏及肝肾功能，临床上对多次输血患者需进行去铁治疗以减轻铁负荷。然而地中海贫血患者并不是总伴体内铁负荷过重，地中海贫血患儿也可能发生铁缺乏，尤其是婴幼儿及轻型地中

10、海贫血患儿。因此对地中海贫血患儿进行常规铁指标的测定，对伴铁缺乏者给予适当补铁治疗，可以提高Hb浓度，减缓贫血症状。3地中海贫血治疗轻型地贫无需特殊治疗。中间型和重型地贫应采取下列一种或数种方法给予治疗。1.一般治疗：注意休息和营养，积极预防感染。适当补充叶酸和维生素E。2.输血和去铁治疗，此法在目前仍是重要治疗方法之一。3.使用铁鳌合剂。4.脾切除，脾切除对血红蛋白H病和中间型地贫的疗效较好，对重型地贫效果差。脾切除可致免疫功能减弱，应在56岁以后施行并严格掌握适应症。5.造血干细胞移植，是目前能根治重型地贫的方法。如有HLA相配的造血干细胞供者，应作为治疗重型地贫的首选方法。【预防】l开展

11、人群普查和遗传咨询，作好婚前指导以避免地贫基因携带者之间联姻，对预防本病有重要意义。l地贫产前诊断指征：1.曾生育过重型或中间型或地贫患儿的夫妇。2.夫妇双方均为地贫携带者；夫妇一方为地贫携带者，配偶为地贫复合地贫携带者。3.夫妇双方均为地贫携带者。2006广东省卫生厅地中海贫血产前诊断技术规范l采用基因分析法进行产前诊断，可在妊娠早期对重型和地贫胎儿作出诊断并及时中止妊娠，以避免胎儿水肿综合征的发生和重型地贫患者出生是目前预防本病行之有效的方法。附件1：地中海贫血产前诊断技术规范 地中海贫血(以下简称地贫)是一种由珠蛋白基因缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的溶血性贫血，是我省发病率最高的人类

12、单基因遗传病之一。为规范我省地贫产前诊断技术的应用，特制定本技术规范。 一、地贫产前筛查 （一）基本要求。 1、开展地贫产前筛查技术服务的医疗保健机构（以下简称产前筛查机构）应符合广东省开展产前筛查技术服务的基本条件； 2、地贫产前筛查机构应与具有产前诊断技术服务资质的医疗保健机构（以下简称产前诊断机构）建立工作联系，并纳入产前诊断质量控制体系。产前诊断机构应对产前筛查机构进行技术指导和质量管理。 （二）技术规范。 1、地贫产前初筛。 在地贫高发地区，凡未做过地贫筛查的孕妇应建议其进行地贫筛查。地贫的初步筛查应推广使用血液红细胞指数(MCV，MCH)等适宜技术。对红细胞指数下降的，应书面建议进

13、一步做地贫产前筛查，并按规定转诊。 不具备红细胞指数检查条件的医疗保健机构，应书面建议当事人到有条件的医疗保健机构进行该项目检查，或采用其他方法进行筛查。 2、地贫产前筛查。 对产前检查和血液红细胞指数初筛发现的地贫可疑孕妇，应采用血红蛋白（Hb）电泳技术或/和高效液相色谱(HPLC)技术作进一步筛查，对检测结果为HbA2降低或临界值的，则再作血清铁测定。 临床医生根据检测结果，进行地贫、异常Hb和缺铁性贫血的鉴别诊断，并提供地贫相关的产前咨询及必要的转诊服务。 3、产前筛查报告。 产前筛查报告包括实验室检测结果和遗传咨询指导意见两部分。实验室检测结果应包括产前筛查所选用的试验名称、参考范围、

14、测定结果。遗传咨询指导应包括是否存在-或-地贫的可能性及相应的进一步检查建议等。 实验室检测结果应由经培训的专业技术人员或实验室主管复核后，才能签发。产前筛查报告应当由副高以上职称的产前筛查技术培训合格的执业医师复核后，才能签发。产前筛查报告由2名以上经培训的执业医师签发。 4、产前筛查后高风险对象的处理原则。 （1）对产前筛查结果为高风险的孕妇，产前咨询医生应及时给予遗传咨询指导；是否实施产前诊断，应严格遵循知情选择原则。 （2）医疗保健机构不得擅自为产前筛查结果为高风险的孕妇作终止妊娠的处理。 （3）对产前筛查结果为高风险的孕妇应进行随访。 5、产前筛查质量控制体系。 （1）人员及实验室条

15、件：从事地贫产前筛查技术服务的人员和实验室应符合广东省开展产前筛查技术服务的基本条件； （2）试剂规格及使用：使用的筛查试剂应为国家或地方政府医用试剂主管部门准许的临床生化检验用正式产品(含国产和进口试剂产品)。购置试剂要记录如下信息：购买日期，批号，数量，有效期，验收人，保存条件，存放地点等; （3）质量控制:产前筛查机构应建立以室间质控检测为主要内容的综合质量考评制度。并接受与其建立工作联系的产前诊断机构的技术指导和质量控制。 二、地贫产前诊断 （一）基本要求。 1、开展地贫诊断技术服务的医疗保健机构应符合广东省开展产前诊断技术服务的基本条件; 2、分子诊断实验室应配有高、中、初级职称技术

16、人员各1名或以上，技术人员应接受过规范的技术培训并取得技术合格证。 （二）技术规范。 1、主要技术操作及其技术规范。 实施单位可根据自身条件采取以下相应技术： (1)DNA提取：人基因组DNA从胎儿的羊水细胞、血细胞或绒毛膜组织，或从胎儿双亲和先证者的外周血（一般每人采集2-4 ml）细胞中提取。所获得的DNA样品用于被测家庭的产前诊断，家系分析是产前诊断必须遵循的原则。每份DNA样品需严格记录，保证测试用量和备份保存。 (2)-地贫的诊断：缺失型-地贫（主要有-SEA、-3.7和-4.2三种类型）的分子诊断，推荐采用基于PCR的直接扩增缺失基因断裂点的方法；对于非缺失型-地贫（主要有Hb C

17、onstant Spring 2，CD 142 TAACAA， Hb Quong Sze2，CD 125 CTGCCG等六种类型）的分子诊断，推荐采用反向点杂交(RDB)技术。在进行胎儿水肿综合征高风险胎儿的产前诊断时，如有必要，可采用其它分子诊断技术进一步确诊。此外，还可采用以下二种非分子诊断的其他技术：（A）用胎儿脐带血Hb电泳分析检测Hb Barts和Hb H含量辅助诊断；（B）用胎儿超声诊断测定心胸比值等跟踪辅助诊断。 (3)-地贫的诊断：基因点突变引起-地贫的分子诊断，推荐采用RDB技术。该技术可以诊断在中国人群中目前已发现的绝大部分基因突变，其中包括下列基因频率排在前列的十种-地贫

18、突变：CDs 41-42 (-TCTT)，IVS-2-654 (CT)，TATA box -28 (AG)， CD17 (AT)，CDs71-72 (+A)，CD26(GA)，IVS-1-5 (GC)，TATA box -29 (AG)， CD43 (GT)和CDs27-28(+C)。对于有条件的实验室，也可采用其它具有严格质量控制体系的分子诊断技术进行-地贫的分子诊断。 (4)静止型地贫的分子产前筛查：静止型-地贫基因（-3.7和-4.2）也是本地区常见的-地贫类型，-3.7和-4.2这二种静止型地贫基因与东南亚型缺失SEA基因组合可导致严重影响个体生存质量的HbH病。HbH病高风险家庭的遗

19、传咨询和诊断是不可忽视。由于在成人血样中缺乏可靠的针对-3.7和-4.2这二种静止型地贫的表型检测指标，需采用基于PCR的DNA分子诊断技术进行产前筛查。 (5)其他类型血红蛋白病的诊断:目前已知的本地区其他类型血红蛋白病主要为中国型d-地贫和东南亚型HPFH，二者均为-珠蛋白基因大片段缺失所致，推荐采用基于PCR的直接扩增缺失基因断裂点的方法对其进行分子诊断。二种常见导致地贫的异常Hb（Hb Q和Hb E）基因的分子诊断方法与上述-或-地贫的常规方法相同，必要时，可采用DNA序列分析技术检测样品的基因突变。今后在有导致-或-地贫的新突变发现时，可根据技术研究进展增补适宜的诊断技术。 2、地贫

20、产前诊断指征和时机。 (1)地贫产前诊断指征： 曾生育过重型或中间型或地贫患儿的夫妇； 夫妇双方均为地贫携带者；夫妇一方为地贫携带者，配偶为地贫复合地贫携带者； 夫妇双方均为地贫携带者。 (2)产前诊断的时机: 产前诊断宜在孕24周以前进行。早孕绒毛采样检查宜在孕8周11周进行；羊水穿刺检查宜在孕16周21周进行；脐静脉穿刺检查宜在孕18周24周进行。 3、医学诊断报告。 产前诊断报告包括分子实验室检测结果和遗传咨询指导意见两部分。分子实验室检测结果应包括所采用的技术、检测的范围、-或-地贫或其他类型地贫(如中国型d-地贫和东南亚型HPFH)突变基因型。遗传咨询指导应包括对诊断结果的医学指导意

21、见，以及对结果不确定性的解释等。 实验室检测结果由实验室操作者填写并签名、经实验室主管复核后才能发出。产前诊断报告由2名以上经资格认定的执业医师签发。 4、地贫遗传咨询。 地贫产前诊断须在当事人接受遗传咨询和知情同意的情况下实施。对胎儿确诊为重型-或-地贫的，应由遗传咨询医师向当事人提供遗传咨询，在当事人知情同意和自主选择的情况下，可以终止妊娠。 5、地贫产前诊断随访。 对进行了产前诊断的孕妇应进行随访。在条件许可时，应尽可能采集到胎儿血样或组织，用于进一步验证产前诊断的结果。 6、质量控制体系。 (1)人员及实验室资质：分子诊断的技术人员必须取得相应的技术资质；地贫分子诊断实验室必须取得相应

22、的从业技术资质； (2)试剂规格及使用：使用的试剂须为国家或地方政府医用试剂主管部门准许的临床生化检验用正式产品(含国产和进口试剂产品)。购置试剂要记录如下信息：购买日期，批号，数量，有效期，验收人，保存条件，存放地点等； (3)质量控制体系及其制度：分子诊断的操作须在符合规定的分子诊断实验室实施，并严格执行PCR扩增试验的各项防污染规定，必要时，需采用基于微卫星分析的分子诊断技术进行个体鉴定，以确认产前诊断样品是否受到污染。力求操作程序标准化，制订合理的技术实施方案，每个样品需有二次独立的检测，只有在二次检测结果完全一致时方可给出诊断报告。严格执行技术人员操作检测和复核的签名制度。地贫诊断的

23、重要原始样品必须保存至少一年，以备复查。三、地贫产前筛查和产前诊断工作流程图血液学参数阳性者（MCV82fL和/或MCH27pg）常规产检的孕妇Hb电泳分析正常地贫或地贫复合地贫HbA2降低或临值HbA2降低地贫或HPFH等正常血清铁测定HbF升高怀疑-地贫及地贫基因配偶进行血红蛋白电泳分析夫妇双方均为同类型地贫（或）高风险胎儿产前基因诊断正常或轻型地贫胎儿遗传咨询建议继续妊娠遗传咨询可以终止妊娠重型地贫胎儿 【血红蛋白分子遗传学】正常人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(22)、HbA2(22)、HbF(22)。血红蛋白分子是由珠蛋白+血红素组成，珠蛋白由两对（4条）肽链构成，即：HbA由一对（

24、2）和一对（2）肽链构成HbA(22)；HbA2由一对（2）和一对（2）肽链构成HbA2(22)；HbF由一对（2）和一对（2）肽链构成HbF(22)。肽链基因位点：4种肽链（、）的合成受DNA上相应的、珠蛋白肽链基因操纵、控制与调节。珠蛋白肽链基因有4个，定位于16号染色体短臂最末端（16P13.3）。珠蛋白肽链基因有2个，定位于11号染色体短臂1区2带（11P12）。正常人Hb成分与含量：正常人Hb主要为HbA，约占Hb总量的95%；其次为HbA2,占23%；HbF是胎儿期Hb的主要成分，出生时占70%左右，2个月后降至50%，1岁时不超过5%，2岁时降至成人水平，3%。【地贫分子病理学】

25、根据珠蛋白肽链基因（简称基因或基因）缺失、缺陷或基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为型、型、型和型四种，其中以型和型地贫较为常见。地贫是组成血红蛋白（Hb）分子的或珠蛋白肽链量的异常；或珠蛋白肽链基因缺失或基因突变，结果使或珠蛋白肽链生成减少或缺乏，而形成珠蛋白生成障碍性贫血即地中海贫血。地贫是由于珠蛋白肽链合成不足的结果，地贫是由于珠蛋白肽链合成不足的结果。地贫：多数患儿由于基因缺失，使肽链合成减少，以致含有肽链的HbA、HbA2、HbF合成减少。但少数患儿并无基因缺失，而是由于基因发生突变或数个碱基缺失，影响了RNA加工、mRNA翻译或导致合成的珠蛋白肽链不稳定，最终引起肽链缺

26、乏。在肽链缺乏的情况下，多余的、肽链聚合而成4（HbH）和4（HbBarts）。其中HbH为最常见，HbH是一种不隐定Hb，易在红细胞内自行变性而沉淀形成包涵体与Heinz小体，导致红细胞寿命缩短而发生溶血。地贫：本病的分子病理相当复杂，已知有100多种的基因突变可导致本病。这些基因突变大致可划分为5类：基因片段缺失：导致基因转录异常或肽链合成异常。转录突变：单一碱基的点突变发生在基因转录调控区内，降低基因的转录，导致肽链合成不足。加工突变：即点突变发生在影响mRNA加工形成的区域，导致肽链合成缺如或不足。终止密码突变：点突变发生在翻译终止密码上，形成异常mRNA，导致肽链合成障碍。移码突变：

27、一个或数个（非3个或3的倍数）碱基的缺失或插入，使基因碱基排列发生框架移位，导致不稳定肽链生成而肽链缺乏。由于基因缺失、缺陷或基因突变，使肽链合成减少或缺乏，以致含有肽链的HbA合成减少，相对较多的肽链与或肽链结合，使HbF(22)与HbA2(22)合成增多。由于肽链的不足或缺失，未能与肽链配对的肽链是不稳定的，多于的肽链由于其性能不隐定，在成熟红细胞和幼红细胞内发生沉淀而形成包涵体，有包涵体的幼红细胞大部分过早地在骨髓内破坏（称为无效性红细胞生成与原位性溶血）；含有包涵体的成熟红细胞，其胞膜变僵硬，通过脾脏时，易被破坏，造成红细胞寿命缩短，因而发生贫血。骨髓红细胞系统呈代偿性增生，结果形成红

28、髓增多和骨皮质变薄等病理变化。由于珠蛋白的合成减少，铁质不能被利用，血红蛋白形成障碍，造成小细胞低色性贫血。因铁质的利用障碍，使骨髓储存铁和铁粒幼红细胞增多，加之由于大量红细胞破坏，使体内铁质增加，最终可导致含铁血黄沉着症。【地贫遗传与分型】地贫遗传：地贫为一种常染色体不完全显性遗传，不同地贫基因组合，其子代可发生不同类型地贫。基因共有4个，分别位于两条第16号染体上，若父母分别为2地贫（缺失一个基因，基因型为./-th.）和1地贫(缺失2个基因，基因型为./-th.-th或.-th/.-th),那么其子女就有可能为HbH病缺少3个基因(.-th/-th.-th)。如果胎儿父母均为1地贫（-th.-th/.），则胎儿有1/4的机会为1地贫纯合子（4个基因缺失，-th.-th/-th.-th），称为血红蛋白Barts胎儿水肿综合征。基因有2个，分别位于两条第11号染色体上，基因突变类型繁多，已发现有170多种（见地贫基因分析部分）。根据肽链合成受抑制的情况，一般分为0和地贫基因，其不同组合，形成各种类型的地贫（如0/0、0/、/、0/A、/A等）。地贫分型：地