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文档简介

1、细胞遗传毒性检测 小鼠骨髓细胞染色体制备及有丝分裂指数的测定目的要求掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法.了解环磷酰胺对小鼠骨髓细胞有丝分裂指数的影响。实验原理骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。实验用品1器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等.2试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy固定液（甲醇：冰醋酸3：1;甲醇：冰醋酸1：1 ）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 3材料：小鼠实验设计将小鼠随机分成两组实验组实验前

2、24小时200mg/kg环磷酰胺实验前1-2小时0.5%秋水仙素0.1ml/只对照组实验前1-2小时0.5%秋水仙素0.1ml/只方法与步骤注射量随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 引颈处死或断头处死小鼠。取出小鼠的前肢骨和后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。加入少量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml左右室温下静置20-30分钟，进行低渗。低渗结束后，加入1mlCarnoy固

3、定液进行预固定（5分钟左右），轻轻混匀后，离心。1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液6ml，混匀后，室温固定30分钟，再次离心去上清，重复固定一次，离心后，根据沉淀的体积向沉淀中加入0.5-1ml预冷的固定液（甲醇：冰醋酸=1：1），将细胞重悬。预冷的玻片滴片后，须将片子晾干，再滴加适量Giemsa染液染色10-15分钟，弃去染液，水洗，镜检。结果显示有丝分裂指数（mitoticindex）：某一分裂组织或细胞群中，处于有丝分裂M期的细胞数占其总细胞数的百分数。 分裂相细胞数有丝分裂指数 = 细胞总数实验组（环磷酰胺）对照组有丝分裂指数平均值取秋水仙素不同剂量组染色体制片，各随机选取3-5个视野，统计各视野内的有丝分裂指数，并可对结果进行统计学分析（独立样本T检验），比较两组数据有无显著性差异。实验注意事项小鼠解剖残渣不要放入下水道。实验结束后，请将实验用小鼠及垃圾放入垃圾袋

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