选修三动物细胞工程唐海PPT课件

1、问：为什么问：为什么“番茄番茄马铃薯马铃薯”超级超级杂种植株没有如科学家所想像的那样，杂种植株没有如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？地上长番茄、地下结马铃薯？生物基因的表达不是孤立的，它们生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的之间是相互调控、相互影响的，马铃，马铃薯薯番茄杂交植株的细胞中虽然具备两番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃杂

2、交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的了。薯就是很自然的了。第1页/共156页动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术第2页/共156页动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。第3页/共156页动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础

3、。如克隆动物如克隆动物第4页/共156页动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。如克隆动物如克隆动物如制备单克隆抗体如制备单克隆抗体第5页/共156页动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术1.1.动物细胞培养动物细胞培养第6页/共156页动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术1.1.动物细胞培养动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织，将从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中

4、，让这些细胞生长和增殖。的培养基中，让这些细胞生长和增殖。1.11.1概念概念第7页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程第8页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官第9页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官比老龄动物的组织细胞比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。强，越容易培养。第10页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物

5、细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶第11页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶动物组织细胞间隙中含有一动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。韧性的组织和器官。第12页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶动物细胞培养适宜的动物细胞培养适宜的PH

6、PH为为7.27.27.47.4，此环境下胃蛋白酶，此环境下胃蛋白酶（1.51.5）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。第13页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶第14页/共156页细胞贴壁过程细胞贴壁过程第15页/共156页第16页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑

7、制接触抑制第17页/共156页3.3.有关概念有关概念: :原代培养：原代培养：从机体取出后立即培养的细胞从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。为原代细胞。第18页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制原代细胞原代细胞第19页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制传代培养传代培养洗涤

8、、稀释、洗涤、稀释、分离分离原代细胞原代细胞第20页/共156页原代培养：原代培养：从机体取出后立即培养的细胞从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。为原代细胞。传代培养：传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。3.3.有关概念有关概念: :第21页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑

9、制接触抑制传代培养传代培养洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离原代细胞原代细胞传代细胞传代细胞第22页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制传代培养传代培养洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离原代细胞原代细胞传代细胞传代细胞1010代以内，保持正常二倍体核型代以内，保持正常二倍体核型第23页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原

10、代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制传代培养传代培养洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离细胞增殖缓慢，细胞增殖缓慢，核型可能变化核型可能变化原代细胞原代细胞传代细胞传代细胞第24页/共156页1.2 1.2 动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制传代培养传代培养洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体原代细胞原代细胞传代细胞传代细胞第25页/共156页第26页/共156页原代培养和传代培养原代培养和传代培养( (

11、细胞株和细胞系细胞株和细胞系) )细胞悬细胞悬浮液浮液10代代细胞细胞50代代细胞细胞无限无限传代传代原代原代培养培养传代培养传代培养多数组织细胞固定在表面生长和分裂多数组织细胞固定在表面生长和分裂随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖细胞株细胞株细胞系细胞系第27页/共156页讨讨 论论多细胞动物和人体的细胞都生活在多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：思考以下问题： 1.1.体外培养细胞时需要提供哪些物体外培养细胞时需要提供哪些物质？质？ 2.2.体外培养的细胞需要什么样的环体外培养的细

12、胞需要什么样的环境条件？境条件？第28页/共156页多细胞动物和人体的细胞都生活在多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：思考以下问题： 1.1.体外培养细胞时需要提供哪些物体外培养细胞时需要提供哪些物质？质？ 2.2.体外培养的细胞需要什么样的环体外培养的细胞需要什么样的环境条件？境条件？葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。因子、微量元素等。讨讨 论论第29页/共156页多细胞动物和人体的细胞都生活在多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，内环境中，

13、根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：思考以下问题： 1.1.体外培养细胞时需要提供哪些物体外培养细胞时需要提供哪些物质？质？ 2.2.体外培养的细胞需要什么样的环体外培养的细胞需要什么样的环境条件？境条件？葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。因子、微量元素等。适宜温度、适宜温度、PH和气体环境；无菌和气体环境；无菌无毒环境无毒环境讨讨 论论第30页/共156页1.3 动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件第31页/共156页1.3 动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1.无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境2.必须的营养物质必须的营养物质 （葡萄糖、氨基

14、酸、无机盐、维生素、（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、激素、促生长因子、动物血清等。）激素、促生长因子、动物血清等。）3. 适宜的温度适宜的温度: 36.50.5度度4. 充足的氧气和适宜的酸碱度充足的氧气和适宜的酸碱度: O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）第32页/共156页思考：为什么对动物细胞进行培养时通常思考：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？要添加血清？第33页/共156页思考：为什么对动物细胞进行培养时通常思考：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。有些氨基酸（必需氨

15、基酸）动物细激素等。有些氨基酸（必需氨基酸）动物细胞本身不能合成必须由培养液提供。胞本身不能合成必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子。血清中还含有多种未知的活性物生长因子。血清中还含有多种未知的活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般须添加利生长和增殖，一般须添加10%10%20%20%的血清。的血清。第34页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组

16、织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基特有成培养基特有成分分培养结果培养结果培养目的培养目的第35页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质培养基特有成培养基特有成分分培养结果培养结果培养目的培养目的第36页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质

17、培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成培养基特有成分分培养结果培养结果培养目的培养目的第37页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成培养基特有成分分蔗糖蔗糖植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖动物血清动物血清培养结果培养结果培养目的培养目的第38页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培

18、养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成培养基特有成分分蔗糖蔗糖植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞群体细胞群体培养目的培养目的第39页/共156页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成培养基特有成分分蔗糖蔗糖植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖动物血

19、清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞群体细胞群体培养目的培养目的快速繁殖、培快速繁殖、培育无病毒植株育无病毒植株等等获得细胞或细获得细胞或细胞分泌蛋白等胞分泌蛋白等第40页/共156页问题问题3 3：为什么用胰蛋白酶处理？：为什么用胰蛋白酶处理？问题问题1 1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。问题问题2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液

20、的接触面积，利与细胞吸收营养。扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题问题4 4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适动物细胞培养的最适PH值为值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适，胰蛋白酶作用的适宜宜PH为为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜，胃蛋白酶适宜PH为为

21、2.胃蛋白酶在胃蛋白酶在PH为为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。的动物细胞培养中无活性。问题问题5 5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。第41页/共156页问题问题6 6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？组培培养基有何独特之处？问题问题7 7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？终培养成新个体？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、

22、无机盐）、维主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：生素和动物血清等。独特之处有：1 1、液体培养基、液体培养基 2 2、成分中有动物血清等成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体育成新的动物个体问题问题8 8、动物细胞培养的原理：、动物细胞培养的原理： 细胞增殖。细胞增殖。问题问题9 9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在1010代代以内，为什么？以内，为什么？1010代以内的细胞代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。遗传物

23、质不改变，保持正常二倍体核型。第42页/共156页1.4 动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程 主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞3.3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.4.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 第43页/共156页2.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物2.1 2.1 动物细胞核移植概念：动物细胞核移植概念：

24、第44页/共156页2.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为胎最终发育为动物个体（克隆动物）动物个体（克隆动物）。2.1 2.1 动物细胞核移植概念：动物细胞核移植概念：第45页/共156页分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：第46页/共156页分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能细

25、胞分化程度低，恢复全能性容易性容易第47页/共156页分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能细胞分化程度低，恢复全能性容易性容易细胞分化程度高，恢复全细胞分化程度高，恢复全能性不容易能性不容易第48页/共156页2.22.2体细胞核移植的过程：体细胞核移植的过程：请看教材请看教材P48P48图图2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受体细胞是什么？处在什核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？么时期？2.2.通过什么手段激活受体细胞，构建通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？重组胚胎？ 第49页/共156页2.22.2体细胞核移植的过

26、程：体细胞核移植的过程：请看教材请看教材P48P48图图2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受体细胞是什么？处在什核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？么时期？2.2.通过什么手段激活受体细胞，构建通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？重组胚胎？ M中期卵母细胞中期卵母细胞第50页/共156页2.22.2体细胞核移植的过程：体细胞核移植的过程：请看教材请看教材P48P48图图2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受体细胞是什么？处在什核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？么时期？2.2.通过什么手段激活受体细胞，构建通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？重组胚胎？ M中期卵母

27、细胞中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。细胞，完成细胞分裂和发育进程。第51页/共156页1.1.用于核移植的供体细胞一般都选用于核移植的供体细胞一般都选用传代用传代1010代以内的细胞，想一想，这是代以内的细胞，想一想，这是为什么？为什么？第52页/共156页培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至1050代左右时，部分细胞核型可能会发生变代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体代以内的细胞一般能保持正常的二

28、倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代代10代以内的细胞。代以内的细胞。1.1.用于核移植的供体细胞一般都选用于核移植的供体细胞一般都选用传代用传代1010代以内的细胞，想一想，这是代以内的细胞，想一想，这是为什么？为什么？第53页/共156页多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程卵细胞卵细胞A母绵羊母绵羊B母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠融合后的卵细胞融合

29、后的卵细胞第54页/共156页2.2.你认为用上述体细胞核移植方法你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了进行了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？第55页/共156页2.2.你认为用上述体细胞核移植方法你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了进行了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？绝大部分绝大部分DNA来自于供体细胞核，来自于供体细胞核，但其核外还有少量的但其核外还有少量的DNA，即线粒体中，即线粒体中的的DNA是来自于受体卵母细胞。是

30、来自于受体卵母细胞。第56页/共156页此外，即便动物的遗传基础完全相同，此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物是核供体动物100%的复制。的复制。第57页/共156页2.32.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前

31、景：第58页/共156页2.32.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1.1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程进程第59页/共156页2.32.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1.1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程进程2.2.保护濒危物种保护濒危物种第60页/共156页第61页/共156页2.32.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1.1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程进程2.2.保护濒危物种保护濒危物种3.3.

32、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植器官的移植第62页/共156页2.32.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1.1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程进程2.2.保护濒危物种保护濒危物种3.3.医药卫生领域生产医用蛋白质及组织医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植器官的移植4.4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病疾病的发展过程和治疗疾病第63页/共156页2.42.4体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：第64页/共15

33、6页思考与探究思考与探究2.2.动物细胞培养要经过脱分化的过程动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？吗？为什么？第65页/共156页思考与探究思考与探究2.2.动物细胞培养要经过脱分化的过程动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？吗？为什么？动物细胞培养不需经过脱分化过程。动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞

34、定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。使其分化成所需要的组织或器官。第66页/共156页3.19973.1997年，美国威斯康星州的一个年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（奶牛场有一头名叫卢辛达（LucindaLucinda）的）的奶牛，年产奶量为奶牛，年产奶量为30.8 t30.8 t，创造了世界，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为

35、仅为3 34t4t。第67页/共156页（1 1）能利用体细胞核移植技术克隆高产）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。奶牛卢辛达吗？请说明理由。第68页/共156页（1 1）能利用体细胞核移植技术克隆高产）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。奶牛卢辛达吗？请说明理由。可以。卢辛达有高产奶的遗传基础，可以。卢辛达有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛也具有高产也具有高产奶奶的遗传基因。的遗传基因。第69页/共156页（2 2）如果将克隆高产

36、奶牛卢辛达的任）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？务交给你，你将如何对它进行克隆？从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。取牛卵巢，抽取卵母细胞体织）的细胞。取牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微操作去除卵母细胞的外培养成熟。用显微操作去除卵母细胞的核，再将耳细胞核，再将耳细胞核核注入卵母细胞，用电刺注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，激方法使卵母细胞与体细胞融合，第70页

37、/共156页再用电刺激或化学物质激活注入了体细再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。发情处理的受体母牛体内。第71页/共156页4.自然界中有一种含有叶绿体的原生自然界中有一种含有叶绿体的原生动物动物眼虫，说明植物的细胞器同样可眼虫，说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活，请探讨：动物以在某些动物细胞中存活，请探讨：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？如细胞与植物细

38、胞之间可以实现杂交吗？如果理论上可行，请设计出具体实验方案。果理论上可行，请设计出具体实验方案。第72页/共156页第73页/共156页思考题思考题1 1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？受体卵母细胞的核？卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。为早期胚胎的形成提供营养。2 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？、为什么选卵母细胞作核移植

39、的受体细胞？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。用价值的动物提供的体细胞。第74页/共156页3.3.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代以内的细胞，为什么？代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变核型，未突变.思考题思考题二倍体的核型：二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和特征的总和第75页/共156页思考题思考题4.4

40、.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了体动物进行了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细来自供体细胞核，但核外还有少部分胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞.第76页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合第77页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合细胞细胞A A第78页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合细胞细胞A A细胞细胞B B第79页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合细胞细胞A A细

41、胞细胞B B杂种杂种细胞细胞第80页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合细胞细胞A A细胞细胞B B杂种杂种细胞细胞物理法物理法化学法化学法第81页/共156页一一、动物细胞融合、动物细胞融合细胞细胞A A细胞细胞B B杂种杂种细胞细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法第82页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导方式诱导方式一、动物细胞融合一、动物细胞融合第83页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。4.4.

42、诱导方式诱导方式一、动物细胞融合一、动物细胞融合第84页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞4.4.诱导方式诱导方式一、动物细胞融合一、动物细胞融合第85页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性4.4.诱导方式诱导方式一、动物细胞融合一、动物细胞融合第8

43、6页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导方式诱导方式指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激一、动物细胞融合一、动物细胞融合第87页/共156页1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导方式诱导方式指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理法：离心

44、、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)一、动物细胞融合一、动物细胞融合第88页/共156页一、动物细胞融合一、动物细胞融合1.1.概念：概念：2.2.结果：结果：3.3.原理：原理：4.4.诱导方式诱导方式指两个或多个动物细胞结合形指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。成一个细胞的过程。形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒第89页/共156页5.5.过程：过程：第90页/共156页5.5.过程

45、：过程：动物动物细胞细胞A A动物动物细胞细胞B B第91页/共156页5.5.过程：过程：动物动物细胞细胞A A动物动物细胞细胞B B诱导，融合诱导，融合第92页/共156页5.5.过程：过程：动物动物细胞细胞A A动物动物细胞细胞B B诱导，融合诱导，融合1 1个完整的个完整的杂交细胞杂交细胞ABAB第93页/共156页5.5.过程：过程：动物动物细胞细胞A A动物动物细胞细胞B B诱导，融合诱导，融合1 1个完整的个完整的杂交细胞杂交细胞ABAB注意：动物细胞的融合也需要把多个注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛

46、选杂交细胞再从中筛选杂交细胞第94页/共156页6.6.意义：意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为可能。第95页/共156页6.6.意义：意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为可能。7. 7. 应用：应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段瘤和生物新品种培育等的重要手段特别是利用杂交瘤技术制造单克隆特别是

47、利用杂交瘤技术制造单克隆抗体抗体第96页/共156页比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合的原理细胞融合的原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途意义意义细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去处细胞壁后诱去处细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体解决远源杂交不亲和的问题解决远源

48、杂交不亲和的问题第97页/共156页1.1.什么是抗体？什么是抗体？2.2.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？第98页/共156页1.1.什么是抗体？什么是抗体？2.2.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？抗体是具有免疫作用的蛋白质。抗体是具有免疫作用的蛋白质。第99页/共156页1.1.什么是抗体？什么是抗体？2.2.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？抗体是具有免疫作用的蛋白质。抗体是具有免疫作用的蛋白质。B B淋巴细胞受抗原刺激后，可淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。以产生抗体。第100页/共156页B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：第

49、101页/共156页B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：1. B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。2. 每一个每一个B淋巴细胞只分泌一种特淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。异性抗体。第102页/共156页B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：1. B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。2. 每一个每一个B淋巴细胞只分泌一种特淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。异性抗体。传统的抗体生产方法及缺陷是传统的抗体生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？什么？怎样解决这个问题？第103页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的

50、缺陷第104页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原抗原第105页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯抗原抗原第106页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；抗原抗原第107页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞特异性差、纯度低；特异性差、

51、纯度低；抗原抗原第108页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体抗原抗原第109页/共156页常规抗体的缺陷常规抗体的缺陷动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞特异性差、纯度低；特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体抗原抗原第110页/共156页一、单克隆抗体的概念一、单克隆抗体的概念由

52、单个由单个B淋巴细胞经过无性繁殖淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的这一细胞群所产生的化学性质单一、特化学性质单一、特异性强异性强的抗体称为单克隆抗体。的抗体称为单克隆抗体。 第111页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？第112页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？第113页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可

53、行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无：我们所学的哪种细胞是可以无 限增殖的？限增殖的？第114页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无：我们所学的哪种细胞是可以无 限增殖的？限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生抗体细胞产生抗体 的能力和肿瘤细胞无限增殖能的能力和肿瘤细胞无限增殖能 力同时具备呢？力同时具备呢？第115页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？设计方案：设计方案：第116页/

54、共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体第117页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖第118页/共156页2. 怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖杂交细胞杂交细胞第

55、119页/共156页 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第120页/共156页注射抗原注射抗原 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第121页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第122页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第123页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第124页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、

56、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第125页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第126页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选, ,继续培养继续培养 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第127页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养

57、筛选筛选, ,继续培养继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第128页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选, ,继续培养继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程体体外外培培养养注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔第129页/共156页注射抗原注射抗原B B淋巴淋巴细胞细胞骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞

58、培养筛选筛选, ,继续培养继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群单克隆抗体单克隆抗体 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程体体外外培培养养注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔第130页/共156页提取用特定的选择性培养基第131页/共156页1.动物特异性免疫动物特异性免疫2.分离分离B淋巴细胞（淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意）。注意B淋巴淋巴细胞是一个系列。（细胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）3.细胞融合细胞融合三种融合方式三种融合方式:（BB;BG;GG）4.第一次筛选：在第一次筛选：在“选择培养基培养选择培养基培养”

59、上培养筛选上培养筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞（只有（只有BG杂交瘤细胞存活。但杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：杂交瘤细胞也是一个系列：如如B1G,B2G-BnG。而。而BB,GG在此培养基上不能存活。）在此培养基上不能存活。）5.第二次筛选：在第二次筛选：在“多孔培养板上多孔培养板上”培养培养杂交瘤细胞系列杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养克隆化培养”每个杂交瘤细胞，每个杂交瘤细胞，并进行并进行“单一抗体检测单一抗体检测”，“检测阳性检测阳性”的孔内即是所需要的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。的杂交瘤细胞。6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，选择

60、所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养体外培养或注射到或注射到小鼠腹小鼠腹腔内增殖腔内增殖。7.提取单克隆抗体。提取单克隆抗体。单抗的制备过程要点：单抗的制备过程要点：第132页/共156页4 4）、如何进行第）、如何进行第2 2次筛选？次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。第第1 1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2 2次筛选得次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。问题强化：问题强化：1 1）、本过程利用了哪些原理？）、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物