2022年《细胞生物学实验》教案

1、试验一细胞外形结构的观看与显微测量（必做）一、试验目的 ：1熟识动物细胞、植物细胞的基本外形结构 2把握暂时装片的制作方法 3把握显微测量的原理和方法 4把握生物绘图的方法；二、试验原理 ：细胞是生物体结构功能的基本单位,其外形与功能相适应； 不同类型的细胞具有不同的大小、外形和结构,以适应其功能；通过制作暂时装片,可以观看很 多细胞的结构,并借助测微尺测量细胞直径,进而获得细胞的体积；三、试验仪器、试剂及材料：仪器： 光学显微镜 （每人 1 台）,载玻片、盖玻片、剪刀、镊子、牙签、滴管 测微尺（镜台测微尺；目镜测微尺）试剂：1%碘液、瑞氏染液（假如观看血细胞,就需瑞氏染液）材料：洋葱、红辣椒

2、、紫色落葵（或紫罗兰） 、血细胞悬液、口腔上皮细胞四、试验步骤 ：1 洋葱鳞茎表皮细胞的观看 在载玻片中心滴一滴 1%碘液 用剪刀在洋葱鳞茎叶内表面画一个 1mm2 的方框 用镊子撕下表皮 在碘液中铺平 盖上盖玻片用吸水纸吸去余外碘液（也可帮忙排除气泡）椒表皮细胞装片）2 人口腔黏膜上皮细胞的观看显微镜下观看 （同法制红辣在载玻片中心滴一滴 1%碘液 用牙签刮取上皮细胞 在 1%碘液中搅动分散细胞 染色 1 分钟 盖上盖玻片观看3 血细胞观看（见细胞生物学试验教程第 9 页）在载玻片右端滴一滴血 用另一张载玻片以 3045 度角（两玻片夹角）推移血液成匀称薄膜 滴一滴瑞氏染液染色 13 分钟自

3、来水冲洗染液,吸水纸吸干 镜检4 显微测量（1）原理： 测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成,目镜测微尺位于目镜内,为玻璃圆片,上有一条带刻度的直线,精确度较镜台测微尺的低； 镜台测微尺是一块载玻片,中心圆形区域内有一带刻度的直线,精确度较目镜测微尺高；（2）测量：用目镜测微尺的格数度量细胞的大小,目镜测微尺每格代表的实际长度用镜台测微尺来校定；A、将镜台测微尺放入载物台上,转动目镜,使二者平行；挑选一处让二者重合,然后向右侧查找再次重合处,登记二者的数值, 并依据目镜测微尺和镜台测微尺的精度关系换算目镜测微尺每小格实际代表的刻度值；目镜测微尺镜台测微尺目镜测微尺每格的长度 = . 正确答案 :

4、 2.5 m B、将镜台测微尺取下,换上洋葱表皮细胞、口腔黏膜上皮细胞、血细胞涂片,用目镜测微尺测量出其长度和宽度；C、应用 V= 4/3 ab2 a 为长半径, b 为短半径 运算出观看细胞的体积；为什么要测量 5-10 个细胞的数据,再运算平均值？五、 摸索题： 1结合试验分析细胞外形结构的特点及其与功能的适应性；2测量细胞时应留意哪些问题？3绘图：洋葱表皮细胞、口腔黏膜上皮细胞、各种血细胞附：生物绘图必需留意的问题 绘图是生物试验报告的一种重要形式,基本要求如下：1预备好 HB 铅笔、橡皮、刀、尺子及绘图纸,将绘图纸放在右边；2绘图时,特殊留意观看物的外形、各部分的位置、比例和毗邻关系；

5、3每幅图的大小、 位置在纸面上必需支配得, 通常图占报告纸左上方 2/3 的 面积,并考虑注字的位置；4观看清晰后,挑选典型的细胞或组织,左眼看显微镜,右眼协作右手,先用铅笔在纸上轻轻描出轮廓,使外形正确,然后再用清晰的线条绘出, 线条粗细要匀称不要重复；留意纸面的洁净,铅笔要保持尖锐,尽量少用橡皮；5用铅笔绘图,线条要明确清晰,图的深浅明暗和立体感一律以点的疏密来表示（深色用密集的黑点,浅色用稀疏的黑点）或进行其它美术加工；,点要圆而一样,不得涂暗影6图绘好后,要在图的右侧注明各部分结构名称,引线用直尺画出,间隔 要匀称,长短适度,各引线不能交叉,图注要尽量排列整齐,注字要用正楷；7每一个图

6、下面要注明图的名称、放大倍数；8绘图纸上全部注字（包括姓名、试验日期、题目等）均用铅笔书写,不 能用其他笔写；试验二观看黑藻的叶绿体和细胞质流淌（选做）一、试验目的：1初步把握高倍显微镜的使用方法；2观看叶绿体外形和分布；3通过显微镜的实际观看,懂得细胞质流淌是一种生命现象；二、试验原理：1高等植物的叶绿体存在于细胞质中,叶绿体呈 或球形 ,高倍显微镜下清晰可见；2活细胞中的细胞质处于不断流淌的状态,用 观看细胞质的流淌；三、试验程序：绿 色、 扁平的椭球形叶绿体 的运动作为标记可光照、室温条件下水中培育黑藻取一片幼嫩的小叶做暂时装片：清水+小叶 +盖玻片低倍观看叶片细胞高倍观看叶绿体的流淌及

7、流淌方向；四、留意事项：1、细胞质的流淌受细胞的代谢状况和外界环境因素的影响,增进细胞代谢作用的因素,如相宜的光照、温度、pH 值、生长素等,都可以促进细胞质的流动；反之,不利的环境变化和某些化学药品,如麻醉剂等,就可抑制细胞质的流 动；2、在做此试验时,假如发觉细胞质不流淌,或者流淌很慢,应立刻实行措 施,加速其细胞质的流淌；其方法有三种：一是进行光照,即在阳光或灯光下放 置 1520 分钟；二是提高盛放黑藻的水温,可加入热水将水温调至 25左右；三是切伤一小部分叶片；试验三 血型的鉴定 （选做）一、目的： 把握 ABO血型鉴定的方法；二、原理： 依据 lgM 类特异性血型抗体与红细胞上特异

8、性抗原结合能够显现凝集反应的原理,用已知 lgM 类特异性标准抗血清与被检者红细胞在室温条件下反应, 如被检者红细胞显现凝集现象,说明被检红细胞上有与血型抗体对应的抗原；三、器材：载玻片、 75%酒精、棉签、采血针试剂：标准抗 A、抗 B 血型定型试剂（二） 血型 :1、定义：依据红细胞膜表面上特异抗原（凝集原）的类型进行分类；2、血型分类： ABO 血型系统、 Rh 血型系统等（三） ABO 血型系统：临床常见： A 型、B 型、AB 型和 O 型；红细胞凝集原 血浆的凝集素A 型 A 抗 B B 型 B 抗 A AB 型 A、 B O 型抗 A、抗 B （四）血型鉴定 的步骤1、预备：载玻

9、片的左上角编号；2. 按标记所示分别滴加抗A、抗 B 血型定型试剂各一滴；3. 采血：无名指指尖内侧；每边各加入受检者的全血 1 滴；用牙签搅拌使红细胞与抗体充分混匀；3、原理：利用凝集反应原理鉴定血型A + 抗 A 凝集反应B + 抗 B 凝集反应4. 观看和血型判读：如有凝集,就愈摇动,凝块愈大；无凝集红细胞可匀称分散；依据有无凝集现象报告结果；留意事项： 每人每次使用一支采血针两根搅拌牙签不能相混观看有无凝集反应小学问 ： 利用从绿咖啡豆中提取的酶,来清除掉B 型血红细胞膜表面的多糖体,从而获得和 O 型血基本相同的红血球,这样就可以把 B 型血转变成了 O 型血,可用于紧急输血；摸索

10、1某同学的血液跟 A 型标准血清发生凝集反应,但其血清遇 A 型血却不发生凝集反应；问：该同学的血型是哪一种？2已知甲、乙、丙、丁四人中,只有甲、乙的血与B 型标准血清发生凝集反应,又知在紧急情形下,甲只能接受丁的血；问：甲、乙、丙、丁各是什么血型3有一对夫妇,父亲的血型为A 型,母亲的血型为B 型,其儿子却是O 型,请问这个儿子是不是这对夫妇所生的？说明理由；1答： AB 型；2答： 甲是 A型、乙是 AB型、丙是 B型、丁是各是 O型；3有一对夫妇,父亲的血型为A 型,母亲的血型为B 型,其儿子却是 O型,请问这个儿子是不是这对夫妇所生的？说明理由；答： A 型的基因型：AA 和 Ai B

11、 型的基因型：BB 和 Bi AB型的基因型：AB O 型的基因型： ii 父母基因型：BB AA Bi AA 产生配子：B 、 i A B A 子女基因型： A B A B Ai 子女血型：A B 型A B 型A 型父母基因型：BB Ai Ai Bi产生配子：A B i B、iB A 、 i A 、子女基因型： A B Bi Bi Ai ii 子女血型：A B 型B 型 A B型 B 型A 型 O 型这对夫妇有可能生出O型血的儿子；但 O型血的这个儿子也仍不肯定就是这对夫妇所生；通常 ABO血型的法医鉴定,只能作排除的检查,不能确定就是；要 想知道这个儿子是否亲生,最好仍是做 DNA鉴定,精

12、确率达 99%；试验四 血涂片的制备和细胞计数（必做）课前预习 1细胞计数的基本原理？2细胞计数与细菌计数的异同点？一、试验目的1制备血涂片,观看明白血细胞的基本外形；2把握细胞计数方法；二、试验原理细胞计数一般用血细胞计数板,按白细胞计数方法进行计数； 细胞计数时,先将培育细胞或血细胞稀释成细胞悬液,然后将细胞悬液滴入细胞计数板内,计数计数板上计数室四大格内的细胞数；依据计数室的容积及稀释倍数,即可运算出细胞浓度；三、 试验仪器、试剂及材料1材料：鸡一只2器材和仪器：显微镜、载片、盖片、吸水纸、手术器材、解剖盘、血球计数板、小平皿、牙签3试剂： 0.9生理盐水四、试验步骤1制备 10%的鸡血

13、细胞悬液2鸡血涂片的制备与观看取鸡血悬液,靠近一端滴在载片上,将另一载片的一端呈 30-45 角紧贴在 血滴的前缘,匀称用力向前推,使血液在载片上形成匀称的薄层 图 21；晾 干,显微镜下观看；图 21 血涂片的制备3细胞计数 1）制备鸡红细胞悬液： 0.9生理盐水按确定的稀释倍数制成 10%鸡红细 胞悬液；2）熟识血细胞计数板：血细胞计数板呈长方形,有2 个计数室；每个计数室分为 9 个大正方格,每个大格边长为 1mm,计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm,及每大格的容积为1mm 1mm 0.1mm=0.1mm 3；四角的每个大格被分为 16 个中格；中心的大格被分为25 个中格,中心的每

14、个中格又被分为16 个小格；3）滴片：每人取 1 副血细胞计数板及 1 张盖玻片,用布将盖玻片擦净,把盖玻片盖在血细胞计数板槽上,然后用吸管将制备好的鸡血细胞悬液混匀,吸取血细胞悬液,滴 1 滴于血细胞计数板的盖玻片一侧边缘,使细胞悬液自然流入计数室内；留意： 血细胞悬液不行滴的过多,如溢出或盖玻片内有气泡必需重做,否就将影响计数结果；该吸管加完样后不能再用；4）计数：在低倍镜下按图运算计数板的四角大方格（每个大方格又分 16 个小方格）内的细胞数；计数时, 只计数完整的细胞,如聚成一团的细胞就按一个细胞进行计数； 数出计数板上计数室四角四大格中的细胞数,如细胞压在格线上时,数上不数下,数左不

15、数右；二次重复计数不应超过5；五、试验结果1鸡血涂片的制备与观看显微镜观看可见鸡红细胞为椭球形,有核；白细胞数目少,为圆形；2细胞浓度运算：将四大格的细胞总数除以4,得出平均每大格的细胞数,每大格的容积为 0.1mm3,乘以 10000 即为 1000mm3（1mL）；因此,不同稀释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式运算：细胞浓度（细胞数 mL）（四大格的细胞数 4） 10000稀释倍数六、试验报告 1绘图：显微镜下观看的各种细胞外形 2计数 每毫升 细胞悬液中的细胞数（留意单位：个 /ml）3为什么细胞计数时,细胞悬液逸出凹槽外或有气泡时要重做？显微直接计数法的计数原理1 1ml 菌液中的总菌数

16、 = ？= N 10 4B = A/52510 4B N:大方格的总菌数；A: 五个中方格的总菌数；B: 菌液的稀释倍数；答案： 3+4+4+3+2525104 = 8 105 个/ml 试验五 DNA 的细胞化学 Feulgen 反应 （必做）一、试验目的：1Feulgen 反应是专一性染 DNA 的反应,是经典的细胞化学方法,通过 试验使同学把握 Feulgen染色的技术；2观看明白 DNA 在细胞内的分布；二、试验原理：稀 HCl 水解 DNA ,破坏嘌呤和脱氧核糖间的化学键,并在脱氧核糖 C1 端形成游离的醛基, 醛基和 Schiff 试剂结合,形成紫红色的化合物； 因此在有 DNA

17、的部位,就会出现除紫红色阳性反应；三、 试验仪器、试剂及材料1试验材料：紫色洋葱 2试验器材： 显微镜、染色缸、剪刀、刀片、镊子、烧杯、培育皿、水浴锅、 100温度计、3试剂： 见教材 3132 页；四、试验步骤：1撕取洋葱鳞茎内表皮 3 块（1cm 2,待铺片时剪成 1mm 2）,分别进行以下操作；1 块放在 3mL 1M HCL 中,加热到 60水解 810min；（试验组）1 块放在 3mL 1M HCL 中,常温下水解 810min；（对比组 1）1 块不用水解,直接从第3 步进行操作（对比组 2）2蒸馏水水洗；3用 Schiff 试剂遮光染色 3060min；1 块洋葱内表皮约 1.

18、5mL 4用新奇配制的漂洗液洗 5自来水水洗 5min；60.5%亮绿复染 30s；3 次,每次 2mL,2min；7将内表皮放到载波片上,盖上盖波片,显微镜观看；细胞中凡是有 DNA 的部位应出现紫红色的阳性反应；（试验组与 2 个对比组在显微镜下对比进行观看）留意事项： 不要把染液占到自己手上或滴加到桌面上五、作业： 绘图示洋葱鳞茎表皮细胞DNA 的分布部位；试验六叶绿体的分别与荧光观看（必做）课前预习： 1 分别细胞器的一般原理和方法？2 叶绿体的荧光为什么不能用一般光学显微镜观看到？一、试验目的：1通过对植物细胞叶绿体的分别,明白细胞器分别的一般原理和方法；2通过光镜鉴定叶绿体的纯度及

19、明白叶绿体外形；3观看叶绿体的自发荧光和次生荧光,明白荧光显微镜的原理和使用方法；二、试验原理 1细胞经过破裂后制成匀浆,在等渗介质中进行差速离心,是分别细胞器 的常用方法；2利用细胞各组分质量大小、外形和密度的不同,挑选不同的离心力和离 心时间,即可分别得到所需要的细胞器或大分子组分；3菠菜是分别完整叶绿体的极好材料,其细胞中所含的质体较大,而且它 们都能在不积存淀粉和酚类物质的条件下生长；菠菜的叶绿体 /湿重比率较高；叶绿体具有荧光现象,可利用荧光显微镜观看；切片观看其外形和分布；菠菜叶富含叶绿体, 可采纳徒手4叶绿体的分别应在等渗溶液 0.35mol/L 氯化钠 或 0.4mol/L 蔗

20、糖 溶液 中进行, 以免渗透压的转变使叶绿体受到损耗；5将匀浆液 1000r/min 的条件下离心 2min, 用 6 层纱布 除去组织残渣和一些未被破裂的完整细胞,以去除其中的组织残渣和未被破裂的完整细胞；然后,在 3000r/min 的条件下离心 5min,即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）；6分别过程最好在 05条件下进行；假如在室温下,要快速分别和观看；离心技术可用于细胞器的分别；1）差速离心法：采纳逐步增加离心速度或低速和高速交替进行离心,使沉降速度不同的颗粒在不同的分别速度和离心时间下分批分别的方法,称为差速离心法；常用于从组织匀浆中分别各种细胞器,见表 2-1；表4-1 差速

21、离心形成的沉淀（植物）沉淀转速x 时间内容物A 150g x 20min 完整细胞B 1000g x 20min 细胞核,细胞碎片C 3000g x 6min 叶绿体D 10000g x20min 线粒体、溶酶体、微体E 105000g x120min 微粒体F 105000g x 20min +0.26% 脱氧胆酸纳核糖体三、试验用品1材料：新奇的嫩菠菜,临用前先暗置过夜,目的是排除淀粉的积存；最好 45冷藏；2试剂：蒸馏水, 0.35mol/L 氯化钠溶液, 0.4mol/L 蔗糖溶液, 0.0 1%吖啶橙,最好 45冷藏；3器材：立式冰冻高速离心机、组织匀浆机、光学显微镜、荧光显微镜、天

22、平、研钵、漏斗、 50mL 离心管、纱布、载玻片、盖玻片等；四、试验步骤一、叶绿体的提取1新奇嫩菠菜叶洗净擦干去除叶梗、叶脉,称2克于放入匀浆器中,加入8mL0.35mol/L 氯化钠溶液；同样称 2克于放入匀浆器中,加入 8mL 0.4mol/L 蔗糖溶液,作对比试验,贴好标签；2利用捣碎机低速（ 5000r/min）匀浆, 35min,或快速研磨成匀浆；3将匀浆液用 6 层纱布过滤于 50mL 小烧杯中,4取 6ml 虑液 1000r/min 离心 2min（去除组织残渣和未被破裂的细胞） ,弃去沉淀；5取上清液在 3000r/min 离心 5min,弃去上清液,保留沉淀（沉淀即为叶 绿体

23、,混有部分细胞核）；6沉淀用大约 1mL0.35mol 氯化钠溶液悬浮；7取叶绿体悬液一滴置于载玻片上,盖上盖波片,光学显微镜下观看；8如使用荧光显微镜观看 荧光显微镜使用方法 时,将叶绿体悬液滴在无 荧光的载玻片上, 再滴加 1 滴 0.01%吖啶橙荧光染料, 盖上无荧光的盖玻片后即 可观看；【试验结果】一般光镜下, 可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒；在选用 B（blue兰色）激发滤片的条件下,叶绿体发出火红色荧光；加入吖啶橙后, 叶绿体发出橘红色荧光, 其中混有的细胞核就发绿色荧光；二、菠菜叶徒手切片观看1新奇菠菜叶用刀片切出一斜面置于载玻片

24、上,滴加12 滴 0.35mol/L氯化钠溶液,盖上盖片显微镜下观看,可以看到三种细胞：（1）表皮细胞：为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞；（2）保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞；（3）叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞,叶绿体呈绿色橄榄形；保卫细胞长形的栅栏细胞椭圆形的海绵细胞叶绿体橄榄形【试验报告】1. 绘出各种情形下观看到的叶绿体、气孔、表皮细胞的生物图,并对外形、颜 色加以说明；2观看经过加热和未加热这两种叶绿体在外形上的区分,并绘出草图；3. 测量叶绿体的长轴和短轴,分别测量510个叶绿体,求其平均值；摸索题： l叶绿体分别的试验原理是什么？2在分别叶绿体时应留意些什么问题？试验

25、七细胞膜的通透性（必做）课前预习 1 在等渗溶液中细胞肯定能维护正常外形吗？2猜测红细胞在各种溶液中的溶血速度？一、试验目的：明白相对分子质量、 脂溶性大小、 电解质和非电解质对细胞膜通透性的影响；二、试验原理：将红细胞放入数种等渗溶液中,由于红细胞膜具有挑选通透性,有的溶质可 以进入细胞,有的不能进入, 渗入的物质可以提高红细胞的渗透压,促使水分进 入细胞,使细胞膨胀,进而破裂,血红蛋白释放到介质中,细胞溶液变为红色透 明的血红蛋白溶液,这就是溶血现象；由于物质进入细胞的速度不同,溶血时间就不同；因此, 发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标；测量指标：溶血时间1.

26、相对分子质量大小对细胞膜通透性的影响1）红细胞置于乙二醇、丙三醇（甘油） 、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中,乙 二醇等分子进入红细胞,使细胞内渗透压提高,导致水分进入,细胞膨胀,细胞 膜破裂,细胞溶血；2）溶血的快慢与进入物质的分子量大小有关,相对分子质量大的进入细胞 慢,发生溶血所需时间长；2. 脂溶性大小对细胞膜通透性的影响a 非极性化合物易溶于脂溶剂中, 但在水中的溶解度小； 碳链越长, 脂溶性越高；b 细胞膜是脂类双分子层, 脂溶性大的物质简单通过细胞膜,对细胞的通透性高；c 安排系数：一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中的溶解度之比,称为分配系数；3. 电解质和非电解质溶液对细胞膜通透

27、性的影响1 等渗系数：具有相同渗透压的某非电解质与某电解质溶液浓度之比；2 i葡萄糖的等渗物质的量浓度/ NaCL 的等渗物质的量浓度；3 等渗浓度：发生溶血者为低渗液,把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗浓度；三、试验用品材料：鸡血器材： 50ml 烧杯、滴管、试管、试管架 , 阿氏液（ Alsever s 液）试剂： 0. 17mol/L 氯化钠 0. 17mol/L 氯化铵0. 17mol/L 硝酸钠 0. 17mol/L 醋酸铵0. 12mol/L 硫酸钠 0. 12mol/L 草酸铵0. 32mol/L 葡萄糖 0. 32mol/L 甘油0. 32mol/L 乙醇 0. 9

28、%生理盐水阿氏液： 葡萄糖 2. 02g, 氯化钠 0. 42g,柠檬酸钠 0. 80g,柠檬酸 0. 055g,蒸馏水加到 100ml,灭菌, 0-4储存两周四、试验步骤：1、鸡红细胞的制备：从集市买一只活鸡现杀取血 鸡血（一份鸡血加两份阿氏液）混匀,离心（ 2022rpm）10弃上清液,取沉淀 加 0.9%生理盐水,至 10ml离心（2022rpm）10,重复 4-5 次 弃上清液,取沉淀 制成 2% 鸡红细胞备用（用生理盐水稀释）；2）溶血现象的观看： 取试管一支,加入5ml 蒸馏水,再加入 0.5ml 制备好的鸡血, 留意观看溶液颜色的变化,由不透亮的红色逐步澄清；红细胞发生破裂,造成

29、 100%红细胞溶血,使光线比较简单透过溶液；（将试管贴靠在书上, 隔着试管看书中的字, 如发觉溶血就文字可看清晰） ；3）红细胞的渗透性：（1）取试管一支,加入 017mol/L 氯化钠溶液 5ml,再加入 0.5ml 制备的鸡血,轻轻摇动,留意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？4）溶血情形判定（1）不溶血（） 液体分 2 层,上层浅黄色透亮,下层红色不透亮,镜检红细胞完好；（2）不完全溶血 （或）（3）完全溶血 （）溶液浑浊,上层变红色,镜检部分红细胞破裂 液体变红而透亮,镜检发觉红细胞全部呈碎片；（将试管贴靠在书上, 隔着试管看书中的字, 文字看得清清晰楚 完全溶血）；文字看得不是

30、很清晰 不完全溶血观察黑乎乎的行,很糊涂不溶血六、细胞膜渗透性试验结果比较和分析试管编号所加试剂和浓度是否溶血时 间结果分析1 017mol/L 氯化钠2 017mol/L 硝酸钠3 012mol/L 硫酸钠4 017mol/L 氯化铵5 017mol/L 醋酸铵6 012mol/L 草酸铵7 032mol/L 葡萄糖8 032mol/L 甘油9 032mol/L 乙醇10 032mol/L 丙酮七、留意事项：1.鸡红细胞的稀释要用 血的体积相等；0.9%生理盐水,加入的生理盐水体积与第一步取的鸡2.离心机使用时,要将配平后的离心管对称放置在离心机内,禁止未配平就放入离心机和非对称放置离心管；

31、八、试验报告1怎样依据细胞膜渗透性试验结果分析确定物质进入细胞的速度？2物质进入细胞的快慢有什么规律？试验八植物凝集素对红细胞的凝集作用（必做）课前预习 ：土豆凝集素的本质及其使红细胞凝集的原理？一、试验目的 明白细胞糖被的特点和功能,明白植物凝集素的作用 二、试验原理细胞膜表面的有分支状糖外被,细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫 反应、肿瘤的发生等都和细胞表面的分支状糖分子有关；凝集素（lectin）是一 类含糖并能与糖分子专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作 用；凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞表面间形成“ 桥” 的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细

32、胞的凝集；三、试验用品1材料： 土豆块茎,一只鸡（采血）2器材和仪器： 显微镜、载片、双凹片、盖玻片、天平、滴管、小烧杯、移液管、离心管、试管和试管架3试剂：0.9生理盐水、 2鸡红细胞、 PBS缓冲液、阿氏液（ Alsever液）硫酸胺（约 0.4 g/ml ）四、方法步骤1制备 2% 红细胞悬浮液：鸡血（一份鸡血加两份阿氏液）混匀,离心（ 2022rpm）10 弃上清液,取沉淀 加 0.9%生理盐水,至 10ml 离心（ 2022rpm）10,重复 4-5次 弃上清液,取沉淀制成 2% 鸡红细胞备用（用生理盐水稀释）；2 制备土豆凝集素液： 称取土豆去皮块茎 20g , 加100 mL P

33、BS缓冲液,浸泡2h,浸出的粗提液过滤,即为土豆凝集素液；3. 制备韭菜凝结素液：称取韭菜叶片 4g 洗净,剪碎 按 1：1（W/V）加入生理盐水 （即 4ml）研磨成匀浆 过滤 滤液 5000r/min 离心 20 min 弃沉淀（转移上清）上清液加硫酸胺（约 0.4 g/ml ）至 60%饱和度沉淀5000r/min 离心 20 min 沉淀用 0.25ml 磷酸缓冲液溶解；4凝集反应：a 载玻片上滴一滴 土豆凝集素液 ,再滴一滴 2红细胞液,充分混匀,静置2min, 低倍显微镜下观看血球凝集现象；b 载玻片上滴一滴韭菜凝集素液, 再滴一滴 2红细胞液 , 充分混匀,静置2min, 低倍显

34、微镜下观看血球凝集现象；c以 PBS 缓冲液加 2血细胞作对比试验；五、试验结果1 凝集素液 能使鸡红细胞凝集, PBS 对比液中红细胞分散匀称对比组：未凝血 试验组：凝血五、试验结果1. 绘图表示血细胞凝集现象,并说明缘由；2. 比较马铃薯和韭菜凝集素的凝集成效并分析缘由；六、留意事项1. 韭菜的研磨肯定要到位； 2. 韭菜凝结素提取中硫酸铵的量肯定要适当过量 ,否就沉淀成效不好；详细标准为加入硫酸铵后振摇溶解,至溶解后在离心管底部, 能看到少量过量的 硫酸铵；3. 离心机使用时, 要将配平后的离心管对称放置在离心机内,禁止未配平 就放入离心机和非对称放置离心管；七、试验报告试验九植物细胞的

35、有丝分裂（必做）一、试验目的：1. 观看植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期；2. 初步把握制作根尖有丝分裂装片的技术,培育同学的动手才能；3. 把握绘制生物图的方法；二、试验原理：在植物体中, 有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞；高等植物细胞有丝分裂的过程,分为分裂间期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期；可以用高倍显微镜观看植物细胞有丝分裂的过程,依据各个时期细胞内染色体 （或染色质）的变化情形, 识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期；细胞核内的染色体简单被碱性染料着色；三、试验用具：1. 材料： 洋葱根尖或蚕豆根尖2. 器材： 显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿,剪刀,镊子,量筒（5

36、0ml）,烧杯（ 50ml、100ml）、青霉素瓶、滴瓶、吸管、培育皿、温度计、纱布、吸水纸3. 试剂： 卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇 3 份,冰醋酸 1 份）、 1N HCl 龙胆紫（质量分数为 0.01g/mL 或 0.02g/mL 溶液（或醋酸洋红液）四、方法步骤1洋葱根尖的培育 试验课前的 34d,取洋葱一个,留意：洋葱要挑选底盘大,防止用新 采收的洋葱；剥去外层老皮,用刀削去老根,不要削掉“ 根芽”；放在广口瓶或烧杯上,瓶内装满清水,放置在光照处；留意每天换水12 次,使洋葱的底部总是接触到水；待根长到 23cm 时,取生长健壮的根尖制片观看；2装片的制作1）解离： 剪取根尖 23

37、mm（最好在每天的 1014 点取根,因此时间是洋葱根尖有丝分裂高峰期） ,立刻放入盛有质量分数为15%的氯化氢溶液和体积分数为 95%的酒精溶液的混合液（ 1：1）的玻璃皿中,在室温下解离 35min；2）漂洗： 待根尖酥松后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10min；3）染色： 把洋葱根尖放进盛有质量浓度为0.01g/mL 或 0.02g/mL 的龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）的培育皿中,染色 35min；4）制片： 取一洁净载玻片,在中心滴一滴清水,将染色的根尖用镊子取出,放入载玻片的水滴中,并且用镊子尖把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片再加一载玻片； 然后,用拇指轻轻地压载玻片；

38、取下后加上的载玻片, 既制成装片；3洋葱根尖有丝分裂的观看 1）低倍镜观看： 把制成的洋葱根尖装片先放在低倍镜下观看,要求找到分 生区的细胞,它的特点是：细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞正在分裂；2）高倍镜观看： 找到分生区的细胞后,把低倍镜移走,直接换上高倍镜,用细准焦螺旋和反光镜把视野调整的既清晰又较亮,直到看清细胞物象为止； 仔细观看,找处处于有丝分裂的前期、中期、后期、末期和间期的细胞；留意： 观看时,应依据有丝分裂各时期的特点,认真辨认；由于间期长,视 野中多数细胞均处于此时期, 易于观看；其它时期,可先找出细胞分裂期的中期,然后再找到前期、后期、末期的细胞；认真观看各个时期内染色体的变化特点；在同一视野中,很难找全各个时期的细胞,可以渐渐地移动装片查找；五、绘图 在观看清晰有丝分裂各个时期的细胞以后,绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的 各个时期的简图； 要求重点：绘植物细胞有丝分裂中期、 后期图（含 4 个染色体）；六、结论 洋葱根尖细胞有丝分裂过程中各个时期的染色体变化有什么特点？七、争论 制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片的关键是什么？解离的目的是什么？漂洗的目的呢？压片的目的是什么？试验十 鸡血细胞