家兔实验性弥散性血管内凝血

1、家兔实验性弥散性血管内凝血家兔实验性弥散性血管内凝血Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit目的应用静脉注射兔脑浸液方法，复制应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性家兔实验性DICDIC。通过实验和几项血液。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断诊断DICDIC的常用方法，联系理论知识加的常用方法，联系理论知识加深理深深理深DICDIC的病因及发病机理。的病因及发病机理。 实验内容1.1. 称重、固定（清醒状态）、称重、固定（清醒状态）、局部浸润

2、麻醉局部浸润麻醉2.2. 手术：手术：颈动脉插管颈动脉插管，采集正常血标本，采集正常血标本(3.8%(3.8%枸橼枸橼酸钠溶液酸钠溶液0.5ml0.5ml，血液，血液4.5ml4.5ml）3.3. 造模：造模：i.v.2i.v.2兔脑浸液，兔脑浸液，60mg/kg.b.w.60mg/kg.b.w.（慢（慢,2ml/min,2ml/min）4.4. 采集采集DICDIC血标本，离心分离血浆备用血标本，离心分离血浆备用5.5. 测定样本：测定样本：KPTT,KPTT,PT,PT,Fg,Fg,3P3P6.6. 讨论讨论、小结、小结测定指标和方法1.1. 白陶土部分凝血活酶时间白陶土部分凝血活酶时间（

3、Kaolin partial thromboplastin time,KPTT）玻片法（挑丝法）玻片法（挑丝法） 2.2. 凝血酶原时间凝血酶原时间( (prothrombin time,PT) )玻片法（挑玻片法（挑丝法）丝法） 3.3. 纤维蛋白原纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）含量，饱和盐水法）含量，饱和盐水法4.4. 血浆鱼精蛋白副凝固试验血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P） 结果组别组别KPTT(sec.)PT(sec.)Fg(mg%)3P正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC12345注

4、意事项1.1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时夹闭动脉造成放血过量和失血。夹闭动脉造成放血过量和失血。2.2.采集抗凝血需掌握好血液采集抗凝血需掌握好血液: :抗凝剂之比例抗凝剂之比例(1:9)(1:9)并并充分混匀（颠倒混匀）。充分混匀（颠倒混匀）。3.3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，如换好新的动脉插管（因原来插管内可工作，如换好新的动脉插管（因原来插管内可能已有血栓阻塞），或向导管内注入生理盐水。能已有血栓阻塞），或向导管内注入生理盐水。4.4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤

5、，要缓慢推注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤，要缓慢推注注(2ml/min)(2ml/min)，同时密切注意家兔反应，如有，同时密切注意家兔反应，如有明显的呼吸急促和躁动不安明显的呼吸急促和躁动不安，应立即放血。，应立即放血。注意事项5.5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出血浆吸入清洁试管备用。血浆吸入清洁试管备用。6.6.测测KPTTKPTT、PTPT的平皿必须清洁、干燥、无油脂。的平皿必须清洁、干燥、无油脂。KPTTKPTT试剂使用前须摇匀。试剂使用前须摇匀。7.7.测测FgFg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要立即进时，血浆一旦与饱和盐水接触。要

6、立即进行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊前亦要再次混匀。前亦要再次混匀。8.8.测测3P3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。完完讨论1.1. 兔脑浸液引起兔脑浸液引起DICDIC的原因和机制？的原因和机制？2.2. KPTTKPTT、PTPT、FgFg和和3P3P各指标的临床意义是什各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化么？分别反应什么变化? ?3.3. KPTTKPTT、PTPT、FgFg和和3P3P的测定原理及发生变化的测定原理及发生变化的

7、原因和机制的原因和机制? ?清洁平皿和试剂清洁平皿和试剂3737预热预热滴加滴加20ul20ul血浆和血浆和20ul KPTT20ul KPTT试剂试剂, ,用清洁针头混匀预热用清洁针头混匀预热3min3min滴加滴加20ul 0.025mol/L20ul 0.025mol/L氯化钙溶液氯化钙溶液, ,立即启动立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值记录时间（正常值353545s45s）KPTT测定方法清洁平皿和试剂清洁平皿和试剂3737预热预热滴加滴加20ul20ul血浆预热血浆预热1mi

8、n1min滴加滴加40ul PT40ul PT试剂，立即启动秒表，试剂，立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值记录时间（正常值111113s13s）PT测定方法纤维蛋白含量测定方法试管编号试管编号1 12 23 34 4调调100%100%管管测定管测定管调调100%100%管管测定管测定管生理盐水生理盐水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml饱和盐水饱和盐水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml正常血浆正常血浆0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlDICDIC血浆血浆0.5ml0.5ml

9、0.5ml0.5ml3737孵浴孵浴3min3min，520nm520nm波长比色，读取波长比色，读取ODOD值值纤维蛋白含量测定方法各加生理盐水各加生理盐水4.5ml 4.5ml 各加饱和盐水各加饱和盐水4.5ml4.5ml（调（调100100管）管） （测定管）（测定管） 1423正常血浆各正常血浆各0.5ml DIC0.5ml DIC血浆各血浆各0.5ml0.5ml3P试验试管标记试管标记1.1.正常正常2.DIC2.DIC正常血浆正常血浆0.5ml0.5mlDICDIC血浆血浆0.5ml0.5ml1 1鱼精蛋白溶液鱼精蛋白溶液50ul50ul50ul50ul轻轻摇匀，轻轻摇匀，3737

10、水浴孵浴水浴孵浴15min15min，黑色背景观察沉淀物，黑色背景观察沉淀物DIC动物模型的复制方法l凝血酶凝血酶l蛇毒蛇毒l兔脑浸液兔脑浸液l内毒素内毒素l羊水羊水实验室诊断DIC的方法 筛选指标筛选指标：l血小板计数（血小板计数（platelet，PLT）l凝血酶原时间凝血酶原时间( (prothrombin time，PT) ) l纤维蛋白原含量（纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg）l纤溶指标：纤溶指标：FDPFDP测定、测定、3P3P试验、优球蛋白溶解试验、优球蛋白溶解时间、时间、D-D-二聚体，等二聚体，等实验室诊断标准实验室诊断标准( (以下三项以上异常以下三项以上异常) ) 1. PT延长或缩短延长或缩短3s以上，以上，KPTT延长或缩短延长或缩短10s以上；以上；2. 血浆血小板活化产物含量增加：血浆血小板活化产物含量增加：-TG、PF4、TXB2、