《中药化学实验》word版

1、“中药化学实验技术”实验教学大纲实验大黄中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的提取、分离和鉴定一实验目的和要求：掌握pH梯度萃取法的原理和操作技术。学习硅胶柱色谱法分离精制大黄素。学习离心薄层色谱法、快速制备液相色谱法分离精制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。了解高速逆流色谱法的分离原理和方法。学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。二实验原理大黄记载于神农本草经等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），药用

2、大黄（R. officinale Baill）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。羟基蒽醌苷元主要有下列五种：R1R2名 称晶 形熔 点-H-COOH大黄酸(Rhein)黄色针晶318320-CH3-OH大黄素(Emodin)橙色针晶256257-H-CH2OH芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶206208-OCH3- CH3大黄素甲醚(Physcion)砖红色针晶207-H-CH3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196酸性强弱：大黄酸大黄素芦荟大黄素大黄酚大黄素

3、甲醚极性强弱：大黄酸芦荟大黄素大黄素大黄甲醚大黄酚三实验方法酸水解取大黄粉10g，加20%的硫酸水溶液100ml，直火加热1小时，过滤，滤饼水洗中性，干燥。总羟基蒽醌苷元的提取干燥的滤饼置索氏提取器中，加入乙醚，回流提取2.5小时，得乙醚提取液。pH梯度萃取法分离大黄中的蒽醌苷元 乙醚液 2.5%NaHCO350ml(分三次) 碱液 乙醚液盐酸调pH=22.5%Na2CO350ml（分三次）沉 淀(大黄酸)碱液 乙醚液盐酸调pH=25%Na2CO360ml(分四次)沉淀(大黄素) 碱液 乙醚液盐酸调pH=21%NaOH60ml(分四次)沉淀(芦荟大黄素) 碱液 乙醚液(大黄酚+大黄素甲醚)萃取

4、效果以TLC来确定。4 五种羟基蒽醌苷元的分离精制（1）大黄酸的精制将2.5%NaHCO3萃取物干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。（2）用硅胶柱色谱法分离精制大黄素装柱：取100200目的硅胶约10g，按干法或湿法装柱加样：湿法或干法上样大黄素粗品。洗脱，鉴定，合并：用石油醚：乙酸乙酯（7：3）为洗脱剂洗脱，分段收集，用硅胶薄层跟踪检查。合并大黄素部分。放置析晶：大黄素部分适当浓缩，放置析晶，得纯品大黄素。（3）芦荟大黄素的精制PH梯度萃取法得到的芦荟大黄素沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。（4

5、）用离心薄层层析法分离大黄酚和大黄素甲醚 圆形硅胶薄层板的制备：硅胶G-CMC-Na（30g+7580ml0.4%CMC-Na）进样：大黄酚和大黄素甲醚混合物洗脱：石油醚乙酸乙酯鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。（5）用快速制备液相色谱法分离大黄酚和大黄素甲醚 吸附剂：硅胶洗脱剂：石油醚乙酸乙酯鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。5 大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的鉴定(1) 颜色反应大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚与碱及醋酸镁的颜色反应并与茜草素比较颜色的不同。(2) 熔点测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚(3)

6、 TLC大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的薄层鉴定(4) IR用溴化钾压片法，测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的红外光谱。四 实验指导1本实验要点及注意事项。 PH梯度萃取的原理及注意事项。 如何设计萃取分离方案的程序与方法。 蒽醌化合物红外光谱的特点。 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜乙醚，回洗碱水液。 碱液的配制要准确。 每步萃取时，利用色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。 硅胶色谱柱的装柱的操作，避免柱中存有气泡。 索氏提取器的使用方法、原理、注意事项。 用乙醚回流洗脱时应注意防火。2实验报告要求 记录大黄总蒽醌的提取方法。 总蒽醌的色谱检查结果（附色谱图）