HIV-HBV、梅毒实验室检测

1、HIV、HBV和梅毒的实验室检测编辑课件培训目标课程结束时，受训者应能够：理解实验室检测在诊断和监测HIV和HBV、梅毒感染的重要作用了解诊断和监测HIV和HBV、梅毒感染的不同检测方法解释检测结果描述孕产妇及配偶/伴侣的检测流程描述暴露婴儿/儿童的检测流程2编辑课件 妇幼机构 确证实验室1个 0.87%筛查实验室52个 45.6%检测点8个 7% 江西省妇幼保健机共114个，省级1个，市级12个，县级101个） 全省编辑课件一、HIV、梅毒和HBV的 实验室检测简介4编辑课件综合产前检查服务+ 检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV 检测梅毒检测HIV 检测全血细胞计数和其它检测取血样5

2、编辑课件HIV和HBV筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染HIV和HBVHIV抗体检测乙肝表面抗原（HBsAg）检测筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果6编辑课件iPMTCT筛查检测何时使用何种检测？HIVHBV检测方法HIV快速检测 和/或 ELISAHBsAg检测如果有条件，其他乙肝标记物检测检测时间第一次产检（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测第一次产检（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测7编辑课件二、HIV试验和检测8编辑课件全国艾滋病检测技术规范（2014年修订版）中的变化2009年版编辑课件2

3、014年版编辑课件2014年版编辑课件补充试验（核酸）编辑课件补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验，如蛋白免疫印迹试验（WB，原确证试验）、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。编辑课件HIV检测：抗体检测一个人感染了HIV病毒后，体内将产生特异性抗体对抗HIV病毒* 。HIV抗体通常在感染后4 6周出现，但也有时也会在感染后3个月才出现。从感染HIV病毒到出现特异的HIV抗体的一段时期称为“窗口期”。标准的HIV诊断检测* *是识别HIV抗体。注意： *与其他大多数疾病不同，HIV抗体没有保护性作用。 * 所有HIV检测工具应经过SFDA审批，并在有效期内使用。1

4、4编辑课件感染HIV后各种标志物消长变化编辑课件孕产妇艾滋病检测方法包括抗体筛查试验和补充试验。抗体筛查试验包括快速检测（RT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫试验（CLIA）、明胶颗粒凝集试验（PA）等。补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验，如蛋白免疫印迹试验（WB，原确证试验）、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。编辑课件HIV抗体检测类型17编辑课件HIV检测：病毒核酸检测这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质，并配备专门设备昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法PCR（多聚酶连反应法）检测H

5、IV DNA-PCR定性检测血液中是否含有病毒，用于诊断18月龄内婴儿是否感染HIVHIV RNA-PCR定量检测病毒载量，即血浆中的病毒数量，用于监测对抗病毒治疗的反应。18编辑课件编辑课件 HIV EIA / ELISA（酶联免疫试验）试剂编辑课件HIV筛查检测结果的含义HIV筛查检测结果“阴性(-)”：受检者没有感染HIV或者受检者已经感染了HIV，但处于窗口期：3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果“阳性(+)”：病人可能已经感染HIV但应再次重复检测21编辑课件HIV确认试验结果的含义如果筛查检测结果阳性，两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性，需要进行确认试验免疫印迹法（WB）确认

6、试验结果：阳性病人确认感染HIV阴性受检者没有感染HIV不确定结果为“不确定”受检者必须在4周后再次采血，重复前述所有步骤进行检测22编辑课件抗体检测中的问题初筛实验中的假阳性血液恶性病变自身免疫性疾病多发性胆汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接种（流感，乙肝）多发性骨髓瘤肾移植或慢性肾衰竭疟疾或丝虫病 其他 编辑课件抗体检测中的问题初筛实验中的假阴性 窗口期 免疫移植 换血输血 恶性肿瘤 免疫功能丧失（B细胞功能缺损） 其他（试剂或操作原因编辑课件中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程 在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的HIV检测流程25编辑课件产时HIV抗体检测流程中国预防艾滋

7、病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程*有关确认试验详见幻灯片1426编辑课件三、儿童HIV 检测27编辑课件HIV暴露婴儿和儿童的HIV抗体检测 不是所有HIV感染母亲所生儿童都会感染HIV，但是如果对12-18个月以内的婴儿进行HIV抗体检测，所有HIV感染母亲所生婴儿都将是HIV检测结果阳性。-即使婴儿并没有感染HIV-由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内。母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月，所以12-18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。28编辑课件未感染婴儿HIV-1抗体S/CO比值动态曲线编辑课件婴儿感染早期诊断（EID）HIV病毒检测（DNA-PCR）HIV病毒检测

8、（DNA-PCR）检测细胞内的HIV病毒，能够检测低至1 10 拷贝前病毒DNA，以及可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断（EID）30编辑课件应用DNA-PCR方法进行婴儿感染早期诊断（EID）（1） 如果可以开展HIV DNA-PCR检测，应用干血斑（DBS）在婴儿6周龄时进行PCR检测。如果PCR检测结果阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性 婴儿出生后3个月再次进行PCR检测31编辑课件应用DNA-PCR方法进行婴儿感染早期诊断（EID）（2）出生后3个月再次进行HI

9、V DNA-PCR检测如果PCR检测结果阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性 婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIV抗体检测（如有必要，在18月龄时再次进行检测）检测结果阴性的婴儿接受母乳喂养，必须在停止母乳喂养后6周再次进行PCR检测，以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染HIV。32编辑课件婴儿HIV感染早期诊断流程33编辑课件HIV暴露婴儿/儿童的HIV抗体检测所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受EID检测者，应进行HIV抗体检测。检测时间：满12月龄 和满18月龄（必要时，见HIV抗

10、体检测流程）出生后3个月EID检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。34编辑课件HIV暴露儿童HIV抗体检测流程35编辑课件四、收集、制备干血斑（DBS）操作练习36编辑课件什么是干血斑（DBS）？干血斑是直接用滤纸收集一滴全血进行干燥用于血样本的长时间储存DBS是用HIV DNA-PCR方法进行婴儿HIV感染早期诊断检测的最佳采血方法HIV DNA和HIV抗体可稳定地保存在干血斑中转运方便：无需冷藏37编辑课件如何采集干血斑血样本（1）时刻遵循“普遍防护原则”采集足跟血选择合适的采血部位，皮肤消毒（图片中阴影部位）必要时保暖足跟使用一次

11、性消毒采血针足跟置于心脏水平位或之下不要“挤”足跟38编辑课件样本类型 末梢血制备DBS抗凝静脉血制备DBS编辑课件如何采集干血斑血样本（2）1. 用消毒纱布擦掉第一滴血2. 收集此后滴出的大滴血液3. 快速、轻柔地用滤纸片的一面接触血滴4. 让血液滴到采血圈中重复步骤1-4，直到整个采血圈全部充满血液。在卡片上标注患者的编号。每个儿童用一张新纸片。收集2-4个血斑。不要：用滤纸片按压出血部位不要多次在同一个采血圈中涂抹血滴在滤纸片两面均滴入血滴40编辑课件如何采集干血斑血样本（3）采血圈充满后：避免碰触或涂抹血滴水平放置滤纸片，室温下自然晾干血样本（至少4小时）避免阳光直射，不要加热不要将多

12、张滤纸片叠放在一起，避免血滴接触其他表面一旦血样本完全干燥：放入可封闭的塑料袋中加入干燥剂和湿度指示卡干燥、阴凉保存干血斑滤纸片包装袋，直到转送到相关实验室41编辑课件五、HIV感染的实验室监测42编辑课件HIV感染的实验室监测实验室监测主要用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物是否有抗病毒治疗指征？效果监测抗病毒治疗有效吗？毒性监测抗病毒药物是否引起了其他问题？43编辑课件CD4+ T淋巴细胞是HIV病毒攻击的靶细胞CD4+ T淋巴细胞检测用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据对调整抗病毒治疗方案提供指导孕期每3个月及产后4 6周应进

13、行CD4+ T淋巴细胞检测（急性感染时可适当推迟检测，因为在急性感染期，CD4+ T淋巴细胞通常会下降）CD4+ T淋巴细胞检测44编辑课件编辑课件CD4+ T细胞绝对数的临床意义评价免疫功能减退的程度和AIDS进程指导治疗策略的制订确定预防机会感染的最佳时机监控抗逆转录病毒（ARV）治疗、细胞因子治疗和保护治疗性疫苗的疗效编辑课件艾滋病诊疗指南CD4+T淋巴细胞计数350个细胞ul时，建议定期复查，暂不予治疗；CD4+T淋巴细胞计数在200350个细胞ul时，需考虑患者CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量(如有条件检测)的变化以及患者的经济条件和依从性等综合因素后再考虑是否开始治疗。CD4+T淋

14、巴细胞200个细胞ul时，应给予抗卡氏肺孢子虫肺炎的预防性治疗。 编辑课件病毒载量测量血浆中的病毒数量病毒载量检测可用于：是抗病毒治疗失败早期、最可靠的标记物，抗病毒治疗失败的原因，如：依从性差耐药监测对抗病毒治疗的反应诊断HIV感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测病毒载量（RNA-PCR）检测48编辑课件编辑课件在HIV/AIDS中进行病毒载量检测的意义一、早期诊断和辅助诊断二、病程监控、预测疾病进程三、开始进行抗病毒治疗的指针四、评价药物的疗效（无效、耐药） 1、检测的频度应在基线后每3-4月进行1次 2、新药应在2-4周进行。病毒载量下降50%(0.3log10)才有意义 3、治疗理想的

15、反应：第4周病毒载量下降1.5-2log10, 12-16周小于500cp/ml, 16-24周小于50cp/ml编辑课件检测检测对象原因临床指导CD4+ T淋巴细胞计数所有HIV感染孕产妇基线评估是否需要抗病毒治疗孕产妇：抗病毒治疗：CD4 350个细胞/mm3预防应用抗病毒药物：CD4 350个细胞/mm3全血细胞计数（CBC）所有HIV感染孕产妇AZT可引起贫血或白细胞计数降低如果Hb100mIU/ml），婴儿有免疫保护如果HBsAg阴性和抗HBs抗体 100mIU/ml，婴儿应再次接受3剂乙肝疫苗接种56编辑课件七、妊娠期整合检测采血程序57编辑课件妊娠期整合检测HIV、梅毒和HBV的

16、采血程序检测前提供相关信息后，医务人员应：获得孕产妇及配偶（如果配偶也同时接受检测）的口头同意戴上乳胶手套，采血摘掉手套标记采血管（根据当地方案要求），填写化验单，登记患者编号和采血日期用合适的容器将血样本转送到实验室进行检测向孕产妇解释如何能够获得检测结果58编辑课件八、要点小结59编辑课件要点-HIV使用快速筛查试验诊断HIV感染。筛查检测结果阳性，进行确认试验以保证结果的准确性。HIV感染抗病毒治疗应根据：CD4+ T淋巴细胞计数检测结果，反映HIV对免疫系统的影响HIV病毒载量检测结果，反映血液中HIV病毒的数量如果有条件，应用HIV-DNA PCR检测方法诊断婴儿是否HIV感染儿童满

17、12-18月龄，HIV抗体检测方可确认儿童是否感染60编辑课件要点-HBV通过筛查HBsAg诊断HBV感染如有条件，筛查HBsAg结果阳性，可进一步检测其他HBV标记物，如乙肝二对半、乙肝三对HBsAg阳性母亲所生婴儿，出生时接受乙肝疫苗接种，应在出生后12个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测61编辑课件婴儿艾滋病感染早期诊断工作方案编辑课件编辑课件一、梅毒的实验室检测简介64编辑课件综合产前检查服务+ 检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV 检测梅毒检测HIV 检测全血细胞计数和其它检测取血样65编辑课件梅毒筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒：梅毒血清学检测筛查

18、检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果66编辑课件iPMTCT筛查检测何时使用何种检测？梅毒检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学试验（RPR或TRUST检测）梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测时间第一次产检（孕早期）或下一次产检时如有必要，孕晚期再次检测此前无检测结果，则在分娩时检测67编辑课件二、梅毒感染的检测68编辑课件梅毒早期诊断的依据之一是病原学检测，即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体： 暗视野显微镜 镀银染色镜检 梅毒诊断检测（1）69编辑课件血清学试验检测梅毒感染相关抗体非梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测非特异性抗体）

19、RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）VDRL（性病研究实验室试验）梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测特异性梅毒螺旋体抗体）TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）ELISA（酶联免疫吸附试验） POC（快速检测、一站式检测）梅毒诊断检测（2）70编辑课件梅毒血清学试验基本实验室设备检方法检测样本类型必要设备血清血浆全血RPR/TRUST水平旋转仪TPPA震荡仪ELISA酶标仪、洗板机POC检测无需特殊设备71编辑课件非梅毒螺旋体抗原血清学试验（1） 梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）非梅毒螺旋体抗体又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体随菌体和宿主细

20、胞的类脂质抗原量升高除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫学疾病72编辑课件非梅毒螺旋体抗原血清学试验（2）抗体滴度通常与疾病活动度有关。治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反应如果用同一种实验，相同试验滴度4倍变化（如从1:16下降到1:4或从1:8上升到1:32）为临床显著变化有些病人，抗体滴度可始终处于较低水平，有时可持续终生（血清固定）注意：病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法（RPR、TRUST）进行连续多次检测；RPR和TRUST方法均有效，但检测的滴度结果不能直接

21、进行比较73编辑课件非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验：快速、简便、便宜敏感性和特异性较高硬下疳后1-2周变为阳性可用于筛查样本评估对治疗的反应鉴别复燃还是再次感染74编辑课件治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度变化的临床意义一期梅毒和二期梅毒：成功治疗，抗体滴度应3个月后下降2倍6个月后下降4倍一期梅毒：1年后抗体滴度转阴二期梅毒：2年后抗体滴度转阴晚期梅毒：治疗后抗体滴度缓慢下降50%的病人2年后抗体滴度仍为阳性75编辑课件确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验质量的关键点按照标准操作程序（SOP）进行操作推荐使用评价特性较好的试剂*按照统一的标准报告结果开展实验室室内

22、质控（IQC）和参加室间能力验证（PT）* 由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供76编辑课件梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒螺旋体抗原特异性抗体可用于确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，排除其假阳性阳性结果可持续存在，即使治疗后仍可为阳性。* 梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关，不能用于鉴别现症感染还是既往感染，也不能用于判断疗效* 一期梅毒治疗病人中，15%-25%可在2-3年后转为血清学阴性77编辑课件梅毒诊断方法学比较一期梅毒二期梅毒三期梅毒敏感性特异性敏感性特异性敏感性特异性非特异性抗体（RPR、TRUST)74-87%96-99%10

23、0%96-99%34-94%96-99%特异性抗体(TPPA、ELISA)70-100%94-100%100%94-100%95-98%94-100%编辑课件妊娠期梅毒检测所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以及 如果在分娩前/临产时没有筛查检测结果，在分娩时检测筛查检测可应用以下任何一类方法：非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或 梅毒螺旋体抗原血清学试验所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另外一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗79编辑课件孕产妇梅毒检测流程非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒

24、螺旋体抗原血清学试验孕产妇治疗后，随访监测非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验每3个月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验如果需要进行治疗报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：两种检测均阳性治疗病人报告： 梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阳性反应阴性反应阴性反应阳性反应阳性反应或阴性反应阳性反应阴性反应阳性反应80编辑课件HIV感染病人的梅毒血清学试验一些HIV感染病人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不断变动如

25、果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑病灶活检 或暗视野显微镜检查注意：对于大多数HIV感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法81编辑课件梅毒血清学检测结果的解释非梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试验临床参考意义+ -RPR假阳性 考虑其他医学状况*+ +现症梅毒- +既往感染或极早期梅毒- -排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期*包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。82编辑课件三、暴露婴儿的梅毒检测83编辑课件梅毒暴露婴儿先天梅毒检测母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgG抗体可通过胎盘，所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释婴儿需要

26、接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）84编辑课件先天梅毒的诊断标准梅毒暴露婴儿具有以下条件之一： 任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（+）梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST监测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升满18月龄后，梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测阳性* IgM抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒，但我国尚不能广泛开展85编辑课件梅毒暴露婴儿的评估梅毒暴露婴儿：婴儿RPR检测婴儿RPR检测不能使用脐带血，因其易被母体血液污染，从而出现假阳性结果。先天梅毒临床表现： 非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、末端肢体假