国标法检测食品中大肠菌群2015技术文件(赛项规程)

1、2015 年黑龙江省高职院校“食品类专业”（国标法检测食品中大肠菌群） 学生技能大赛赛项规程二0一五年九月一、赛项名称2015 年黑龙江省高职院校“食品类专业” （国标法检测食品中大肠菌群）学生技能大赛。二、参赛对象与比赛方式（一）参赛对象参赛选手为黑龙江省高职院校食品类专业的在校学生 （三二连读与五年制高职应为 4-5 年级学生） ， 年龄 25 周岁以下 （1990年 10 月 7 日后出生 ） ； 往届省级以上 （ 含省级 ） 本赛项获三等奖以上（含三等奖）的选手不能参加本次比赛。指导教师须是同校在职专任教师。（二）比赛方式本次竞赛中每个参赛队由 1 名参赛选手组成， 每名选手独立完成现

2、场操作比赛，每所学校可报1-2 个参赛队，每名选手限1名指导教师， 1 名教师可同时指导 2 名选手。选手与指导教师的对应关系一旦确定，不得随意更改。三、比赛时间与比赛地点（一）比赛时间2015 年 10 月 17 日。（二）比赛地点黑龙江职业学院第二校区 （ 黑龙江省哈尔滨市双城区迎宾路162 号） 。四、竞赛内容与说明1、竞赛内容根据食品微生物检测的常规检测项目和社会关注热点， 选择具有代表性的检测项目 “国标法检测食品中大肠菌群” 作为操作考核内容，在国标中有两种法一大肠菌群MPN+数法和大肠菌群平板计数法， 根据本次大赛的指导思想和竞赛原则， 同时考虑到竞赛项目的可操作性，本次大赛选择

3、“大肠菌群MPN+数法”作为竞赛项目。检验程序及操作技术依照食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠菌群计数 （ GB4789.3-2010 ）进行考核评判。本项目主要考察学生在食品微生物学检验实施过程中所涉及的样品稀释液的制备、样品的接种、无菌操作、发酵结果的判断及数据处理等环节的基本操作技能， 以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。竞赛内容具体分为两个环节， 第一环节为初发酵试验， 主要包括采样、 制备样品稀释液、 样液接种； 第二环节为复发酵试验，包括初发酵结果观察判断、转接种、复发酵结果观察、出具检验报告。2、竞赛说明本赛项由一名选手独立完成整个操作过程， 并要求参赛选手在0.5

4、 个小时内完成初发酵试验（15 分种 ）和复发酵试验（15 分钟 ）的各步操作内容，如超时，将按超出时间的长短酌情扣分。另外参赛选手还应明确一点， 竞赛过程中用到的初发酵管、 初发酵结果、复发酯管、复发酯结果及MPN佥索表均由工作人员事先准备好， 参赛选手只要按照竞赛内容里规定项目依据国标要求完成各步操作。五、评分办法和评分标准1、评分办法本项竞赛评分严格按照公平、公正、公开的原则。竞赛成绩按照百分制计分。竞赛成绩的评定完全依照赛前制定的技术文件中的主要考核内容及评分标准， 根据选手实际操作表现， 由现场裁判组进行客观评判、 计分。 有关现场操作考核内容及评分标准另见文件中相关标题。在竞赛过程

5、中， 参赛选手如有不服从裁判判决、 扰乱赛场秩序、舞弊等不文明行为，由裁判长按照规定扣减相应分数，情节严重的取消竞赛资格，竞赛成绩记 0 分。2、对考评员的要求（ 1）不得少于3 人。（ 2）提前15min 到达考核现场，熟悉考核规则、评分标准。（ 3）按评分标准独立评分。不得涂改考核记录表。3、评分标准表1主要考核内容及评分标准项目考核内容分值评分细则扣分主要扣分点记 录得 分样品 的稀 释（35 分）称取25 g样品，放入盛有 225 mL生理盐水的尤由均 质袋中，用拍击式均质器 拍打1 min2 min ,制成 1:10的样品匀液。样品匀 液的pH值应在6.57.5 之间，必要时分别用1

6、mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl调节。5称量（称取方法、无 菌操作）5拍击式均质器的使 用（方法、操作熟练 程度）5进彳T pH值测试用1 mL无菌吸管吸取1:10 样品匀液1 mL沿管壁缓缓 注入9 mL生理盐水的尢菌 试管中，振摇t管或换用1支1 mL尢菌吸管反复吹 打，使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估 计，按上述操作，依次制成 十倍递增系列稀释样品匀 液。5吸管使用（打开方式、取液、倜节液向、放1夜）5稀释样品（顺序、混匀、 换管）4试管操作（开塞、管口 火菌、持法、盖塞）2酒精灯无菌区操作4操作熟练程度初发酵 试验（15 分）每个样品，选

7、才i 3个适宜的 连续稀释度的样品匀液，每 个稀释度接种3管月桂基硫 酸盐胰蛋白月东（LST）肉汤， 每管接种1mL53个稀释度的选择5接种（发酵管的数量、 接种量）5从制备样品匀液至样 品接种完毕，全过程不 超过15 min36 C 1 C 24 h2 h, 观察倒管内是否有气泡产 生，24 h 2 h产气者进行 复发酵试验，如未产气则继 续培养至48 h 2 h ,产气 者进行复发酵试验。未产气 者为大肠菌群阴性。0根据已准备好的初发 酵管样品判定结果，记 录在报告单上，此处在 原始记录及报告处进 行评分复发酵 试验（20分）用接种环从产气的LST肉汤 管中分别取培养物1环，移 种于煌绿乳

8、糖胆盐肉汤（BGLB管中10接种环的使用（持法、 灼烧火菌、冷却、取培 养物、灼烧多余培养 物）5产气管的选择5酒精灯无菌区操作36 C 1 C 48 h2 h, 观察产气情况。产气者，计 为大肠菌群阳性管。0根据已准备好的复发 酵管样品判定结果，记 录在报告单上，此处在 原始记录及报告处进 行评分大肠菌 群最可 能数（MPN 的报告按复发酵确证的大肠菌群 LST阳性管数,检索MPNa, 报告每g （mL）样品中大肠 菌群的MPN直。0结果记录在报告单上， 此处在原始记录及报 告处进行评分文明操作（10 分）实验后台面整理干净、物品 归位、器皿无破损5物品的整理归位5器皿的破损情况原始 记录及

9、报告 （20 分）观察现象与记录一致、清 楚、无涂改10观察现象的记录征得评委同意，每改1次扣0.5分报告结果规范、正确、无涂 改10结果的报告每改1次，扣1分完成 时间 （30min）共用（）分钟开始：结束：0提前，不加分不扣分 按时，不加分不扣分 超时：每超1分钟，扣 1分（最多扣10分）合计日日月月评审专家签字: 核分人签字：六、党赛规则1、选手参加考试竞赛顺序将通过抽签决定。2、参赛选手进入赛场，不允许携带任何书籍和其他纸质资 料（相关技术资料由组委会提供），不允许携带通讯工具和存储 设备。现场操作考核项目的操作规程、数据记录纸、签字笔等将 由组委会统一提供，现场提供的物品各参赛选手可

10、以根据竞赛需 要自行选择使用。3、参赛选手必须在正式比赛前 15分钟到赛场候考室报到,报到时应持本人学生证、身份证，并携带（佩戴）大赛组委会签发的参赛证、胸牌。只有等比赛正式开始后，方可进行操作。4、比赛期间，参赛选手必须严格遵守赛场纪律，不得在赛场内大声喧哗，不得作弊或弄虚作假；同时，必须严格遵守操作规程，确保设备和人身安全，并接受裁判员的监督和警示。若因选手因素造成设备故障或损坏， 无法进行比赛， 裁判长有权终止该队比赛； 若因非选手个人因素造成设备故障的， 由裁判长视具体情况做出裁决。5、在竞赛规定时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。 参赛选手欲提前结束比赛，

11、 应向现场裁判员举手示意并记录比赛终止时间， 比赛终止后， 不得再进行任何与比赛有关的操作。6、竞赛操作结束时，各参赛选手要按照大赛要求提交竞赛材料，按照现场考试要求的名字进行命名，如不符合命名规则，体现单位信息与编号信息的，该队竞赛成绩将被取消。七、竞赛技术规范（一）竞赛项目行业、职业技术标准竞赛项目的命题结合食品微生物检测职业岗位的技能需求，并参照 GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数制定。（二）赛场场地和环境1、本次竞赛在指定比赛赛场进行，操作比赛地点为黑龙江职业学院食品药品学院实训室，比赛区环境标准要求照明、 控温良好，能提供稳定的水、电。2、竞赛

12、所需试剂以及部分溶液，由组委会事先准备好，弁 标示清楚，整齐放路在每位选手的比赛用品中，其余所用试剂、 设备等（表2、3）,也按照要求，事先放路在比赛区域内，供选 手取用。表2竞赛项目所用主要设备、仪器、材料序号名称规格备注1拍击式均质器JX-05选手共用2电子天平选手共用3超净工作台选手共用4接种环每人1个5酒精灯每人1个6无菌吸管1mL每人4个7无菌试管18X 180mm每人3个8初发酵管18X 180mm每人1套9复发酵管18X 180mm4套共用10无菌均质袋每人1个1175%酉精棉球每人1瓶12pH试纸精密每人1本13吸水球专用平头小吸水球每人1个14火柴每人1盒15记号笔每人1支1

13、6嘉士利早餐饼干袋装、无夹心每人1袋17玻璃棒每人1个表3竞赛项目所用主要试剂、培养基清单序号名称数量备注1月桂基硫酸盐胰蛋白月东肉汤9 mLX 9每人一套2煌绿乳糖胆盐肉汤10 mLX 9每人一套3尤由生埋盐水含225mL的锥形瓶4尢菌 1 mol/L NaOH50mL5尢菌 1 mol/L HCl50ml九、奖励办法竞赛只设单项奖，将评出一、二、三等奖和优秀奖，获奖比 例分别为参赛人数的10% 20% 30%其余为优秀奖。获奖选手 和获省内三等以上（含三等）奖项学生的指导教师，由省教育厅 颁发相应证书。十、申诉与仲裁（一）申诉1、参赛队对不符合竞赛规定的设备、工具等材料，有失公正的评判、奖励以及对工作人员的违规行为等， 均可以提出申诉。2、中诉应在比赛结束后 1小时内提出，超过时效将不予受 理。申诉时，应按照规定的程序由参赛队领队向大赛组委会递交 书面申诉报告。报告中应对申诉事件的现象、发生的时间、涉及 到的人员、申诉依据与理由等进行充分的、实事求是的叙述。事 实依据不充分、仅凭主观臆断的申诉不予受理。 申诉报告须有中 诉的参赛选手、指导教师和领队的签名。3、大赛组委会在收到申诉报告后，应在3小时内做出是否受理申诉的答复并受理申诉。4、参赛队不得采取过激行为攻击工作人员，否