微生物学课件：10微生物感染的实验室诊断

1、北京大学医学部Peking University Health Science Center 微生物感染的实验室诊断Laboratory diagnosis of microorganism infectionP157实验室诊断的意义明确患者的临床诊断选择有效的治疗措施预防疾病继续传播与流行判断患者预后实验室诊断方法分类镜下直接观察病原微生物分离、培养和鉴定病原微生物的抗原检测特异性RNA或DNA片段检测抗体和细胞免疫指征的检测样本的采集、运输、样本前期处理形态学、免疫学、生物化学、分子生物学和生物学等方法检查出病原微生物及其型别动物实验、细菌毒素检测和药物敏感性实验细菌感染的实验室诊断采集操

2、作：无菌操作 ，做好标记采集部位：组织、血、尿液、粪便、痰、脑脊液、分泌物、呕吐物、胸腹穿刺物及解剖样品等 采集时机：根据病程发展的不同阶段采集不同部位的样品 运输：应遵循安全、快捷的原则 前期处理：浓缩 标本采集和运送 形态学检查细菌的培养特征观察：颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态 显微镜检查法：形态、基本结构、染色性、排列方式、数量 非染色检查法 染色检查法负染色检查法 细菌分离培养法 临床标本细菌分离：分区划线细菌培养挑取单菌落，纯培养鉴定细菌感染的实验室诊断程序 免疫学检查 免疫沉淀反应 凝集反应 补体结合试验 免疫标记技术 生物化学检查

3、糖代谢试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 蛋白质代谢试验 硫化氢产生试验尿素分解试验碳源和氮源利用试验 枸橼酸盐利用试验 呼吸酶类试验过氧化氢酶试验氧化酶试验 分子生物学检查 G+C测定技术 核酸杂交技术 聚合酶链反应技术 质粒指纹图谱技术蛋白质芯片技术DNA芯片技术生物学检查 噬菌体裂解试验 细菌素分型技术 抗菌谱试验 动物实验及细菌毒素检测 小鼠豚鼠家兔* LD50* ID50药物敏感性试验 纸片扩散法 液体稀释法 E测定法(E test) 自动化药敏测定法 耐药基因测定法 病毒感染的实验室诊断 标本的采集和送检标本采集部位：鼻咽分泌液或痰液 、脑脊液 、粪便 、血液 标本采集时间

4、发病早期或急性期标本运送对热不稳定，装有冰块或干冰的容器内立即送检 加入青霉素、链霉素等抗生素 ，抑制细菌和真菌生长形态学检查 光学显微镜检查 包涵体（inclusion）：某些病毒感染宿主细胞后,可在细胞核或浆内出现一个或数个、呈圆形或不规则、大小不一、嗜酸性或嗜碱性的结构 电镜检查 直接电镜法 免疫电镜法 轮状病毒负染的电镜照片病毒分离和培养 动物接种小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、鸡、猴，采用鼻腔、脑内、皮下、皮内、腹腔、静脉等方式 鸡胚培养组织培养器官培养组织培养细胞培养原代细胞培养： 23代 用于诊断和疫苗制备 二倍体细胞培养：40 10代 传代细胞培养：无限传代 用于分离多种病毒，但不能

5、用于制备疫苗 绒毛尿囊膜接种（痘病毒单纯疱疹病毒）卵黄囊接种（虫媒病毒）羊膜腔接种（流感病毒初次分离）尿囊腔接种（流感病毒、腮腺炎病毒）气室病毒生长繁殖的指标与鉴定 细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)红细胞吸附 红细胞凝集 干扰作用 细胞代谢反应空斑形成单位（PFU） 细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) 培养的单层细胞接种病毒后导致细胞发生圆缩、溶解、脱落等病变的现象。 病变细胞正常细胞red bloodcell红细胞吸附virus+susceptiblecells+viral proteins expressedon the cell me

6、mbranered bloodcell红细胞凝集virus+susceptiblecells+viruses releasedfrom the cells virus A+susceptiblecellsvirus B+CPE (-)virus B+CPE (+)susceptiblecells病毒干扰作用空 斑 plaque由病毒感染细胞后在培养瓶的琼脂层上形成的一个坏死病灶空斑形成单位 PFU (plaque formation unit)每毫升空斑形成单位 病毒蛋白的检测 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫荧光技术 酶免疫技术 固相放射免疫技术 蛋白印记分析 Enzyme Immuno Assay (EIA) Ex. Sandwich immunoassayAgAb 病毒核酸的检测 核酸分子杂交技术 核酸分子扩增技术 基因芯片技术 血清学诊断 补体结合试验 中和