第9章维生素类药物的分析1

1、第九章第九章维生素：维生素： 是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物质。微量营养物质。 人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPPCH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R :第一节第一节 维生素维生素 A A的分析的分析为一个具有共轭多烯侧链的为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯

2、环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UVUV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物维生素维生素A 325.5 100% 新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%max 相对生物效价相对生物效价CH2OHVitA2CH2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应聚合反应聚合反应 鲸醇鲸醇CH2OHCH2OHCH3（二）（二） 性质性质 1 溶解性溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物

3、油等易溶于有机溶剂和植物油等2 2 不稳定性不稳定性共轭多烯侧链易被氧化共轭多烯侧链易被氧化酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO2v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化环氧化物环氧化物OCH2OHVitAVitA醛醛HOCVitAVitA酸酸COOH4 4 与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应紫紫红红蓝蓝色色3SbClVitACHCl33 3 紫外吸收特性紫外吸收特性 325-328325-328的范围有最大吸收的范围有最大吸收（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应（Carr-price 反应）反应）条件：无水，无醇。条件：无水，

4、无醇。紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHCl3鉴别鉴别二、二、-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色逐渐变紫红逐渐变紫红+CH2-RCOOSbCl5方法方法 取维生素取维生素A A油溶液油溶液1d1d， 加氯仿加氯仿10 ml10 ml，振摇溶解，振摇溶解，取出两滴，加氯仿取出两滴，加氯仿2 ml2 ml，与，与25%25%三氯化梯氯仿液三氯化梯氯仿液0.5 ml0.5 ml反应，成兰色，渐成紫红。反应，成兰色，渐成紫红。（BPBP（20002000）VitAVitAHCl去水去水无水乙醇无水乙醇max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二）max为为350390nm三个

5、吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitA讨论讨论 维生素维生素 A A有五个共扼有五个共扼双键，无水乙醇溶液在双键，无水乙醇溶液在 326 326 nmnm处有最大吸收，盐酸催化处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成加热脱水，成5 5个双键，故，个双键，故，波长红移，同时在波长红移，同时在350-390350-390之之间出现间出现3 3个吸收峰。个吸收峰。USP USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和RfRf值值BP BP 杂质对照品法杂质对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLCTLC法法（三）（三）立体

6、异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（ VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（ VitAVitA3 3）UVUV法法（一）（一）三三 含量测定含量测定三、点校正法（三、点校正法（P208P208）1. 1. 条件：条件：（1 1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm310340nm波波长范围内呈一条直线，且随波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；长的增大吸收度减小；（2 2）物质对光的吸收具有加和性。）物质对光的吸收具有加和性。2. 波长的选择：波长的选择：（1） 1 VitA的的 max（328nm）

7、（2） 2 3 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点对吸收有影响的杂质见书对吸收有影响的杂质见书209液液测定对象：测定对象：VitAVitA醋酸酯醋酸酯328340316328 第一法第一法 等波长差法等波长差法 3403163283282523AAA.A 校校正正第二法第二法 等吸收度法等吸收度法( (皂化法皂化法) )测定对象：测定对象： VitAVitA醇醇32176AAA 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正3.3.测定法测定法（1 1）基本步骤）基本步骤: :v第一步第一步 A A选择选择选择依据：选择依据：所选所选A A值中杂质的干

8、扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除注意：注意： C 为混合样品的浓度为混合样品的浓度 第二步第二步 求求)(%cm1样样 l(%)CA%)(cm1 样样)()(%cm1%cm1纯纯样样 第三步第三步 求效价求效价换算因数换算因数）效价（效价（样样样样 %)(cm1)(Eg/IU换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：%)(cm1Eg/IU纯纯）效价（效价（换算因数换算因数醋酸酯醋酸酯维生素维生素Ag344. 0IU1 2907000g344. 0g101g/IU6 ）效价（效价g/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1900 醇醇维生素维生素

9、Ag300. 0IU1 3330000g300. 0g101g/IU6 ）效价（效价g/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1830 第四步：求标示量第四步：求标示量标示量标示量平均丸重平均丸重100g/IU 标示量标示量丸丸标示量标示量100/IU 标示量标示量平均丸重平均丸重换算因数换算因数100CA （二）（二）( (二二) ) 三氯化锑比色法三氯化锑比色法 标准曲线法标准曲线法蓝蓝色色 3SbClVitA优点优点 简便简便 快速快速max max 618nm618nm620nm620nm SbOClSbClOH32缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定

10、（5 10s5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差11专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性注意事项注意事项1 1 颜色不稳，动作要快。颜色不稳，动作要快。2 2 用无水氯仿作溶剂测定用无水氯仿作溶剂测定, ,要求无水。要求无水。3 3 温度恒定。温度恒定。4 4 非专属性，结果偏高。非专属性，结果偏高。5 5 有腐蚀性。有腐蚀性。3 3 HPLC HPLCNSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+第二节第二节 维生素维生素B B1 1HClCl-（二）（二） 性质性质1 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2 2 硫色素反

11、应：硫色素反应：噻唑环在碱性介质噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。的硫色素。 蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH3 3 盐酸液的盐酸液的246nm246nm波长处测定吸收度，波长处测定吸收度，吸收系数为吸收系数为421421。 UV UV 共轭双键共轭双键 max = 246nmmax = 246nm4 4 碱性碱性 嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨 噻唑环噻唑环 季铵季铵1 1、可与酸成盐、可与酸成盐2 2、与生物碱沉淀剂沉淀。、与生物碱沉淀剂沉淀。3 3、含量测定、含量测定 非水碱量

12、法非水碱量法荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH二、鉴别试验二、鉴别试验（一）（一） 硫色素反应，硫色素反应，ChPChPCH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH 环合环合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22H方法方法 取本品约取本品约5 mg5 mg，加氢氧化，加氢氧化钠与正丁醇钠与正丁醇2.5ml2.5ml，强烈振摇。放，强烈振摇。放置分层，上

13、面醇层显强烈兰色荧置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。光。加酸消失，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。VitB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黄黄H+ 2KIIIHIB2 红色红色H+白色白色硅钨酸硅钨酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+（二）沉淀反应（二）沉淀反应 PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHAgNOAgCl白白3HNO HNO蓝蓝淀淀粉粉试试纸纸 KIMnOCl H S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）其他反应（三）其他反应3 3 含量测定含量测定（一）（一） 非水滴定法非水滴定法 1 1 原理原

14、理 两个碱性的，已成盐两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在非的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，水溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消均可与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。耗高氯酸的量进行计算。 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝 （紫红（紫红天蓝）天蓝）2 2 方法方法 取本品取本品0.15g0.15g，精密，精密称定，置称定，置100ml100ml具塞锥形瓶中加具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚甲蓝甲蓝2d2d，高氯酸滴定。由紫红，高氯酸滴定。由紫红天蓝，天蓝，1ml1ml相当于相当

15、于16.8616.86mgmg。mlmgnMcT/86.16227.3371 . 0%100%WFTVV空样含量 二二 紫外光谱法紫外光谱法 维生素维生素B1B1片的测定，取片的测定，取2020片称定。严细。称取细粉适片称定。严细。称取细粉适量，相当于量，相当于25 mg25 mg，置，置100ml100ml量量瓶中，取瓶中，取5ml5ml，在定溶于，在定溶于100ml100ml，246nm246nm测。标准吸光系数测。标准吸光系数421421。注意所使用的溶剂。注意所使用的溶剂。= 421%cmE11（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=%=%WEA%cm100110011 标示量

16、标示量平均片重平均片重稀释度稀释度A = ECL规格规格g/g/片片g/100ml稀稀释释度度稀稀释释倍倍数数1 gChPChP片剂片剂维生素维生素B1注射液的测定注射液的测定取本品相当于取本品相当于B1 50mg，置，置200ml量瓶中，加水置刻度，取量瓶中，加水置刻度，取5ml，用盐酸定溶于用盐酸定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数测。标准吸光系数421。注射剂（每注射剂（每mlml）相当于标示量的）相当于标示量的%=%=%VEA%cm1001110011 标示量标示量稀释度稀释度规格规格g/mlml荧荧光光硫硫色色素素异异丁丁醇醇铁铁氰氰化化钾钾 VitBNaOH（三）（三） 硫

17、色素荧光法硫色素荧光法1、激发波长激发波长365365nmnm发射波长发射波长435435nmnm2、+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾铁氰化钾 + 异丁醇异丁醇+ NaOH + 异丁醇异丁醇S SdAb%WWdSbA%VitB1001 稀稀释释度度稀稀释释度度样样对对对照液对照液供试液供试液3、（1 1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2 2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析第三节第三节 维生素维生素C C654321OOHHOO C OHHCH2OHL L抗坏血酸抗坏血酸（

18、一）结构（一）结构 为为L-L-抗坏血酸，在化学结抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有构上和醣类似。有4 4种光学异构种光学异构体，体，L L右旋活性最强。具有二稀右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（两个手性碳（C4C4，C5C5），性质），性质活泼。活泼。（二）性质（二）性质1 1 溶解性溶解性易溶于水易溶于水水溶液呈酸性水溶液呈酸性OOHHOO C OHHCH2OH1234562 2 酸性酸性C C3 3OHOH的酸性较的酸性较强。强。pKapKa = = 4.174.17，C C2 2OHOH的的酸性较弱酸性较弱pKapKa = = 11.

19、5711.57。故表现。故表现为一元酸的性为一元酸的性质。能与碳酸质。能与碳酸氢钠成钠盐。氢钠成钠盐。O二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构3 强还原性强还原性二烯醇结构的还原性极强。二烯醇结构的还原性极强。OHOHCCOOCCCH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOOOOHHOO C OHHCH2OH1234564 4 光学活性光学活性L(+)L(+)抗坏血抗坏血酸酸活性最强手性活性最强手性C C（C C4 4、C C5 5）*单钠盐单钠盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解

20、 NaOH5 5 水解反应与碱反应水解反应与碱反应OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH显显色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚类类脱脱水水 H蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 HVitC506 6 具糖的性质具糖的性质 结构与糖类相似结构与糖类相似 有糖类的显色反应有糖类的显色反应nmnmmaxOHmaxH 7 7 紫外特征紫外特征（银镜）（银镜）黑黑 AgAgNOVitC二、鉴别反应二、鉴别反应（一）与（一）与AgNOAgNO3 3反应反应 (ChP2000)具有强还原性具有强还原性：取本品取本

21、品0.2 g, 加水加水10 ml溶解，溶解，取取5 ml，加硝酸银，加硝酸银0.5ml，成，成-（二）、与（二）、与2 2，6 - 6 - 二氯靛酚反应二氯靛酚反应无无色色二二氯氯靛靛酚酚， VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色 H还原型还原型蓝色蓝色 OHOHOH(ChP2000)NClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）取本品取本品0.2 g, 加水加水10 ml溶解，溶解，取取5 ml，加，加2 2，6 - 6 - 二氯靛二氯靛酚酚2d，成，成-去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸OVitC（三）与其他氧化剂的反应（三）与其他氧化剂的反应OHOO C OHHCH2

22、OHHOCH2OHOOOO C OHH O红红碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜 OCuVitC与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应USPUSP与与KMnOKMnO4 4反应反应 MnKMnOVitC（四）糖类的反应（四）糖类的反应 USPUSP蓝蓝色色糠糠醛醛戊戊糖糖脱脱水水三三氯氯醋醋酸酸 VitC或盐酸或盐酸50吡咯吡咯OO C OHHCH2OHHOOHCH2OHOO C OHHHHOOCCOHO OCHOH3CH2OHH2O-CO2-H2OOCHN（蓝色）（蓝色）OCHO(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH戊糖戊糖NNH50(吡咯吡咯)（四）（四） UVUV0.01mol/L HCl0.01m

23、ol/L HClnmmax243 58554511E%cm 3 3 杂质检查杂质检查（一）（一） 溶液的澄清度与颜色检查溶液的澄清度与颜色检查注射液注射液 取本品适量，加水成取本品适量，加水成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，420nm 420nm 测，测，吸收度不得超过吸收度不得超过0.060.06。片剂片剂 取片粉适量（相当于取片粉适量（相当于1.0g1.0g），加水），加水20ml20ml溶解，滤过。溶解，滤过。成成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，440nm 440nm 测，测，吸收度不得超过吸收度不得超过0.070.07。在加工过程中有色杂质略有不同，在加工过程中

24、有色杂质略有不同，故波长不同。故波长不同。（二）（二） 铁，铜离子的检查铁，铜离子的检查 IIVitCH去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸2指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液四、含量测定四、含量测定（一）碘量法（一）碘量法1 原理原理OO C OHHOOCH2OHHI2+OHOO C OHHCH2OHHOH+ I 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在3030秒内不褪。每秒内不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于8.8068.806mgmg的的C C6 6H H8 8O O6 62 2、方法、方法）（ml/mg.nMCT806