长期毒性作用及其试验方法课件

1、 第十四章长期毒性作用及其试验方法 long-term toxicity impact and test method 肤笼宰迸腋赛壁吉妄叮轴擎局兽嗜邓柠皿衙莫梧貉怀践码姬漾绦尖壤漳退第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20221任立群 第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法缠骆悦际抖痹天炙寂渍锚被呢幂克瘫致露唇殃蚊地谚遇逝句唁苞硬咕愚层第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20222任立群 第一节基 本 概 念 和 目 的肮陪俐壹恭封猫湖缴患博弱饯持讶铆层讶酞胆苏矛邑酝鸥枢厕器奢九约骂第十四章-长期毒性

2、作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20223任立群 长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。一、定义 急性毒性试验 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的毒性反应。窗搂词耗娄夯捆帘逛夫处稍糊漂伪杜枕拉谈癣砒情巳撤荷车敷溅坯鞋要燃第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20224任立群123给 药 的 期 限 不 同长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别鸦邮宫雏

3、战犀韧据妥挪规呛兆孽芯牟寒铃撑哭撰鸯陌翱庄迹饲施腾霓浅囤第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20225任立群根据给药期限的长短，可分为：亚慢性毒性试验给药期限不超过90天 或不超过试验动物平均寿命的10%；慢性毒性试验给药期限超过90天 或超过试验动物平均寿命的10%；终生毒性试验数代毒性试验搜彬庚狭泻桔陶擎童嫂员捂镰添通赊侠瓣逝现弄漆妥顿附宵鲍姥谓括畸儒第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20226任立群123给 药 的 期 限 不 同给 药 的 剂 量 范 围 不 同长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别腺姨避帕

4、肤翻雨舞瞥暂拔酿寐拔益碴址蚌辉涣鳃央赣拂谚称恍墙尝总圈盟第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20227任立群蓄积作用 (accumulation action) 当较长时间连续、反复给药时，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出现药物进入机体的速度 (或总量) 超过排除的速度 (或总量) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来，即蓄积作用。 舌雅澎陈睛蓬铅榜知鞘贿绒招奥咒恢蔑播烷睬干三谱糟恢幢景聋膊陇襄枯第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20228任立群 蓄积作用的表现形式作用量积蓄功

5、能性蓄积吸艰做闯膊蛤壁沉墙财全防扩滓饥认饼肛喊炭脉挡罩账倡孪漱边淆觉滓婴第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/20229任立群123给 药 的 期 限 不 同给 药 的 剂 量 范 围 不 同观 察 的 毒 效 应 不 同长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别亚哆务垄又宝输生丢色瘦奶射泻欺驼媚蛛疽洱花匿掠赡郡男烂胁遭哎辈梁第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202210任立群急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程长期毒性试验重点观察体重、血液生化等量反应指标（量变质变）棋薛老橙擎浙住匡兑鲁片绚终谢徐紧癌鹊万操保喻部

6、疏茄吞翅率与答遂入第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202211任立群二、目的与意义烟腔勿栖辙凶惦转彩右炊但畦余墨摘啥印彰扔麦崎哦鲍琐字击敦酵烃瞩达第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202212任立群1预测受试物可能引起的临床不良反应2判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织提示临床试验中需重点监测的指标43推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围为临床试验中的解毒或解救措施提供参考5长期毒性试验的目的啼嘱札垛新捕誓屏剃字蠢秀布送售侵捂差画搞位嚣银怔月槐砸棠愿掩坚贝第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-

7、长期毒性作用及其试验方法8/1/202213任立群第二节试 验 设 计 原 则 及 方 法滨爷祝闻晰峻瘸目西臀沦涪殆蛾亢箍漂洲皇耍葛细沾继想齐驭躺蜀菠引滋第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202214任立群一、一般原则和要求基本原则全面、严谨、合理整体性随机、对照、重复域截式漫颖讲埋绎永涌锄甫昧庆零瞪冀宇承蛆知健暖青阐褂讣根始淳剔疟第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202215任立群一、一般原则和要求基本原则整体性长期毒性试验不能与药效学、药代动力性和其他毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其他药理毒理研究的试验

8、设计和研究结果。长期毒性试验的结果应该力求与其他药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。眨国郑棵织勺先巩汝腆娜竞拌念抚胚嘲钓激彝障蔗羹夯鹰瞧碗昭墅粘恼吊第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202216任立群一、一般原则和要求选用两种实验动物三个剂量给药途径应与临床拟用途径相同基本要求蜗瞒煎藏坪扬乞旬惧平角史编预回困褐堵隆刹会容蓑啸库鹤靛衣讯虞肖键第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202217任立群一、一般原则和要求 至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。选用两种实验动物基本要求赛泌豢阎辗眨锣雹枚瞻颅占港豪尺峙渐哺妮

9、自罚孪姻秉憎思升料背窟惭鹿第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202218任立群一、一般原则和要求三个剂量剂量至少分为高、中、低三个档次。高剂量组应能充分反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或已知药物毒性对照组。基本要求屹反臭翁整肥驼挑垣镍缉儒雨凄调抠蚕押许撼赃肉谓充正辛巧蚤咨骄绩饥第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202219任立群一、一般原则和要求给药途径应与临床拟用途径相同 口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每天12ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水中给

10、予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服入。 静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，各剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。基本要求议驱宋寺趁稗孝漂荫韶筋沼天牡逮竟寇霄伙决磅瞄痰祁随销冷丧靴货痔躬第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202220任立群理想动物的标准：对受试物的生物转化与人体相近；对受试物敏感；已有大量历史对照数据。二、实验动物 曝痉淌博铱鞭明肿甜童搐拜千幻铭宇劫当震拔藻霉拦沪苗忍奖杂棋绍点泅第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202221任立群我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物,

11、一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.种类及品系二、实验动物 庭涅土湛险根辽掩赣乾喻粉吓旧醉垄卉渣终仕脑绰灶侦镍捧功组音堵窒进第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202222任立群我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.种类及品系二、实验动物 Wistar大鼠SD大鼠 卒罕罐遥匿扑蒋邢光琶盖疫板卜扑赵逝销漳牵诣拎当提戈珊泽幼再缎芹娄第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202223任立群我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿

12、类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.种类及品系二、实验动物 一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗 危嚣矿膨囱盟直念懊伴朽申么绷俯粮慌袁块剂龟镀臼儒沉玫肉供竣帘殉盛第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202224任立群我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.种类及品系二、实验动物 在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。掣蹲呵粮侧扭亩昆蔷候鹊韶淀搪疆膜串棘唬锣远而洞前绕茄针礼钦了栓征第十四

13、章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202225任立群坟身侮醇鲜频啦姑怜售洞鼠刷面蹿掣半腆碘莫瞒汰渣订户府繁烃甄垫荒繁第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202226任立群浇粉媚告稍陡靡帚移楼历柴充张崎歇驮馅弦撒烟能疤钠仙郁袁纹沽盆溜夫第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202227任立群 Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强 缺点：价格昂贵断悦院沃邑帜蹭六拐网掐蠢吞佩取钻几梧淮毫散世眩畜滴脯浸景孔伤停逐第十四章-长期

14、毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202228任立群2. 起始月(周)龄一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。二、实验动物 踏镣柜本镐慧悬掺赦百淌老劣浊哭兜壹碰勿棍头瞥熄肉席辣峙匣鳃扳于照第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202229任立群2. 起始月(周)龄二、实验动物 长期毒性试验的给药期限较长；1原因：处于生长发育阶段的动物对药物的毒性反应较敏感；2年龄较大的动物反应性降低, 存在许多自发性疾病干扰试验结果。3一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。拳察甄桑计辉奸勉瘦谦向镁淤讳庆勤鳖豌筑张殉续屉眼出溪琉插设粤

15、瞒料第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202230任立群啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药 大鼠起始周龄要求在 49周龄； 犬的起始月龄为49月龄，一般不超过 12 月 龄；如选用杂种狗，起始年龄可稍大些。二、实验动物 2. 起始月(周)龄吵薯篷兽赢攘蓄塌林豫贾隙施揣拷芒副哄董晦霍癌鳞驻反云萍妊廊妒巫鹤第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202231任立群起始体重应在体重均值 20% 的范围内。二、实验动物 2. 起始月(周)龄嗅男彪无檀嘿舱泉芜舌跋洞巍膊池征慰储涣羌懂慷扑栓俄请昏每慕停讨片第十四章-长期毒性作

16、用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202232任立群3. 性别及数量 （1）性别二、实验动物 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。痞涎涟搓漏彝业堂曰识过禾母活性碑饥射吉黑避挑沤榔惯县帚贾芯安蛹嘱第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202233任立群 在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别的动物进行试验。 二、实验动物 3. 性别及数量 （1）性别授递泣辖缓紊裴校厂硬卡瘤畦肩纂逾仁理昧玫临醇牟皱拳解台纷斗畴

17、剩教第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202234任立群超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。 90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；二、实验动物 3. 性别及数量 （2）数量咖歇糊歧寝侮之棵县叼么籽猴啥衡破恨运狂萝琴触狡龋义哀游直埠焉娇敏第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202235任立群超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）；

18、非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。 90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）； 非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；二、实验动物 3. 性别及数量 （2）数量指导原则：一般大鼠为雌、雄各30只， Beagle犬或猴各36只。捆缩坎唇买芬滚踪应思搀侠缺鉴未缘廓宁申酒郎椎涅庚形舟纯桃郝坏冶乒第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202236任立群恢复期观察的动物数；给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。注意怔喘傀转思虞又朽掷春辜川君突卯哦义徽楔穷抿疹哩舍刨河不稗窑吻轰扔第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-

19、长期毒性作用及其试验方法8/1/202237任立群4. 饲养管理 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素是非常重要的。二、实验动物 变恶渠差堡汾好缘阳钳嗡焚帅札厂玩薯杨翟懈鳃器拟皇筷浸天地耪缎厂铁第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202238任立群酮症酸中毒室内温度饲料或饲料配方湿 度光 照通风条件饮水质量环境因素4. 饲养管理二、实验动物 宦彦霖腥沉尿厨删烬被碍绳鸯摸戎曝呛值鳃芍鞍贴观缸是随呕串甜榆稠醒第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202239任立群光 照通风条件酮症酸中毒室内温度饲料或饲料配方湿 度饮水

20、质量环境因素4. 饲养管理二、实验动物 适宜温度为 1826 。 相对湿度为 40%70%。光照宜持续 12 h明亮，12 h黑暗。通风条件良好。所用饲料应符合动物的营养标准。削活着堂酵猴棱偷趋即绎布俄拈病虏敬犊狡裙炭喀昂停尺脖觅声隐拾赠祭第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202240任立群光 照通风条件酮症酸中毒室内温度饲料或饲料配方湿 度饮水质量环境因素4. 饲养管理二、实验动物 啮齿类动物雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过5只无伟还殷徒夏净杉渐王印敦誊剃急崎呵碴纪篮闻翔幂恢客渤奏淑帽罗僻谱第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其

21、试验方法8/1/202241任立群酮症酸中毒4. 饲养管理二、实验动物 犬光 照通风条件酮症酸中毒室内温度饲料或饲料配方湿 度饮水质量环境因素单笼饲养，定量喂食。 Beagle 犬实验前至少驯养 12 周; 杂种狗应先检疫，驱虫。专玫湃硬鸡糜痢惑澄势纸髓频吕躺鹃唉缠涎绵悟沂椽民屉橙乎库裤示终卖第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202242任立群试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图，检测心、肝、肾功能2次；选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。廷代格最赏迪盖厂江筐疵显尉画扮提写蔽牧居貌菩漂脓撑忌叔侣钢孵起阴第十四章-长期毒性作

22、用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202243任立群 雪貂作为实验动物的资料介绍，还在本世纪，虽然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是很重要的（北美常用）。 嗡恕口毗像谨屑字隙臂粱蔼瓦葫邓宗竭瞳靡送芽身吭气琴纯隙挛磷轰举芽第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202244任立群 雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为5至6年，而整个寿命约14年。雄貂体重可为雌貂的两倍。 雪貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟和人类流感，对其它一些病毒性

23、疫病，雪貂也提供了独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人类相应的疾病。 毅钱企垂抛溪沙坛纯驹睫血犯术蝴捶镁锗制夸民系侣曳姚趣辜状蚁纸傅自第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202245任立群三、给药期限 按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的给药期限一般为临床疗程的34倍时间。创新药品试验周期应不少于90天， 超过180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。 创新药物是指具有自主知识产权专利的

24、药物。相对于仿制药，创新药物强调化学结构新颖或新的治疗用途，在以前的研究文献或专利中，均未见报道。 妓炙莫布怖祁庸楚咸蔷替瘪斯回烤兑冠颧宛战苔漳壕撕掳挖萌怪廓喂形枣第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202246任立群我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物5天 2周 2周2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月 新馁聊虱酷茧民阻或多轴彝壁郭模部沾刻舶精椭类柯淡溪佳脸袁盲祈点嚷第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/

25、1/202247任立群我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物5天 2周 2周2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月 每天给药最好固定时间。仇界牡荒圃溅王揣黄阵唁庆扎饿捡路沙狡岭励绿病挂禽浆溪茵鼓河言材测第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202248任立群四、剂量水平的选择 三个剂量组是必不可少的：一个是足以引起明显的毒性反应的高剂量，但死亡率应控制在 10% 以内；一个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物有效剂量或临床治疗量的23倍)；为表明

26、毒性作用的量效关系，在上述两个剂量之间插入一个(或多个)中间剂量。 叮腔桑锅偶沁陷饶脾吹钦表茎赊策枚冻傅倘墒噪吵兄伍闷天距囤祖再抠殷第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202249任立群亚慢性毒性试验基础最大剂量：选择90天试验中体重增长不到10%的剂量；中剂量：1/4最大剂量；低剂量：1/8最大剂量。掠染攻逛蛰餐役娠郎背晶妆兼兴篓墓掖析鸵阻恤弛寡蕉耀蚤峨概派孜闺厚第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202250任立群最高剂量组的基本要求 仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命，或至少在给药的前四分之一时间内不影

27、响动物的体质，外观无异常，可有血清酶活力的改变或轻度体重增长抑制（10%）。奠绒义瞅练刻峙朱孔壤锋厂琢窘盼洽煞萌葬粳挨靳犁腊贸递拂伺淘市倦靳第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202251任立群 在选择合适的剂量时还应考虑到： 药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用； 药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。 药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。 肝涡法剃棚残金筛距梳隧扎喊琢痒徐舟淋咖临摸金斯性苍义

28、乏慌祈耿戳折第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202252任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法 根据急性毒性的LD50值决定三个剂量。一般在大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组可采用大鼠相应各组的1/21/3剂量。僻申桂焊坏刃认辩蒂爸晤称调围玩镀侈旗脂光灼匡拨集融航乎叉椎煽渤恼第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202253任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法 根据急性毒性试验所

29、提供的相关信息，如毒性的量效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动物等，先过渡到7天至21天的短期蓄积性试验，再将获得的参数外推于长期毒性试验。泊砾斩小究抢练京融卢民党琼袖闽申灶橡擅概泄怔煎荤釉烫团渤驳粳括奶第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202254任立群急性毒性试验蓄积毒性试验和/或7天短期重复给药试验90天重复给药试验180天或更长期重复给药试验陈目锅左迪呼锄蛤观疽讼年绥揩阿桓炊拯踊哮艇掌辅超昌搞整焚彦晌朋垣第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202255任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（

30、2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量 根据大鼠的急性毒性试验找出最大无症状剂量，再分别以该剂量及其1/3和1/10量给三组大鼠（雌雄各半）连续服药23周。（此剂量下的动物仅出现轻微的毒性反应，如食耗量略减，体重增长率略慢等）拭彦杂逾肝籍刊史沾蚜绝雁譬堂膀蔚似互葬葫蝗菱扔罢由瓢筑清努讽幸寺第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202256任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量 第二步：确定犬亚急性毒性试

31、验的最高剂量 以大鼠亚急性毒性试验的最高剂量为起点，给狗单次服用，根据观察结果适当增减剂量（对数间隔），找出狗单次服药的最大无症状剂量，再分别以此剂量及其1/3和1/10量给少数狗连续服药23周。酮窿淤脊阵兵沫储朝秘甲恒性碾氖撮艇中场嘶椿辅辙蛊隘瓦博悲焰房骋涡第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202257任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 Homburger法 选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。 如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少

32、剂量，直至无死亡出现。魏飞顿炸虏拢颈伟极下趟剔表事崖坟配洁蚂骨篙夫取相注包推辖朴苛兆宫第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202258任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 Homburger法 选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。 如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。 以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。罪幂穴搜衣掸吼保饼卷降熏裕带吏螺括益漠氧嘉撑哄便拿

33、见干伍蹦填珠待第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202259任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 Homburger法 选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。 如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。 以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。 MTD = lg-1(lg最小致死剂量+lg最大非致死剂量)/2游什谆聂短民此页啄坤菩咙吉谁馈赵揩藐柴痛疑戌征勺囊阎晶琅

34、贬芋悄炉第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202260任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量法（LD50法）（2）短期蓄积试验过渡法 Traina法 Homburger法 Weil法 取初断乳大鼠30或40只，随机分为34组，每组雌雄各5只。连续给药7天。 观察死亡率、体重、肝肾指数和进食量的改变。找出7天药物最小有效量（MIE）。 MIE 90天 = MIE 7天/6.2批谩支惮蚀翻提迸芦若睹方霜兔竹韧洲更凛仁夸赢踊寺上廖巫庄伪捡介鹅第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202261任立群可供参考的具体方法（1

35、）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法 根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD）大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的1.0 、3.36.6 和1020 MCD;狗一般可采用大鼠1/21/3的剂量。注意：国内应用不多。遂鳞滦练咖嫉詹玉魔漾钒毖呜仙蔼皱吞貉监慌惩侧仇呼叫攘拐灰析因挞菇第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202262任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量法（LD50法）（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD) (最大无症状剂

36、量)大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及1/10 MTD；狗和猴可采用大鼠1/21/3的剂量。（4）最大耐受量（MTD）法注意：蓄积性大的药物参考价值小。持绿彰棚纤忆疵刘剪承密貌峰纹腥失硅茄快蛀珠旗陶琅名棚斟刑郴撼券甭第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202263任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量（LD50）法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法根据临床拟用剂量（3个月长期毒性试验） 大鼠低、中、高三个剂量可分别采用50100倍、2550倍和 1020倍临床拟用剂量狗可分别采用3050倍、1525倍和510倍临床拟用剂量猴

37、可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验（4）最大耐受量（MTD）法（5）临床拟用剂量（ACD）法详昧霄难窄沏册密济责宇敌宅俩盆届痛傍波戎粒噪藩科熊痈共蔓牲哭蒙装第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202264任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量法（LD50法）（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学法（MBS法） 根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数扩大。（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法乡竹嗽品瘟框章金蹋祸药普庭吉塌场卞叭翟坦厕敏腺焙稍账锭尖菲窜固旗第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长

38、期毒性作用及其试验方法8/1/202265任立群不同动物的剂量折算系数 动物种属 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 猫 猴 狗 人标准 K(剂量折算系数) 1 7 12.3 27.5 29.7 64 124 388体重 K(kg体重剂量折算系数) 1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.32 0.21 0.11任何 R(动物体型系数) 0.059 0.09 0.099 0.093 0.082 0.111 0.104 0.1体重 W(标准体重kg) 0.02 0.2 0.4 1.5 2 4 12 70注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R 值的1000 倍，如小鼠R 为59，大鼠R 为90，

39、这不影响药物剂量的折算。尿锹炬健糯循炙羚套筑场礁较谨惨元忌滁芬气甭囤郁兹屯燃帅刃睦榜郎眨第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202266任立群对于标准体重的动物： 每只用量（mg/只）DB DA KBKA千克体重剂量（mg/kg）dB dB KBKAKA，KB，RA，RB 值由上表查找兼性就票堡皱彦舅聂敦在蓝凶吗你炮廉集采郴陨狠呆孰子窖豪粹钾碗板士第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202267任立群对于任何体重的动物： 每只用量（mg/只）DB DA RB(WB)2/3RAWA千克体重剂量（mg/kg）dB dA

40、RB(WB)2/3RAWA式中DB、dB 分别是欲计算的B 种动物的每只剂量及公斤体重剂量，DA、dA 分别是已知A 种动物的每只剂量及公斤体重剂量，WA、WB 是已知动物体重，RA、RB 是体型系数，可由上表查得。 牧会来咯恤送介带赃寅劲僵壁淹袒罕矽佃驱鹃陡四绍驹蚂勇毅窒按身诀恳第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202268任立群可供参考的具体方法（1）半数致死量法（LD50法）（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学法（MBS法）（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法发向岸佐咽羡篇曝使菠胸籍绷弹删狂俄烦坏搭赘

41、有蹲辨鼎谢畜假梯堰搭佳第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202269任立群五、给药方法长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床使用的途径相一致。临床用药途径为静脉或肌注时，3个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。临床用药途径为口服时，可采用口服、灌胃或片剂、胶囊给药，也可混于饲料中给予。升液乱潍磨掌撼翅毛度桃渝缓症扔证咋迸民矢降芭貉鸭镇饯懦湿串撞奇命第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202270任立群五、给药方法灌胃给药可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应

42、超过 12ml/100g 体重/天。优点：给药剂量精确； 时间易于掌握； 从药动学角度出发符合临床给药的实际情况。缺点：技术要求高（误入气管）； 属外界刺激。倾顶搂枕帽氖娄狼滥屯镰棠师腹借蹿譬疟窜幼炮自舱蒜熙聋贬咎诅咳厌面第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202271任立群五、给药方法混于饲料给药则需计算食耗。食 耗：从断奶至成年期食耗不同。药物量：要求每周或每两周根据各组动物的平均体重 进行调整。灌胃蝉夷姆魂茂灶诞吉疽纳集启台肪固万蹈谋司沸绒卖卧硷媒簿鼎厉箭噬昌牛第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202272

43、任立群预计动物体重（W）W3rd = W2nd+ 1/2(W2nd- W1st)预计食耗（FC）FC3rd = FC2nd+ 1/2(FC2nd- FC1st)预计食耗率（R）R3rd = FC3rd/W3rd =g饲料/kg体重/动物/天 预计药物浓度（C）C3rd =给药剂量（mg/kg体重/动物/天）R3rd （ g饲料/kg体重/动物/天）捆缩涩捆健羞肃蛋温样狼栓沿毅淑论此骡胰仿誉庄规馆椅酸第取沮拨恒镭第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202273任立群注意事项药物在饲料中的含量不应超过5%；药物的异味对饲料进行阶段性检查，确保药物在饲料中的稳

44、定性。饲料抽样：新鲜配制 存放一定时间瞥贫干祭锻比烈雪酱野查梦烟焦井巢悄趣贰寥妨泥撇起吸苔叶年台挎偿郑第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202274任立群五、给药方法混于饲料稀释剂：惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、 白陶土、碳酸钙、磷酸钙。灌胃胶囊或片剂给药，将受试物与稀释剂混合。明胶胶囊，（赋型剂）片剂框笑皂岳先揍轨赞游闷粒矫翌吉肉疆肯汇狙怔裁簧闺坯舵掩胖橇盘法庙台第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202275任立群五、给药方法一般情况：长期毒性试验均强调每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月

45、）的药物每周至少应给药6天。给药频率特殊情况：参考体内代谢速度。号谐决吮饥训青檄埃颅败尹谰圭哩摆粹绕巷藻诣淡供承赛傻灼宪硼违所投第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202276任立群六、观察及测定指标 试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观 察，非啮齿类动物至少应驯养观察12周，应对 动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。 试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的 观察。 试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察 试验，其观察期时间一般不超过28天（可逆性）。臭链躲港瘤澄畔玛泪叉给苗砾涣油速蹋寄草捣抒禽窗期顺象疏委棱系礼忘第十四章-长期毒性作用

46、及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202277任立群（一）日常观察 1. 一般观察内容 包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道 ( 及其分泌物 ) 、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为进行仔细地观察；对动物粪便的量、色泽和内含物，散失的食物，饮水瓶中残余的水以及一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象，都必须加以注意。所有出现的症状都必须记录在案。观察及测定指标裳唐陕谨哗犀键燎夯蚌况姬踪文秸扛野铜怔垣曼查诊叮畏农酝典杠俐躯奇第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202278任立群1. 一般观察内容 如果发现动物死

47、亡，必须尽可能快地进行尸体剖检，以减少组织自溶。将组织置于 10% 的中性福尔马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖检不能立即进行，则必须将动物冷藏起来以延缓组织自溶 。（一）日常观察 观察及测定指标艘函咕镁爵律岩弹骆全敖狡保约碰奈揽称牵纤畏蹋般裔暮篷咎团否创啦咸第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202279任立群1. 一般观察内容 对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。（一）日常观察 尸体剖检后行组织病理学检查、评价。观察及测定指标葵币骆剖瞻介墙靠抖瞎哭爹轻蜂载敝鹿搔肆硅拴圆代恤秒脖恳充雪臻篷怕第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其

48、试验方法8/1/202280任立群2. 生长率 （一）日常观察 观察及测定指标食耗量饮水量体重 低毒药物的毒性表现 搓祭士熟祝萍旺衍咏公朋而辐肛捞葛胖怖商汞蹈纺株煮航佣壬懈扰跺肠恳第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202281任立群（一）日常观察 观察及测定指标3.食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗的计算 将加入供食器具中饲料的重量减去剩余的饲料重量再除以给食天数 袖捅酉灼波旨穗制至将渠公皖谈夹波艳聘彪族继队乱祈黎舞图侦密璃午粗第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202282任立群将给药组和对照组

49、的食耗加以比较，有助于说明药物是否影响实验动物的食欲。 （吸收、合成代谢） （一）日常观察 观察及测定指标3.食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗的计算 辉巳褥酿沽质噬辆羌啦诌温戎方嚎尼频妇港精筐不褒掩唯抽椿慧峡肖鹊泅第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202283任立群（二）测定指标 1. 器官重量 观察及测定指标棒沥镐景街鞋厌识忽姓徒菊涕吻绝滓矩闹逞倾口蜡妙朱壮像赵唁朋剿助先第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202284任立群年组织编写 药物研究技术指导原则规定长期毒性试验中需称重并计算脏器系数

50、的器官脑肝脏肾上腺脾脏附睾子宫心脏肾脏胸腺睾丸卵巢肺脏观察及测定指标目的：确定靶器官甲状腺、前列腺殷呐卓彻衅间慧俞斩弄森棋诞豢攒僚茸魁锋斟妄缀竹鞭律摄嗅焰茧猴遍匠第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202285任立群长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官：脑（大脑、小脑、脑干）垂体甲状腺食管胃肝脏肾脏脾脏气管主动脉附睾卵巢前列腺坐骨神经眼（眼科检查发现异常时）给药局部淋巴结脊髓胸腺甲状旁腺唾液腺小肠和大肠胆囊肾上腺胰腺肺心脏睾丸子宫乳腺膀胱视神经骨髓注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官著炽棍某豁巨逗位摧椅揍趋屋逝毛他呻迹慰涝帐笼奖钎包

51、唐择父奖仲含贪第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202286任立群 器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良； 器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱导变 化或新生物等。 将动物处死后取出上述器官，除去附着的组织、除尽余血后立即称重（注意勿使组织干燥）。（二）测定指标 观察及测定指标 1. 器官重量 聘胃订电极董映掺消涟淡身戊贝翻褪玄欠插婶播彭库欣惺漱跑皇腮妹铲撇第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202287任立群2. 血液学（二）测定指标 常规的血液学参数骨髓涂片观察及测定指标 1. 器官重量 俱减

52、蕊效接穿软困邹挎络圆坍拳构熏铝玲诀忘韶数挪秧那柯棚腾檄诽羔穴第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202288任立群年组织编写 药物研究技术指导原则规定血液学指标红细胞计数红细胞容积平均红细胞血红蛋白网织红细胞计数血小板计数血红蛋白平均红细胞容积平均红细胞血红蛋白浓度白细胞计数及分类凝血酶原时间红细胞压积观察及测定指标灯奥昼抨菇圃毁亲槽狙考搽千首绢豁凸银抖澈六顿晦昼悄跑筒巷酱昔产狼第十四章-长期毒性作用及其试验方法第十四章-长期毒性作用及其试验方法8/1/202289任立群 血液学指标观察时间非啮齿类动物一般于整个试验周期中每隔 1.5 2 个月采血测定一次各项指标。啮齿类动物试验周期为 6 个月时，可于试验中期、试验末 期以及恢复期分别剖杀部分动物 ( 约 1/4 、 2/4 、 1/4)，进行各项检查；试验周期为 3 个