GC法快速测定烟样中生物碱含量教学文案

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。GC法快速测定烟样中生物碱含量-GC法快速测定烟样中生物碱含量张承聪2，杨金辉1，孙敏2，李天飞1，杨文凡2(1.云南烟草科学研究院，云南昆明650106；2.云南大学化学系，云南昆明650091)摘要：本文采用GC技术对烟叶中四个主要生物碱作了定量分析。提出了一种快速，简便，准确测定烟叶样品中生物碱的含量的气相色谱方法。极大的简化了烟叶样品的前处理过程，缩短了色谱分析时间，整个色谱分析时间只需5分钟。关键词：气相色谱；烟叶；生物碱尼古丁(Nicotine)，去甲基尼古丁(Nornicotine)，新烟

2、碱(Anabasine),去氢新烟碱(Anatabine)在烟草烘烤和加工过程中与亚硝酸盐作用生成相应的致癌化合物-亚硝胺化合物1。因此为了对烟叶中的亚硝胺化合物含量降低做进一步研究，准确测定烟叶样品中的四个主要生物碱的含量显得至关重要。气相色谱法测定烟叶样品中生物碱的的原理是采用PE-17弹性石英毛细管柱作色谱床对内标物和样品中四个生物碱进行分离，通过氢火焰(FID)检测器检测其响应信号，采用内标标准曲线法定量2,以求出四个生物碱的含量。并对相应的色谱条件和前处理方法进行了优化选择。分析结果表明此方法简便，快速，是一种确实可行的定量检测方法。I实验部分I-1仪器及工作条件：GC：Autosy

3、stemXL型气相色谱仪(美国PE公司)和Tubrochrom色谱工作站(美国PE公司)；FID检测器；M061-LF-517型自动进样器(美国PE公司)；0.32mm,30mPE-17弹性石英毛细管柱。经优化选择的条件：载气He；柱前压40PSI;燃气H2压力0.2Mpa;助燃气Air压力0.3Mpa;载气分流比60:1；气化室温度300；检测器温度320；进样量1.0ul；升温程序：初温120，以10/min的速率升温到170。I-2试剂：尼古丁标样(ACROS提供)；去甲基尼古丁,新烟碱,去氢新烟碱标样(美国肯塔基大学化学系提供)；喹啉(内标标样)(由FLUKA提供)；CH2Cl2(萃取

4、溶剂)经纯化处理至进样无干扰峰；烟叶样品由云南省玉溪红塔烟草集团提供。I-3萃取溶剂(含内标物喹啉)：将喹啉40.0mg溶解在二氯甲烷中,定容为1升(浓度4ug/ml).I-4标液的配制：分别吸取6,4,2,1,0.5ml尼古丁标准液(100mg/ml)放入5个10ml带塞的样品容器,各加入1ml萃取溶剂(含内标),再用二氯甲烷定容为10ml.进行色谱分析，每个样品必须重复三次。相同方法配置另外三个生物碱的标准溶液。根据色谱结果作标准曲线分别计算四个生物碱的含量。标准曲线见图3所示。I-5样品处理：取200.0mg样品放入具塞试管中,加入1ml氢氧化钠水溶液（10%）,摇动试管使样品全部湿润。

5、加入萃取溶剂(含内标物喹啉)10ml,塞上塞子,用振动机振摇60分钟。过滤后,取滤液放入自动进样器样品瓶中进行气相色谱分析。四个生物碱标样及实际烟样色谱图分别见图1，图2。图1：标样色谱图图2：烟叶样品色谱图(ChromatogramofStandardSamples)(ChromatogramofTobaccoSample)1.CH2Cl22.Quinline3.Nicotine萃取溶剂喹啉(内标)尼古丁4.Nornicotine5.Anabasine6.Anatabine去甲基尼古丁新烟碱去氢新烟碱1：尼古丁r2=0.998979Y=0.9111X-0.032326r2=0.9989792

6、:新烟碱Y=0.810577X-0.082671r2=0.9993413：去氢新烟碱Y=0.719218X-0.042829r2=0.9999754：去甲基尼古丁Y=0.787903X-0.289079r2=0.995252图3：标准工作曲线(StandardCurves)表1方法精密度(PrecisionofMethod)尼古丁去甲基尼古丁新烟碱去氢新烟碱平均值（%）0.640.060.030.16标准偏差0.00980.00160.00110.0031变异系数（+%）1.542.673.671.94II.结果与讨论经过对CH2Cl2,CHCl3和CHCl3+苯(1：9)三组溶剂进行筛选，在

7、10ml溶剂，振荡60分钟的相同条件下，回收率依次为82.37%,79.05%和81.34%,由此可见CH2Cl2的回收率最高.因此在本方法中最终采用CH2Cl2作萃取溶剂.方法精密度见表1此方法对四个生物碱的分析确实做到了快速，准确和简便可行等特点，值得推广应用。参考文献1.金闻博，雍国平编著.尼古丁化学.中国轻工业出版社.北京.1993吴采樱编著.现代毛细管柱气相色谱法.武汉大学出版社.武汉.1990.RapidDeterminationofAlkaloidsContentofTobaccobyGCYANGJin-hui1,SUNMin2,ZhangCheng-cong2,YANGWen-

8、fan2,LiTian-fei1(1.YunnanInstituteofTobaccoScienceKunming650106,China;2.DepartmentofChemistry,YunnanUniversity,Kunming650091,China)Abstract:GasChromatographyisappliedasaquantitativemethodtodeterminationthebiologicalkalisintobaccoleafsample.Itsarapid,simpleandaccuratemethod.Pretreatmentoftobaccosamplehasbeensimplifie