组织学和胚胎学的学案

1、组织学和胚胎学的学案组织学绪论Introduction of Histology第1章一、组织学研究内容和意义1 、组织学研究内容组织学：研究机体微细结构和相关功能。研究水平：组织、细胞、亚细胞和分子细胞：是人体的形态结构、生理功能、 和生长发育的基本单位。组织：细胞群细胞外基质(extracellular matrix) 四大基本组织(basic tissue) 上皮组织(epithelial tissue) 结缔组织(connective tissue) 肌 组 织(muscular tissue) 神经组织(nerve tissue) 器官:各种基本组织按一定的规律有机地结合在一起,具有

2、一定的形态结构。系统:功能相关的器官组成系统,完成连续的生理过程.2.组织胚胎学与其他学科间的关系生理学病理学妇产科学外科学从哲学角度看：洞察人体自身的微观世界，其完美、巧妙、精细、丰富，令人叹为观止，能极大满足我们求职和视觉欣赏欲望二、组织学的研究方法和技术显微镜的发明于16世纪末的荷兰。1665年Hooke提出“细胞”，开创了用显微镜研究生物构造的先河。 透射电子显微镜(Electron Microscope EM) 最大分辩率为0.2nm. 超微结构显微镜观察常用的长度计量单位 1微米(micrometer m )=1/1000毫米(mm) 1纳米(nanometer nm)=1/100

3、0微米(m) 光学显微镜(Light Microscope)最大分辨率为0.2m .光镜结构(一)普通光镜组织标本的制备方法1. 石蜡切片术(paraffin sectioning) 取材、固定脱水、包埋切片、染色封片 甲醛 酒精复合固定剂酒精石蜡5-10mHE特殊染色 目的:使组织切片着色,便于观察. 常用HE染色苏木精(hematoxylin):碱性染料 染细胞核及细胞质内核糖体 成紫兰色。伊 红(eosin):酸性染料 染细胞质及胶原纤维成粉红色染 色染色嗜碱性(basophilia ):易被碱性染料着色嗜酸性(asidophilia):易被酸性染料着色中 性(neutrophilia)

4、:与两种染料的亲和力 都不强。亲银性，嗜银性：银染Silver staining 异染性：甲苯氨蓝染色2、其他组织切片的制作方法冰冻切片：:可保存蛋白质的结构和性质取材速冻冰冻切片染色封固铺片：疏松CT或肠系膜等涂片：体液标本：如血液、精液、脑脊液等磨片：如牙、骨等坚硬组织可磨成薄片骨磨片bone ground sectionsilver stain血涂片blood smearWright staining 铺 片Stretched preparation特殊显微镜（1）荧光显微镜:(fluorescence icroscope）紫外线为光源，紫外光激发标本中的荧光物质产生各种颜色的荧光（2）

5、相差显微镜(phase contrast microscope)观察体外培养的活细胞形态结构光细胞内不同折射率结构时, 速度和方向发生变化特殊物镜转化为光密度差异.普通光镜图像相差显微镜图像（3）激光共聚焦显微镜: (Confocal laser scanning microscope)组成:激光光源 共聚焦扫描系统电子光学系统 计算机图象分析系统.对细胞非侵入式光学断层扫描成像 (二维或三维分析).Practical arrangement of a confocal microscope. Light from a laser source hits the specimen and is

6、 reflected. A beam splitter directs the reflected light to a pinhole and a detector. 1932年Ruska;Knoll发明了电子显微镜（electron microscope)，使观察工具的分辨率由0.2m提高到0.2nm.1.透射电镜-transmission electron microscope TEM 分辩率为0.2nm固定包埋切片染色戊二醛、 树脂包埋 超薄切片 醋酸铀锇酸双重固定 （5080nm 厚） 柠檬酸铅2.扫描电镜 (scanning electron microscope SEM)(二)电

7、子显微镜术电镜图透射电镜图，浆细胞电镜扫描图扫描电镜图，血细胞(三)组织化学(histochemistry) 与细胞化学(cytochemistry) 组织化学术：应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学的原理和技术与组织学技术相结合而产生的技术，能在组织切片定位、定性、定量地显示某种物质的存在与否、以及分布状况。 细胞化学术：应用于游离细胞的样品。 1.一般组织化学 在切片上加某种试剂，与组织中的待检物质发生化学反应，在原位形成有色沉淀物。例：显示糖原或蛋白多糖的 过碘酸-雪夫氏反应(PAS反应) （periodic acid Schiff reaction) 多 糖 + HIO4多醛

8、+ Shiff试剂 （乙二醇基) (乙二醛基） 紫红色沉淀物 PAS猫小肠上皮的PAS 染色(immunocytochemistry）定义:利用抗原与抗体特异性结合的原理,检测细胞内蛋白质及膜表面受体、抗原等大分子物质的存在和分布。组织切片 标记了的抗体 2.免疫组织化学抗原抗体复合物酶标抗体铁蛋白或胶体金标记抗体荧光素标记的抗体抗原核酸分子杂交技术 是通过检测细胞内基因(DNA)的有无,及在转录水平检测基因的活性(mRNA),原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达. 利用带有标记物的已知硷基顺序的核酸探针与细胞内待测的核酸按硷基配对的原则进行特异性原位结合杂交3.原位杂交（in situ hybridization）(六)细胞培养术及组织工程细胞培养（cell cultrue)是把从机体取的得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养的技术（in vitro).组织工程（ti