药物分析学：第七章-甾体激素类药物分析

1、各论 第七章 甾体激素类药物的分析第一节基本结构和分类环上双键的表示方法：双键位置1、肾上腺皮质激素A环有4-3-酮结构：UVC17位有-酮醇基或成酯：强还原性部分药物C11-OH或C11=O部分药物C6-X，C9-X含有21个C人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤素，16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。2、雄性激素及蛋白同化激素雄性激素母核19个C，蛋白同化激素母核18个CA环有4-3-酮结构：UVC17位有-OH或成酯：含有19个C3、孕激素A环有4-3-酮结构：UVC17位有甲酮基或乙炔基：多数C17-OH或部分羟基被酯化含有21个C4、雌激素A环为苯环，C3位有酚羟基：

2、C17-OH或部分成酯或成醚部分药物C17-CC含有18个C口服避孕药，如炔诺酮、异炔诺酮、安宫黄体酮等二、鉴别试验1、强酸呈色反应2、官能团的反应（1） C17 醇酮基：（强还原性） （2）酮基的呈色反应:（3）活波亚甲基的反应应用：验孕棒（4）酚羟基的呈色反应（5）乙炔基（6）卤素的反应（7）水解产物的反应3、制备衍生物测定熔点三、杂质检查1、有关物质的检查来源：原料，中间体，异构体，降解产物方法：高低浓度对比法 TLC判定依据：供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。供试品如显杂质斑点，与对照溶液(1)所显的主斑点比较不得更深，如有一个斑点深于对照溶液

3、(1)，与对照溶液（2）所显的主班点比较，不得更深。HPLC判定依据：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，不得超过3个，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍， 各杂质峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的3/4。2、硒的检查来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢。方法：规定A供A对3、残留溶剂的检查GC法 内标加校正因子测定样品中甲醇和丙酮的含量 顶空进样法 限量要求：丙酮：0.5%（g/g)；甲醇：0.3%4、游离磷酸的检查四、含量测定（一）UV法适用于原料药。 样品中“其它甾体”不合格时，不适用。（二）比色法1、异烟肼比色法（1）原理：C3酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在

4、酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量。（2）反应条件：溶剂：无水乙醇，无水甲醇（溶解度和可逆）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度：常用HCl；HCl：异烟肼 = 2M:1M时，获最大吸收度。水分、O2、光线的影响：含水量腙水解A%O2与光线无影响反应的专属性：反应条件下，4-3-酮具有一定专属性 C20酮基反应慢， C17酮基反应慢； C11酮基不反应 4-3-酮室温下，不到1h反应完全2、四氮唑比色法（1）原理： （2）四氮唑盐的种类：氯化三苯四氮唑（TTC）/红四氮唑（RT）；三苯甲瓒（不溶于水；深红）；蓝四氮唑（BT）；双甲瓒（暗蓝）（3）讨论：结构、反应温度和时间、

5、水分、碱浓度、空气中氧、试剂类别和浓度等，对反应速度、呈色强度和稳定性有影响。 官能团对反应速度的影响： 溶剂、水分的影响 碱的种类和加入顺序的影响 采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果。加入顺序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH-原因： 皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接触，有部分分解。O2与光线的影响温度与时间的影响3、Kober反应比色法 (1) 条件较难控制，易出双色黄+红(2) 重现性较差： 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反应时间和温度的影响。 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定剂，赋形剂，溶剂对测定有干扰为克服这些缺点，对Kober反应所用试剂进行改进铁酚试剂法4

6、、铁酚试剂法（1）铁酚试剂的组成：硫酸亚铁铵、浓硫酸、过氧化氢、苯酚（2）各试剂的作用 Con.H2SO4和H2O2的作用即：Fe2+Fe3+三价铁的作用加快黄色生成的速度促进黄色向红色的转变增加红色的稳定性苯酚的作用消除反应产生的荧光促进红色的生成（三）HPLC法USP、BP、JP均采用RP-HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好1. 熟悉本类药物的分类，掌握其结构特征与分析方法的关系；2. 掌握某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法；3. 掌握本类药物中其他甾体的检查方法，了解其他特殊杂质的

7、检查；4. 掌握各种比色法的原理、方法及测定条件；5. 了解UV法和HPLC法在其含量测定中的应用。练习题1四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定（A） A 可的松 B 睾丸素 C 雌二醇 D 炔雌醇 E 黄体酮2黄体酮在酸性溶液中可与下列哪些试剂反应呈色（ACD）A 2，4-二硝基苯肼 B 三氯化铁 C 硫酸苯肼 D 异烟肼 E 四氮唑盐3Kober反应用于定量测定的药物（B）A 链霉素 B 雌激素 C 维生素B1 D 皮质激素 E 维生素C4雌激素类药物的鉴别可采用与（B）作用生成偶氮染料A 四氮唑盐 B 重氮苯磺酸盐 C 亚硝酸铁氰化钠 D 重氮化偶氮试剂5符合四氮唑比色法测定甾体激素

8、药物的条件为（ABE） A 在室温或30恒温条件下显色 B 用避光容器并置于暗处显色 C 空气中氧对本法无影响 D 水量增大至5%以上，使呈色速度加快E 最常采用氢氧化四甲基胺为碱化试剂6. 甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团（D） A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基7. 用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是（A） A强酸性 B中性 C强碱性 D弱碱性 E以上都不对问题812 A维生素B1 B醋酸地塞米松 C两者皆是 D两者皆不是 8. 异烟肼比色法 （B） 9. 硫色素反应（A） 10. 紫外分光光度法（C） 1

9、1. 羟肟酸铁反应（D） 12. 绿奎宁（Thaciaquin）反应（D）13. 可用于氢化可的松鉴别的试剂有（ABCD） A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸14. 可用于甾体激体类药物的测定法有（ABCDE） A高效液相色谱法 B四氮唑盐法 C紫外分光光度法 D异烟肼比色法 EKober反应比色法15. 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是（B）A雌二醇 B黄体酮 C醋酸可的松 D苯丙酸诺龙 E以上都不对16. 各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是（C）A. 它们没有特征紫外吸收，不能用紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C

10、. 由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰 D. 色谱法比较简单，精密度好 E. 色谱法准确度优于滴定分析法17. 异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是（A） A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D. 炔基 E. 甾体母核1923.可适用的药物： A. 可的松 B. 雌二醇 C. 两者均可 D. 两者均不可 14亚硝酸钠滴定法（D） 15高效液相色谱法（C） 16能与羰基试剂缩合（A） 17可用铁酚试剂比色法测定（B） 18可用四氮唑比色法测定（A）24. Kober反应是（B） A. 皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色 B. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 C. 维生素A与无水三氯化锑的无醇氯仿溶液呈色 D. 异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色26. Kober反应及铁一酚试剂法适用于哪一药物的含量测定（B） A. 黄体酮 B. 雌二醇 C. 甲基睾丸素 D. 甲基炔诺酮 E. 氢化可的松27. 四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用C17醇酮基的何种性质（B） A氧化性 B还原性 C可加成性 D酸性 E碱性28. 可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮染料的甾体激素类药物是（D） A.醋酸可的松 B.睾酮 C.黄体酮 D.雌二醇 E.