病原微生物及免疫学融合实验:Separation of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC)_第1页
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文档简介

1、Separation of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC)Immunoexp-2014 fall1PBMC (lymophocytes, monocytes)Ficoll-Hypaque density gradient centrifugationGravityFicoll-Hypaque1.0770.001 g/LLymophocytes, Monocytes1.070g/LGranulocytes, Erythrocytes1.092g/LFicoll-Hypaque-Diluted blood-Plasma-Lymphocyte,Mo

2、nocyte-Granulocytes, Erythrocytes-Ficoll-HypaqueCentrifugationPrincipleImmunoexp-2014 fall21.5ml venous blood + 1.5ml Hanks solutionAdd onto 2ml Ficoll-Hypaque2000 rpm, 20 minutesDraw the layer of mononuclear cellsAdd 3ml of Hanks solution1500rpm,10min Discard the supernatant Add 1ml RPMI 1640Count

3、cells under microscopeMethodsImmunoexp-2014 fall3Carefully add the diluted blood in avoid of disturbing the surface of Ficoll-Hypaque Use a horizontal centrifuge when separating PBMC with lymphocyte separation mediumComplete the whole process in the shortest time so as to decrease the number of dead cellsAttentionsImmunoexp-2014 fall4WWWW1mmCell concentration (cells/ml)= Total ce

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