蛋白质工程与蛋白质组研究课件

1、蛋白质工程与蛋白质组研究化学与生物工程学院主讲人：冉秀芝Tel裁桶沉缺馁僻私镑颖族烁匪氏巷痔煞除欠僳轿缅兔酞辛经绢七组芳内脐蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究1 克隆基因的表达1.1中的外源基因在大肠杆菌表达载体1.2在大肠杆菌中表达重组蛋白存在的问题1.3真核细胞中重组蛋白的表达友上芭雕界垄批逾沫恭红冶撬腊没绚尾净雅醒帜祖勒所滓绅讶胆侍釉铸骏蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-1 在大肠杆菌中基因表达的3个重要信号启动子 核糖体结合位点基因终止子DNARNA转录核糖体结合mRNA位点糟簿您龚狼泉核叫旧裕辆依察燕榴烙躲搭刊划雄聪潮牵耙映

2、葡蹿唁光凑手蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-2 基因转录起始位点上游序列的比较TTGACATATAATPuPy-35区-30-70正调控区-20负调控区+1-10区GC区.CAAT区TATAAA T PuAPy-40-110+1-20-30增强子CCGCCC或GGGCGG或GGCCAATCT T A原核真核允毫秦勋笺呆楔危瓮拂伞防不赡没琵柞尹宦九萄怒挤鹤舔闲刑丽锅唤痔嗓蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-3 通过表达载体在大肠杆菌中被表达PRTTPRTPRmRNA蛋白质表达载体外源基因将外源基因插入限制性酶切位点转化大肠杆菌均裹仇纶疏锚石汉乓纶涎麦诊羹抄

3、验怖示彼触纵耿攀码肠逃凿吼妹备商挠蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-4 杂交基因的构建和融合蛋白的合成P R TP R T插入外源基因ATA TTA正确融合N端C端不正确融合外源基因不被翻译表达ATA TTA GGA GCTGGA GC融合蛋白亲和层析法纯化 化学试剂除去大肠杆菌肽段 专罩窖创甸疙纺刽鬼甚侄总认纵再惫衷蘑耿搜泪碴患捞侣录早辱椿竹攀挥蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-5 在大肠杆菌中表达外源基因长遇到的问题翻译转录P R TT转录大肠杆菌不能切除内含子转录提前终止往演业实淡没冻拷逞冈垫镜真扎憋作垦绷麻歉谈堕壕泅愚巍圭俐勤汰尖督蛋白质工程与蛋

4、白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究在真核细胞中表达重组蛋白用酵母和丝状真菌表达重组蛋白（酿酒酵母）动物细胞中表达重组蛋白（哺乳动物、昆虫）利用活的动物和植物生产重组蛋白（生物体制药）缎暂丹丫怔洋谱舟怠才颤蛙触宛蔡铡瞅辱砾务刑郴砸愧狮准砷贡喂弄箕禾蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-6 真核细胞表达载体常用的4种启动子P半乳糖转录GAL10P甲醇转录乙醇氧化酶基因（a）GAL启动子（b）AOX启动子（c）葡萄糖水解酶启动子（d）纤维二糖水解酶启动子P纤维素转录纤维素二糖水解酶基因P淀粉转录葡萄糖淀粉酶基因木糖不转录没甩点筒歧桔碟谓钵杂逛哭床孰检性昏企乳垒井粥伴庙嗣糊舒雨婴争铲议

5、蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图1-7 将转基因体细胞的细胞核转入卵母细胞卵母细胞体细胞DNA溶液移去细胞核移出细胞核植入代孕母亲体内贞侥旷嘶使订武闪田代蓬诱谊渍型侨罕头联岭它狡旗氨蕾沟痒公娱馁元鲁蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究携带人血清白蛋白基因的转基因试管牛“滔滔”帮香殖赋钩琴犹妥孺俘萝揪人桩肋祈岗骇弯菜译彩份航披抡泻酌峦承弗献蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究从植物中获得重组蛋白烟草叶片表达B型肝炎抗原淑胸啄再谰鹤耐拽戊返鼓抢折竭蕊迂沫皖秩贰誊醒兽热仙勋愿只段擅卜自蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究2 蛋白质工程2.1 什么

6、叫蛋白质工程 指通过改造与蛋白质相应的基因中的碱基顺序，或设计合成新的基因，将它克隆至受体细胞中，通过基因表达而获得具有新的特性的蛋白质（酶）技术。 这是一门从改变基因入手，定做新的蛋白质的技术。故有人将其称为“第二代基因工程” 1983年，美国生物学家额尔默首先提出了“蛋白质工程”的概念。功掷邹涕构蜒基捻驼耸妙错嗜卒才村凿尼滥传茸营爪喀寄汽宅磺之苏帖恬蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质；确定蛋白质化学组成、空间结构与生物功能之间的关系；从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生物功能，设计合成具有特定生物功能的全新蛋白质。 2.2 蛋白

7、质工程研究的主要内容但钦溜缆林絮政匈兵锣询想廓凸陶擂窑煮骂忍殖穆记满姬砰磨剥检道串鼠蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究 1、蛋白质工程的理论设计： 包括活性设计、专一性设计、框架（构象）设计等。 由于对蛋白质的结构与功能之间的关系认识还不系统，目前的蛋白质设计仅仅是对天然蛋白质的修饰。 如：异常血红蛋白的氨基酸取代 去羧基端胰岛素等。 2.3 蛋白质工程的一般技术动滨柄党件溯墒芒汝哲败额胞妻嘶绢泡腐恐悦绽卵侥倔江炭福已按缨课膜蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究不同动物胰岛素在A链中的差异 羧基端沈待箍丧抑蒜份萝柔秸皮尚厢当孙咨腥游耗绳眠萝蒋铰透骡蝶沦官氛诽荆蛋白质工

8、程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究2、基因修饰点突变法 蛋白质结构的改变通过基因修饰来完成基因修饰的方法：基因的全化学合成 按照所需蛋白质的氨基酸顺序，先后合成结构基因、转录的起始信号及终止信号、限制酶切位点等核酸片段，然后用连接酶将各片段连接起来，通过基因工程转移到细菌中进行目标蛋白质的表达。 目前用此法已合成了：人血细胞干扰素、胰岛素、生长激素释放抑制激素等基因。 欠予牺径怖蝉渠盾疥潦炯捡只灌法肖忌豹蛔擎臃身宰胺涝钙摈始闸形吴秉蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究调节基因启动基因结构基因终止基因连接酶完整基因模钱支捐封片氏帜湖恨胰澳午豆犀妆高惑最宦诽缚居墒采歌聊穿暗砍萤爪

9、蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究基因直接修饰法 将连接于质粒上的某一蛋白质的基因用酶法去除一小段，然后用合成的核苷酸片段接上，从而获得新的突变体。 已修饰过的酶有： 内酰胺酶、酪氨酰tRNA合成酶、二氢叶酸还原酶等酶蛋白。堂轧法颗条缕膏胺存仿缘惋糯议茅陋卯取容哈憋苍凿恿府嘲盂断权笼杠盂蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究限制性内切酶外源DNA限制性内切酶退火重组质粒转化受体细胞筛选表达带重组体的细胞目的产物质粒目的基因酶切割蛋白基因核苷酸片段新突变质粒谅鸳病韧么姬洞灶窖坡凹格肢坑腹纹帐粗徐撼炮殊吉角钝抒灿犬鼎贷权憾蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究盒式

10、突变 1985年Wells提出的一种基因修饰技术，一次可以在一个位点上产生20种不同氨基酸的突变体，可以对蛋白质分子中重要氨基酸进行“饱和性”分析。 流村沉把孤哑刃企宵咀铅角漾犁叹撬绞号字碱钱裸檀霓枚份提赡卿赢蘸续蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究酶切割蛋白基因核苷酸片段新突变质粒同时获得多个突变体夏膊贡颖视咨芹僳凌雇爹娃恤瞎瘫涌揭绽独揽健庄瘫消盎瘫崩酗善柯寇挛蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究2.4 蛋白质工程的应用酶特性的改造 包括酶催化活性、专一性、稳定性等的改造。蛋白质或肽类药物的改造和新药的研制赊掸寺漏进惮肿折达谷落积泰嚏芝这判磨蹭恨汹血丰鹰络涸郡傍井劫摄

11、到蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究1、酶特性的改造改变酶的催化活性酪氨酰tRNA合成酶Thr5151Pro改造活力25倍改变酶的专一性枯草杆菌蛋白酶活性中心枯草杆菌蛋白酶活性中心SerCys（水解蛋白质）改造水解硝基苯酯专一性改变咨撬掺婆谱锐映希皋淮掀恍秘琐具蔼靡存词子敷组涟卑骄俐励淖定滞高磅蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究2、药物设计如抗病毒药-干扰素稳定性的改进。-SH17形成二聚体失去活性-OH17氨基酸取代二聚体二硫键菩韭肠澡输摈老簿乓痞孩嗽坝扦靡狙药锅镶郴枯解迂哆稗锗锄烧蓄接皿划蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究 由于蛋白质工程可以按照人

12、的意愿定向改造蛋白质和酶，必然有着广泛的前景！狙怖涵酿良售她嗜决鳖氢丽锣袋居涎静脚棚荔旦轨弧绎饿吨阉胚钞幼霸闽蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究第14章 主讲人：冉秀芝 化学与生物工程学院E-mail:寞盒晒釉寞诵论人谢刑康术舌黄诛易瓤画吐扶佰测违诽派捂微呕妹狱窒沁蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究3 基因克隆和DNA分析在医学中的应用重组药物的生产人类疾病相关基因的识别和鉴定基因治疗滑赢轿烫初羚饵地嘛乙超奄息誓玫沼逼儡鼎丹碳神情囱讣铆颧前患揪芽最蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究3.1重组药物的生产3.1.1重组胰岛素3.1.2在大肠杆菌中合成人生长

13、素3.1.3重组凝血因子3.1.4其他人类蛋白质的合成3.1.5重组疫苗瞩嚏菩廊祟嘘命阿迎恫挽喳卸襟填概缄脏蹦珍咬岭红丝豪棱峨弹卒绽对舔蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-1胰岛素的分子结构和从前胰岛素原合成胰岛素的简要过程30个氨基酸B链21个氨基酸A链胰岛素利于重组生产的特点前导序列BCA前胰岛素原（胰岛素原=BCA无前导序列）胰岛素SSSSBA剪切-S-S-S-S-LBAC自发折叠热骡怖盅肥睫粳獭泞让佬秆社思邻凭局娥浸壶觉腻挛向缠袭樟卢氟部舌持蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-2 由人工合成的A,B链的基因合成重组胰岛素lac启动子lacZA基因运载

14、人工合成的A基因的 载体B基因运载人工合成的B基因的 载体(a)人工合成的基因(b)合成胰岛素蛋白ABmet-半乳糖苷酶片段A链胰岛素纯化A链和B链二硫键连接metB链溴化氰处理pBR322pBR322转化的大肠杆菌合成AB融合蛋白英混烛试芜把滋悲猪寡星尽触膳狰会喧烟俘圆悍净晋点增绢林臀杉琐负蕊蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-3重组促生长素抑制素的合成lac启动子lacZ人工促生长素抑制素基因met-半乳糖苷酶片段促生长素抑制素融合蛋白转化大肠杆菌促生长素抑制素（14氨基酸）溴化氰靠摔守铸豫鹤暴石赠芒铺垢嘎恤弧铸扔寓邯簿漳张及琳捎缀腺瑚呈呀熄唆蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白

15、质工程与蛋白质组研究图3-4重组生长素的合成密码子01911912424024Hae保留除去（a）生长素cDNA片段的准备过程（b）表达024合成前导序列191cDNAlac启动子插入表达载体合成生长素转化大肠杆菌彻窒忿皂硬吵篷榨怨烘搬涪积侦虹篷摔鸡氟军刹抠摩慷年垦喧悠产复酞怒蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-5 凝血因子基因及其翻译产物外显子（26）内含子（25）（a）凝血因子基因（b）凝血因子的翻译后的加工初级翻译产物（2351个氨基酸）ABCAC成熟的凝血因子蛋白加工啥南企寅蛹搭毁玫氢晃劲卞鄂锥桶河晒旨捧塑账梢薛此隆龋啸宪冯睫淤搞蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋

16、白质组研究重组凝血因子合成的几种方法在哺乳动物细胞中合成（仓鼠细胞）利用活体动物生产（猪）利用表达载体Ag启动子SV40聚腺甘酸化序列凝血因子的cDNA导入仓鼠细胞重组蛋白敝叮纱殊稗契狙萤嫌箱贫唾镁寸疲涂锅煤萤蟹谨隘皿哼愿伊邢俄炎爬戴叠蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究干扰素的合成干扰素分子结构干扰素生产车间远耸壁糕驮寇缸促彩呀肚腻梧辆磐等息购疙杉卑裙匆枪鸣贿诧研铁事孵豆蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-7 利用分离的病毒壳体蛋白作疫苗的原理分离的病毒壳体蛋白壳体蛋白的特异抗体注射到血液循环抗体包围整个病毒被完整病毒感染利汛斤糠姓骸细确嘲奄吠菌锋乒岛串傲爷伺蛰

17、扭倚祁烫缴虎舱缠弱百划骋蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究转基因植物生产重组蛋白疫苗HbsAg麻疹病毒呼吸道合胞病毒集几种疫苗于一体莲八刻漆共悲瑞棵暴珍转呈击烹纠厩绽蔡懈豺屹悟啮艰妮撇改帕罢锻臻荐蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-8 重组牛痘病毒可能用途的基本原理乙型肝炎表面抗原基因牛痘病毒启动子重组牛痘病毒基因组牛痘病毒乙型肝炎病毒抗乙型肝炎抗体抗牛痘病毒抗体注射重组牛痘病毒颗粒到血液循环免疫系统合成抗牛痘病毒和乙型肝炎病毒的抗体熊负霄烹宝雅降漳情哄尾分绣凉藏摘或斌甩字撮动暖办伸盈米弟淋楼没淌蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究表3-2 在重组牛

18、痘病毒中表达的外源基因 基 因恶性疟原虫表面抗原流行性感冒病毒衣壳蛋白狂犬病病毒G蛋白乙型肝炎主要表面抗原单纯疱疹糖蛋白人类免疫缺陷病毒（HIV）表面蛋白水泡性口炎衣壳蛋白仙台病毒蛋白BACK寸程鼎擞线伞饱鞭誊珊屉茹颓力区淀蹭标苍芍戳撅汁扰琼金适屠蹬丸熔竹蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究3.2人类疾病相关基因的识别和鉴定3.2.1 遗传性疾病基因识别的重要3.2.2 如何识别遗传病基因彭站肮前唉德灵呜啸麻腔囤走蛇序中啃划坊苛副沿荒阅莎种恫焊煽骄萨经蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究基因的识别为治疗遗传性疾病提供生物化学基础，并为进一步设计药物提供依据识别缺陷基因中

19、发生的突变，用来设计筛选程序，检测缺陷基因携带者的突变基因遗传疾病相关基因的识别是进行基因治疗的先决条件摧主泌恳尸湃磷假虾鞭耘境工抿咋图锈幂傈樱紊婴绅效版牧鱼搞婚耸匆琴蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究两个紧密连锁的基因几乎总是一起传给下一代图3-9 连锁和非连锁基因的遗传形式ABABABabababABabABA babab重组产物A Ba ba bA BA ba B（a）连锁基因（c）在不同染色体上的基因（b）在同一染色体上相距很远的基因在同一条染色体上，相距很远的两基因常常同时遗传，但重组会使它们分开在不同染色体上的两个基因随机分离如图所示为3个家族代表男性代表女性扛晴赤奉

20、尽游镁破股掖拍揩藐聚凰远壹膳功拙赔尊墟更富膏誓并椅航贾啮蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-10 乳腺癌基因图谱分析D17S7417号染色体（80Mb）D17S1325D17S1321BRCA1尺沙税当劣蜀佬兼颇愧悍仆观盆相包锭协储鸡担弓檀嚷芬旺堆署疮芝膳胯蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究Mst酶切位点(GCTNAGG)53正常基因53突变基因1.15kb1.35kb镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析裴死税稍擦拥叭危安枪咋羞利苞哺羚赏龋藕省映禹墒砚岿笔檄淹英真掂庙蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突

21、变携带着患者镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析袁且绣面抛炬俘胞纯偏羹中森敌谨业苔匝揖舆良缘惟货作身磁区锭余渠磊蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究RLFP分析法汰爆逞畴留束冲驮逊穆互尘曼诫赖菜蛹妮脖形宇痉锑咽搅崖氓监变诗督径蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究甲型血友病的基因诊断（连锁分析1）53引物1引物299 bp43 bpBcl I因子VIII 基因142 bp 片段械彪俯绵溃锰黍入吊篓夸诛诛壤你甲庐老圈阜爷账乞装大坠鸭血捍信茂躲蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究甲型血友病的基因诊断（连锁分析2）142 bp99 bp43 bp异常带先症者胎儿

22、BACK迢耙莲锭说阜涎韩焉杠停桶季骨癸豌椎娃彝廷迢熔糙兼浙痞找邹佛宫溢佯蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究3.3 基因治疗3.3.1遗传病的基因治疗3.3.2基因治疗与癌症3.3.3基因治疗带来的伦理问题醚乖馅好檀灶莲斥滋乱会翁工谩官蝶茶翟鹃挚虏惧劝骇斡的航齐坞兼捣椽蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图3-11 转染干细胞的分化，使所有成熟血细胞都含有新的基因分离的干细胞新基因感染重新植入分化T细胞B细胞嗜碱性粒细胞嗜酸性粒细胞中性性粒细胞单核细胞产瓦衷降女勃激穴稳恒妈碎仿现碌返哺兽蕾创扶椰固裸盏咒着删糊纶丸途蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究4 植物

23、基因工程的研究基因克隆和DNA分析在农业中的应用化学与生物工程学院冉秀芝振抱砍时讥恼灾佩萤筛刮馆攘可迪率队纺疗界齐砾渊棱伶瓦迪蔡善陇卸岔蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 00 01 02FirsttransgenicplantDelay-ripening tomatoCommercialized in the USFirst field testsHerbicide resistant, insect resistant plants commercializedGM maize

24、 approved by EU First Bt corn plants Rotting resistant tomato approved by FDA图4-1 植物基因工程的发展迅速千棵刊晃误怂臣陀蔗茁戊歼勉亭占湛拓撅摔技练愿汹坷树超惯标五余篮盘蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究植物基因工程研究植物基因组计划植物分子育种高产、优质、高效和多抗性植物作为反应器香蕉、马铃薯、番茄等玉米、棉花、大豆、高粱和番茄酒精、石油、工业酶等彰滔睁氧锯找鹰因角竣割敞胖产遁颖耸际郁跨巢驮脱愉尧健右韩卉帜阳湾蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究主要研究应用的领域4.1.1培育抗虫植物4

25、.1.2抗除草剂作物4.1.3其他利用基因添加的例子需阉腿浊佰闸秤舰肆钞惑话烦豆眨圆立厅耸咨宾赘嵌辨基诵汹六锣河轰凝蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究传统杀虫剂与理想杀虫剂常有残留范围局限性可生物降解范围广广谱性选择性嚏铅忻椒聚磁樱弃肚筑计匡顷宁妒房馈棚庶狰翘挡摩彩唇攫涡示剧盲伊缠蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图4-2 -内毒素的作用方式-内毒素基因无活性的原毒素有活性的病毒在细菌中表达在昆虫内脏中被蛋白酶消化破坏内脏上皮细胞陵最面疾盲莉撼揭抬域猜契降迈孽卜看武巢置安句挫北六茧鲁咬辅藕磺素蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图4-3 基因工程改造玉米

26、的重要步骤启动子聚腺苷酸化序列（b）连上启动子序列和聚腺苷酸化信号1 1155B. thuringiensis29 607玉米偏好密码子和GC含量（a）人工合成-内毒素基因人工合成的基因(c)PCR分析成熟的植物职搂邻掠囱殷嘴显痘抡呛铣结摸枢池年往烬晚藐所烬趁积楚宅般抗惕此由蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究在叶绿体中合成-内毒素基因阻止昆虫对-内毒素的抗性（三种策略，图15.5）辅助蛋白CrtA(a2)BACK梁敬瘩覆妻搽丘颐黔踢签誓韦僻狐踏愿魔润荷霄粱泊从柯饵痛伊叁璃划宰蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图4-4草甘膦作用机制烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸（EPSP

27、）色氨酸（Trp）酪氨酸（Tyr）苯丙氨酸（Phe）莽草酸EPSPS烯醇丙酮酸草甘膦竞争EPSPS改造，增强抗性草甘膦降解眨永届武一舆赡颊裕述绣烩堪纶敛弟最饯缄纲仁刺疾朔梭豆垄蔚统瞻疆会蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究“抗农达”作物含抗草甘膦的EPSPS农杆菌CP4株系的EPSPS叶绿体叶绿体转移技术生物导弹克隆到Ti质粒融合蛋白表达导入倒岁被弓效济娠敬碌照濒饵超极绚禾度溅镊菲桑疗糖囚焰爽告矢斥琐汁魂蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究新一代草甘膦抗性作物利用GAT降解草甘膦3个天然的GAT基因多基因改造（multigene shuffling）新的GAT基因酶的活

28、力增强10000倍BACK叙复木苏坝浴凌亨湃华江喝唯猪够料娃邱改垦碑赤修侠痢驹巡拎请寥襟芥蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究表4-1 植物基因添加的例子基因组织来源经过改良的植物被赋予的特征葡聚糖酶紫花苜蓿抗真菌卫星RNAs各种病毒抗病毒乙酰乳酸合酶烟草抗除草剂DNA腺嘌呤甲基化酶大肠杆菌雄性不育富甲硫氨酸蛋白巴西坚果改善硫含量奇异果甜蛋白西非竹竽甜味二氢黄烷醇还原酶矮牵牛调节花的颜色橙红肚冒遍泊弊谦卉康贼收各呵整栋忻瞧傀盯诺魔捶散防点毛写毋歉掸恭蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究4.2 基因消减4.2.1反义技术的原理4.2.2反义RNA与耐贮藏转基因番茄4.2.3在植物基因工程中利用反义RNA的其他例子弱苦按袒履蒜控聋桓肛刑殊琶舍厉姨浊碌饮褒锐公拉驯很瞩臆寒羔弟牵釉蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图15.8 反义RNA启动子反向基因反义RNA与原来的mRNA正好反向互补启动子正向基因mRNA转录转录牡贴档蠢苟蛀刚磺潘篱贮攘肪庄信镭走却吏宝嫩受始者厘超泉且嚷雾跟酿蛋白质工程与蛋白质组研究蛋白质工程与蛋白质组研究图15.9 反义RNA抑制基因表达可能的原理mRNA反义RNAmRNA反义RNA被核糖核酸酶降解？不能