毕业设计：酸枣酚类化合物的高效液相色谱测定及其抗氧化作用的研究(终稿)-精品(共25页)

1、PAGE PAGE 23酸枣(sunzo)酚类化合物的高效液相色谱(s p)测定及其抗氧化作用(zuyng)的研究（西北大学 化工学院食品科学与工程系 西安 710069）摘要：本文以3种不同溶剂酸枣提取物为研究对象，建立了一种测定酸枣酚类化合物的HPLC-ECD分析方法以及在测定其提取物中总酚酸和总黄酮含量的基础上，利用体外法测定各提取物的还原能力、对Fe2+的络合能力、对DPPH自由基的清除作用及对羟基自由基的清除作用。实验结果表明，酸枣中含有没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、高良姜素、山奈酚等十种酚酸。3种不同溶剂酸枣提取物均有显著的抗氧化性，呈剂量效

2、应关系，酚酸含量、还原能力、抗氧化能力之间呈正相关。关键词：酸枣；酚类化合物；高效液相色谱；抗氧化Jujube phenolic compounds by HPLC and its antioxidant research (Northwest University, College of Chemical Engineering, Food Science & Technology, Xian 710069)Abstract: In this paper, three kinds of extracts in different solvents axillaris study, the e

3、stablishment of a determination of phenolic compounds in jujube HPLC-ECD method and measured the total phenolic extract and total flavonoids based on the in vitro methodThe ability to extract the reduction of Fe2+complexation ability of the DPPH free radical scavenging and scavenging of hydroxyl rad

4、icals.Experimental results show that the jujube contains gallic acid, protocatechuic acid, caffeic acid, p-coumaric acid, ferulic acid, rutin, quercetin, myricetin, galangin, kaempferol and ten other acids.3 different solvents jujube extract showed a significant antioxidant activity in a dose-respon

5、se relationship, phenolic content, reducing power, antioxidant capacity were positively correlated.Key words: Jujube; phenolic compounds; HPLC; antioxidant目 录 摘要(zhiyo) Abstract TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc263334969 第一章 绪论(xln) PAGEREF _Toc263334969 h 1 HYPERLINK l _Toc263334970 1.1 酚酸类化合物 PAGER

6、EF _Toc263334970 h 1 HYPERLINK l _Toc263334971 1.2 黄酮类化合物 PAGEREF _Toc263334971 h 1 HYPERLINK l _Toc263334972 1.3 高效(o xio)液相色谱检测器 PAGEREF _Toc263334972 h 2 HYPERLINK l _Toc263334973 1.3.1 电化学检测器 PAGEREF _Toc263334973 h 2 HYPERLINK l _Toc263334974 1.4 高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物中的应用 PAGEREF _Toc263334974 h 2 H

7、YPERLINK l _Toc263334975 1.4.1 高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物检测中的应用 PAGEREF _Toc263334975 h 3 HYPERLINK l _Toc263334976 1.4.2 高效液相色谱法在酚酸和黄酮类化合物抗氧化活性研究中的应用 PAGEREF _Toc263334976 h 3 HYPERLINK l _Toc263334977 1.5 本论文研究的内容 PAGEREF _Toc263334977 h 3 HYPERLINK l _Toc263334978 参考文献: PAGEREF _Toc263334978 h 4 HYPERLINK

8、l _Toc263334979 第二章 酸枣提取物的HPLC-ECD法测定 PAGEREF _Toc263334979 h 8 HYPERLINK l _Toc263334980 2.1 材料与方法 PAGEREF _Toc263334980 h 8 HYPERLINK l _Toc263334981 2.1.1 仪器及试剂 PAGEREF _Toc263334981 h 8 HYPERLINK l _Toc263334982 2.1.2 溶液配制 PAGEREF _Toc263334982 h 8 HYPERLINK l _Toc263334983 2.1.3 色谱条件 PAGEREF _T

9、oc263334983 h 9 HYPERLINK l _Toc263334984 2.2 结果与分析 PAGEREF _Toc263334984 h 9 HYPERLINK l _Toc263334985 2.2.1 色谱条件的优化 PAGEREF _Toc263334985 h 9 HYPERLINK l _Toc263334986 2.2.2 线性关系考察 PAGEREF _Toc263334986 h 10 HYPERLINK l _Toc263334987 2.2.3 精密度实验 PAGEREF _Toc263334987 h 11 HYPERLINK l _Toc263334988

10、 2.2.4 稳定性实验 PAGEREF _Toc263334988 h 11 HYPERLINK l _Toc263334989 2.2.5 重复性实验 PAGEREF _Toc263334989 h 11 HYPERLINK l _Toc263334990 2.2.6 样品的测定 PAGEREF _Toc263334990 h 11 HYPERLINK l _Toc263334991 2.3 结 论 PAGEREF _Toc263334991 h 12 HYPERLINK l _Toc263334992 参考文献： PAGEREF _Toc263334992 h 12 HYPERLINK

11、l _Toc263334993 第三章 酸枣提取物抗氧化活性的研究 PAGEREF _Toc263334993 h 14 HYPERLINK l _Toc263334994 3.1 材料与方法 PAGEREF _Toc263334994 h 14 HYPERLINK l _Toc263334995 3.1.1 材料 PAGEREF _Toc263334995 h 14 HYPERLINK l _Toc263334996 3.1.2 试剂 PAGEREF _Toc263334996 h 14 HYPERLINK l _Toc263334997 3.1.3 主要仪器设备 PAGEREF _Toc2

12、63334997 h 14 HYPERLINK l _Toc263334998 3.2 实验方法 PAGEREF _Toc263334998 h 14 HYPERLINK l _Toc263334999 3.2.1 酸枣提取物制备方法 PAGEREF _Toc263334999 h 15 HYPERLINK l _Toc263335000 3.2.2 不同溶剂提取的酸枣的总酚含量测定方法 PAGEREF _Toc263335000 h 15 HYPERLINK l _Toc263335001 3.2.3 不同溶剂提取的酸枣的总黄酮含量测定方法 PAGEREF _Toc263335001 h 1

13、5 HYPERLINK l _Toc263335002 3.2.4 不同溶剂提取的酸枣对Fe3+的还原能力测定5 PAGEREF _Toc263335002 h 15 HYPERLINK l _Toc263335003 3.2.5 不同溶剂提取的酸枣对Fe2+络合能力的测定6 PAGEREF _Toc263335003 h 16 HYPERLINK l _Toc263335004 3.2.6 不同溶剂提取的酸枣对DPPH自由基的清除实验 PAGEREF _Toc263335004 h 16 HYPERLINK l _Toc263335005 3.2.7不同溶剂提取的酸枣对羟基自由基的清除实验

14、PAGEREF _Toc263335005 h 16 HYPERLINK l _Toc263335006 3.3 结果与分析 PAGEREF _Toc263335006 h 17 HYPERLINK l _Toc263335007 3.3.1 酸枣的提取率 PAGEREF _Toc263335007 h 17 HYPERLINK l _Toc263335008 3.3.2 酸枣的总酚含量 PAGEREF _Toc263335008 h 17 HYPERLINK l _Toc263335009 3.3.3酸枣的总黄酮含量 PAGEREF _Toc263335009 h 17 HYPERLINK

15、l _Toc263335010 3.3.4 酸枣不同溶剂提取物对Fe3+的还原能力 PAGEREF _Toc263335010 h 18 HYPERLINK l _Toc263335011 3.3.5 酸枣提取物对Fe2+的络合能力 PAGEREF _Toc263335011 h 19 HYPERLINK l _Toc263335012 3.3.6 酸枣提取物对DPPH自由基的清除 PAGEREF _Toc263335012 h 19 HYPERLINK l _Toc263335013 3.3.7 酸枣提取物对羟基自由基的清除 PAGEREF _Toc263335013 h 20 HYPERL

16、INK l _Toc263335014 3.4 结论 PAGEREF _Toc263335014 h 20 HYPERLINK l _Toc263335015 参考文献： PAGEREF _Toc263335015 h 20第一章 绪论(xln)酚类化合物是广泛分布于植物之中的一类复杂(fz)的化合物，是人类食物中一种普遍存在组分。酚类化合物包括酚酸、黄酮和其它化合物。其中，酚酸和黄酮均具有显著的生理和药理活性，对一些(yxi)常见病、多发病有重要的生理作用。近年来，酚酸和黄酮类化合物的分析方法研究得到了迅速的发展。本章简单介绍了酚酸和黄酮类化合物，综述了高效液相色谱法在研究天然产物抗氧化成分

17、中的应用情况。1.1酚酸类化合物 酚酸类化合物包括阿魏酸、咖啡酸、棕榈酸、香草酸等。阿魏酸，化学名为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸。在医学上，阿魏酸有广泛用途,其毒性极低, 具有抗炎、止痛、抗血栓形成、抗紫外线辐射、抗自由基以及调节人体免疫功能的作用，在临床上用于冠心病、脑血管病、脉管炎、白细胞和血小板减少等疾病的治疗。在化妆品中主要作为抗氧化剂使用，具有吸收紫外线和防止氧化的作用, 被认为是最好的天然防晒剂。酚酸类化合物具有多种生理及保健功能，主要表现在：清除体内自由基、舒张血管、抗氧化、抗癌、抗病毒、抗菌、消炎、抗癌细胞血管阻断素、刺激免疫系统产生抗体、抑制磷脂酶、脂肪氧化酶、环加氧酶、黄嘌

18、呤氧化酶等酶的活性1-5。酚酸类化合物可以分为以下几类6：羟基苯甲酸(C6- C1)的羟基化衍生物，这类化合物除了被酯、配糖取代外，大多以游离态存在，常见的如没食子酸；苯乙酮、苯乙酸(C6- C2)的衍生物；苯乙烯酸、香豆素、异香豆素(C6-C3)的衍生物，这类酚酸化合物常常被酯化很少以游离态存在，例如：咖啡酸、阿魏酸、香豆酸等。1.2 黄酮类化合物黄酮类化合物是指具有C6-C3-C6结构特点的一类酚类化合物。黄酮类化合物广泛存在于植物体内，是植物长期自然选择过程中产生的次级代谢产物。黄酮类化合物对人类健康有重要作用，并且具有特殊的生物效能。是一种自由基清除剂，对过敏、感染、高血压和肿瘤等疾病

19、具有辅助治疗等作用7-12。根据C3部分成环、氧化和取代方式的差别，黄酮类化合物可分为黄酮醇、黄烷酮、异黄酮、黄烷醇、黄烷酮醇、查耳酮和花色素等13。酚酸和黄酮类化合物的酚羟基(qingj)是优良的氢或中子给予体，对能引起DNA、蛋白质或生物(shngw)组织膜及各种细胞器因产生过氧化作用而导致生物体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤的过氧化自由基、羟基自由基等有明显的清除作用，从而保护了各器官的细胞结构14-17。由于它特殊(tsh)的生理作用，研究酚酸和黄酮类化合物的高效液相色谱法具有十分重要的意义。1.3 高效液相色谱检测器 高效液相色谱（HPLC)是20世纪60年代后，在经典

20、液相色谱-柱色谱的理论基础上加以改进而发展起来的新型高效分离分析技术。HPLC将分离和分析有机的结合起来，实现了对复杂体系中组分、价态或化学性质相近的元素或化合物的快速分析。HPLC由于具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点，已经成为药品分析，食品卫生，商品检验，环境检测，化学化工等领域中重要的分离分析技术18-23 。1.3.1 电化学检测器 电化学检测是根据电化学原理和物质的电化学性质进行检测的。电化学检测器主要有安培、极谱、库仑和电导检测器四种。前三种统称为伏安检测器，以测量电解电流的大小为基础，后者则以测量液体的电阻变化为根据。其中，安培检测器的应用最为广泛。 安培检测器是在外加

21、电压的作用下，利用待测物质在电极表面上发生氧化还原反应引起电流的变化而进行测定的一种方法。安培检测器具有如下优点24：灵敏度高。仅有110的被测定的电活性物质得到转化，但检出限可达10-910-12g，而且对各类电活性物质灵敏度差别很小；选择性高。一般只对电活性物质有响应，适用于电活性物质的痕量测量，而不受非电活性物质的干扰。由于每种物质的氧化还原反应的电位不同，对于具有不同电极电位的物质，只要在电解池的两极间施加不同的电压，就可以控制电极反应，提高选择性；线性范围宽。一般线性范围可达45个数量级，对某些体系线性范围甚至可达到6个数量级；结构简单。不需要紫外可见光检测器的光学元件，造价和使用成

22、本都很低；检测池体积小，柱外效应较小，噪声低，响应速度快。根据电化学检测器的工作原理，原则上凡是具有电活性的化合物都可以用安培检测器来检测。目前，液相色谱电化学检测器已在活体代谢分析、临床化学、生物医学、食品卫生的检查和环境等领域获得广泛的应用。采用衍生化技术，还可将它扩展到非电活性物质的检测。金利通等25-26通过在流动相中添加抗坏血酸，成功的用于测定异丙醇、异丁醇、叔丁醇和戊醇及甲酸甲酯、甲酸乙酯等非电化学活性的化合物。Watabe等27用分子印记聚合体作为样品前处理装置，液相色谱-电化学测定了水体中痕量激素双酚A，灵敏度高，检测速度快。近几年，随着新检测池28、新的修饰电极29-32的不

23、断引入，液相色谱-电化学检测的研究领域将进一步被扩展。1.4 高效(o xio)液相色谱法在酚酸和黄酮化合物中的应用(yngyng)1.4.1 高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物检测(jin c)中的应用酚酸和黄酮类化合物是一类重要的有机化合物，它们的酚羟基是优良的氢或中子的给予体，对能引起DNA、蛋白质或生物组织膜及各种细胞器因产生过氧化作用而导致生物体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤的过氧化自由基、羟基自由基等有明显的清除作用，从而保护了各器官的细胞结8,9,33,34 。由于它特殊的生理作用，研究酚酸和黄酮类化合物的各种测定方法具有十分重要的意义。1.4.2 高效液相色谱法在酚

24、酸和黄酮类化合物抗氧化活性研究中的应用 酚酸和黄酮类化合物是一类天然的抗氧化剂，评价其抗氧化能力方法的研究已被广泛的关注。DPPH自由基法和ABTS+法可直接用于评价植物提取物抗氧化能力，其原理是：当抗氧化剂与自由基发生反应后，反应体系的颜色发生变化。通过测定吸光度的变化来评价抗氧化剂清除自由基的能力。采用光度计仅能够评价样品的总抗氧化能力35。另外，利用一些反应(例如Fenton反应)也可以评价植物提取物的抗氧化能力，其原理是：利用抗氧化剂与捕获剂同时与自由基竞争反应，通过捕获剂反应前后量的变化可以评价样品的总抗氧化能力36。近年来，利用高效液相色谱法集分离和检测于一体的特性，将高效液相色谱

25、法应用于抗氧化的研究中，不仅能够快速识别复杂混合物中抗氧化成分，而且可以用于定量评价复杂混合物中单组分的抗氧化能力。郭华等37利用HPLC-DAD技术，以苯甲酸作为羟基自由基捕获剂，根据加入中草药提取液前后苯甲酸改变量，从而间接测定了中草药提取液对羟基自由基的清除率。Koleva等38采用DPPH稳定自由基在线测定了复杂混合物中的单个抗氧化剂，表明在线法是一种快速、高通量筛选抗氧化剂的方法。Shui等39利用HPLC-DAD-ESI/MS联用技术，结合红外光谱和核磁共振谱，从黄秋葵植物提取物中鉴定出四种具有抗氧化活性的槲皮素糖苷类化合物。Wu等40采用HPLC-UV从菊科植物中鉴定出两种具有抗

26、氧化活性的黄酮类化合物。1.5 本论文(lnwn)研究的内容(nirng) 在本章(bn zhn)中，简单介绍了酚酸和黄酮类化合物，综述了高效液相色谱检测器-电化学检测器及高效液相色谱法在酚酸和黄酮类化合物研究中的应用情况。在第二章中，建立了同时测定酸枣提取物中没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、高良姜素、山奈酚10种酚类化合物含量的HPLC-ECD法。在第三章中，在测定其提取物中总酚酸和总黄酮含量的基础上，利用体外性法测定各提取物的还原能力、对Fe2+的络合能力、对DPPH自由基的清除作用及对羟基自由基的清除作用。参考文献:Roberta M.,Robert

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47、emistry,2006,96:220-227.第二章 酸枣(sunzo)提取物的HPLC-ECD法测定 酸枣(sunzo)为鼠李科枣属(Ziziphus)植物(zhw)，在我国分布广泛1-2，有着很高的营养和食疗价值3-4 ，富含糖、蛋白质、有机酸、维生素和多种酚类化合物5。酸枣仁是中医常用的宁心安神药，酸枣果实具有止血、止泻等功效6。有研究表明，酸枣具有镇静、抗惊厥7、降压、降血脂等8,9作用。近年来，英国学者在对虚弱症患者的观察中发现，凡是连续按时吃酸枣的，其康复速度比单纯服用多种维生素类的快6倍以上。因此，酸枣被证明具有防病、抗衰老与养颜益寿的作用，这些都与酸枣中富含多酚类等抗氧化物质

48、有关。 目前，国内外对酚酸类化合物的分离检测方法有比色法10、高效液相色谱法11和毛细管电泳法12等。高效液相色谱法具有简便、快速，回收率好，精密度高等优点。电化学检测器由于具有选择性好、灵敏度高以及响应迅速等特点，在分析电活性物质时具有不可替代的优势。 本文(bnwn)采用高效液相色谱-电化学法，对3种不同(b tn)溶剂提取的酸枣化合物中没食子酸(mi sh z sun)、原儿茶酸、咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、高良姜素、山奈酚10种酚类化合物进行直接的测定，为揭示酸枣的保健功能和抗氧化活性提供依据。2.1 材料与方法2.1.1 仪器及试剂HP1100高效液相色谱仪（美

49、国Agilent公司），包括四元梯度泵 （G1311A），二极管阵列检测器（G1315A）和电化学检测器（1049A）；色谱数据通过HP工作站采集和获得；Milli QG超纯水制备仪（美国Millipore公司）；DL-180 超声清洗器（浙江省象山县石浦天电子仪器厂）。酸枣：分别用水、甲醇、丙酮提取，最后用80%乙醇配制为8 mgmL-1酸枣液。没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、杨梅酮、高良姜素、山奈酚对照品（纯度98%）均购于sigma公司。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，所用水为超纯水。2.1.2 溶液配制对照品溶液：准确称取对照品适量，分别置于10 mL量瓶中

50、，用甲醇溶解并定容，振荡均匀后即可得没食子酸（0.40 mgmL-1）、原儿茶酸（0.42 mgmL-1）、咖啡酸（0.36 mgmL-1）、p-香豆酸（0.30 mgmL-1）、阿魏酸（0.35 mgmL-1）、芦丁（0.42 mgmL-1）、杨梅酮（0.06 mgmL-1）、槲皮素（0.33 mgmL-1）、山奈酚（0.30 mgmL-1）、高良姜素（0.30 mgmL-1）的单一对照品储备液。其他不同浓度的各对照品溶液由储备液稀释得到。2.1.3 色谱条件美国Zorbax SB-C18 (150 mm 416 mm，5.0 m) 色谱柱；流动相为甲醇-2%的醋酸；梯度洗脱，其时间程序为0

51、 10 15 25 30 35min，甲醇体积分数相应为5% 20% 40% 60% 70% 70%；流速为1.0 mLmin-1；电化学检测器（ECD）：安培检测电位为0.8 V；柱温为 30 ；检测波长为360 nm。没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、芦丁、杨梅酮、槲皮素、山奈酚、高良姜素的保留时间分别为3.346、5.977、12.623、16.185、17.105、18.968、20.300、23.355、36.147、31.83。2.2 结果(ji gu)与分析2.2.1 色谱(s p)条件的优化由于各组分(zfn)极性相差较大，故采用梯度洗脱，先后尝试了不同比例的流动

52、相体系，对色谱条件进行了优化。酚类化合物属于有机酚酸，易解离，因而常常导致色谱峰出现拖尾、变宽和不对称现象。这是由于酚羟基的解离，使其在固定相表面有双重保留机制。在流动相中加入酸性抑制剂可使酚羟基的解离被抑制，在反相色谱条件下，成为中性疏水缔合物，使分离效果和峰形得到改善13。本实验选定甲醇-2%醋酸水溶液体系作为流动相。结果表明：在本文所确定的色谱条件下，酸枣中的多酚化合物得到最佳的分离效果，如图1所示。图1 10种酚类化合物的HPLC-ECD色谱图 SKIPIF 1 0 1. 没食子酸 2. 原儿茶酸 3. 咖啡酸 4. p-香豆酸 5. 阿魏酸6. 芦丁 7. 杨梅酮 8. 槲皮素 9.

53、 山奈酚 10. 高良姜素 SKIPIF 1 0 SKIPIF 1 0 SKIPIF 1 0 SKIPIF 1 甲醇丙酮，由上述测试数据可知，酸枣的提取率与水、甲醇、丙酮的极性成正相关，酸枣中的有机成分在这三种溶剂中的溶解性和提取率与溶剂的极性有着密切的关系。3.3.2 酸枣的总酚含量 采用Folin-Ciocalteu比色法，其原理是基于(jy)Folin-Ciocalteu试剂中的钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化，自身被还原（使W6+变成W5+），生成蓝色的化合物，颜色的深浅跟多酚含量成正相关(xinggun)，因此可以通过该比色方法来对多酚进行定量测定。不同溶剂提取的酸枣中总酚含量见表2

54、从表2可知，酸枣在水中提取后总酚含量最大，甲醇次之，丙酮最少。 三种(sn zhn)有机溶剂提取的酸枣总酚含量与其提取率成正相关，水提物的总酚含量明显偏高。3.3.3酸枣的总黄酮含量 采用硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在510波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量。不同溶剂提取的酸枣中总黄酮含量见表2 表2 不同溶剂提取的酸枣的总酚酸与总黄酮含量溶剂种类总黄酮含量a总酚含量b水26.4710.00351.4740.372甲醇22.5900.66046.6860.059丙酮

55、22.0190.01830.2440.027注：a酸枣提取物中黄酮含量以mg芦丁/g酸枣果肉表示； b酸枣提取物中总酚含量以mg没食子酸/g酸枣果肉表示。 从表2可知，酸枣在水中提取后的黄酮含量最大，甲醇和丙酮含量相当。黄酮含量与提取率和溶剂的极性呈正相关，在水中提取的酸枣黄酮含量和总酚含量最高，说明水对它们的提取最有效。 从表2可知，相同溶剂提取过的酸枣酚酸含量明显高于黄酮含量，酸枣的相关抗氧化的性质可能会与酚酸的关系更大，酚酸在酸枣的抗氧化功能中可能起着更重要的作用。 从不同提取溶剂提取的酸枣的提取率、总黄酮、总酚酸含量的测定结果来看，水溶剂的提取率最高，水提取物的总黄酮、总酚酸含量最高，

56、由此可以说水可作为酸枣提取的最佳溶剂。3.3.4 酸枣不同溶剂提取物对Fe3+的还原能力 在还原能力测定(cdng)实验中，酸枣中的抗氧化剂能将铁氰化钾中的Fe3+还原成Fe2+，Fe2+进一步生成Perl普鲁士蓝，该物质(wzh)在700nm波长下有最大吸光值，因此测定700nm处吸光值的高低可以间接反映抗氧化剂还原能力的大小。表3为酸枣不同溶剂提取物对Fe3+还原能力的测定(cdng)结果。表3 酸枣不同溶剂提取物对Fe3+还原能力酸枣样品0.1ml0.2ml0.3 ml0.4 ml抗坏血酸0.7090.9431.0271.179酸枣水提物0.3630.4740.6180.701酸枣甲醇提

57、物0.2900.4170.4920.544酸枣丙酮提物0.3440.4210.5160.617注：Vc溶液的浓度为20mg/ml; 样品为2mg/ml。Yen10和 Siddhuraju,P11等人研究表明抗氧化剂的还原力与其抗氧化性之间存在联系抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的12还原力越强抗氧化性越强因此可通过测定还原力来说明抗氧化活性的大小。由表3可知，不同溶剂酸枣提取物与抗坏血酸均具有较强的还原能力，且强度与所加剂量大小呈正相关。即所加剂量越大，吸光度值越大，还原力越强。在样品浓度是对照品的十倍的条件下，抗坏血酸的还原性还较样品强，由此可知本次实验制得的提取物抗氧化性小

58、于对照品Vc的抗氧化性。由实验结果可知，水提取物的还原能力最大，丙酮提取物次之，甲醇提取物最小。这与酚酸与黄酮含量基本呈正相关。由此可以说明酸枣中起抗氧化作用的成分中，酚酸与黄酮是主要成分之一。3.3.5 酸枣提取物对Fe2+的络合能力 络合能力是评价抗氧化剂活性大小的另一项重要指标。Ferrozine试剂和Fe2+络合后生成紫色物质，当反应体系存在络合物时，该物质能够争夺Fe2+使得颜色变浅，颜色越浅，表示络合能力越强。表4 酸枣提取物对Fe2+的络合能力样品吸光值mgEDTANa2/g酸枣水提取物0.6953.265甲醇提取物0.7501.628丙酮提取物0.7950.289注：样品(yn

59、gpn)浓度均为2mg酸枣(sunzo)/ml水溶液由表4可知(k zh)，用水提取后的酸枣具有的络合能力最强，甲醇次之，丙酮最弱。在此得到的络合能力测定结果与酚酸含量和黄酮含量呈正相关，说明酸枣中酚酸和黄酮在此起到关键性的作用。3.3.6 酸枣提取物对DPPH自由基的清除DPPH是一种化学性质较为稳定的以氮为中心的自由基，不易被清除，若受试物能够清除它，则表示受试物具有较强的自由基清除能力。表5为不同溶剂提取的酸枣对DPPH自由基的清除能力测定结果表5 对DPPH自由基的清除能力测定清除率（）酸枣样品清除率（）0.60.81.01.2水提物44.156.865.369.1甲醇提物47.456

60、.165.672.0丙酮提物55.467.570.779.3注：样品浓度均为2mg酸枣提取物/ml水溶液由表5可知酸枣的这几种溶剂提取物清除50%DPPH自由基时浓度均较高，说明酸枣在这几种溶剂中的提取物对DPPH自由基均具有较强的清除能力，其中丙酮提取物清除率较高，当加入量为1.2ml时，丙酮提取物的清除率为79.3，水提取物为69.1，甲醇为72.0。3.3.7 酸枣提取物对羟基自由基的清除羟基自由基的化学性质非常活泼，可损伤蛋白质、核酸、脂质等多种生物大分子，尤其对脂质过氧化的作用最强。OH可直接作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸，引发不饱和脂肪酸过氧化反应并最终生成丙二醛（MDA）。酚类物质