食品卫生微生物学检验菌落总数测定

1、.：.；食品卫生微生物学检验菌落总数测定 发布单位:太原市质量技术监视局报送时间:2007年12月19日阅读次数:342附件1GB/T4789.2-2003食品卫生微生物学检验菌落总数测定 1范围本规范规定了食品中菌落总数的测定方法。本规范适用于各类食品中菌落总数的测定。2术语菌落总数是指食品检样经过处置，在一定条件下培育后(如培基成分、培育温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培育条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为断定食品被污染程度的标志，也可以运用这一方法察看细菌在食品中繁衍的动态，以便对被检

2、样品进展卫生学评价时提供根据。3援用规范GB/T 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培育基和试剂4设备和资料4.1冰箱：04。4.2恒温培育箱：361。4.3恒温水浴锅：461。4.4均质器或灭菌乳钵。4.5架盘药物天平：0g500g,准确至0.5g。4.6菌落计数器。4.7放大镜4X。4.8 灭菌吸管：1 mL具0.01 mL刻度、10 mL具0.1 mL刻度。4.9 灭菌锥形瓶：500 mL。4.10 灭菌玻璃珠。5 mm。4.11 灭菌培育皿：直径90mm。4.12 灭菌试管。16X16 mm。4.13 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。 4.14 电炉。4.15试管架。4.16

3、酒精灯。4.17灭菌镊子、灭菌刀或剪子等。5培育基和试剂5.1营养琼脂培育基：按GB/T4789.28中4.7规定。5.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB/T4789.28中3.22规定。5.30.85%灭菌生理盐水。5.475%乙醇。6检验程序 菌落总数的检验程序如下。检样 选择23个适宜的稀释度各取1 mL分别参与灭菌培育皿内做成几个适当倍数的稀释液每皿内参与适量营养琼脂菌落计数 361 48h2h报告7操作步骤7.1检样稀释及培育7.1.1以无菌操作,取样25mL或25 g放入225mL灭菌生理盐水中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。 固体检样在参与稀释液后,最好置均质器中以8000r/min

4、10000r/min的速度处置1min,做成1:10的均匀稀释液。7.1.2用1mL灭菌吸管汲取110稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(留意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1100的稀释液。7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。7.1.4根据食品卫生规范要求或对标本污染情况的估计，选择23个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以汲取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。7.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培育基(

5、可放置于461水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培育基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照7.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置361温箱内培育482h。7.2菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防脱漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。7.3菌落计数的报告7.3.1平板菌落数的选择选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定规范。一个稀释度运用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，那么不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，假设片状菌落不到平板的一半，而

6、其他一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界限)，假设仅有一条链，可视为一个菌落；假设有不同来源的几条链，那么应将每条链作为一个菌落计。7.3.2稀释度的选择7.3.2.1应选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。7.3.2.2假设有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，那么视两者之比如何来决议。假设其比值小于或等于2，应报告其平均数；假设大于2那么报告其中较小的数字(见表中例2及3)。7.3.2.3假设一切稀释度的平均菌落数均大于300，那么应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告

7、之(见表1中例4)。7.3.2.4假设一切稀释度的平均菌落数均小于30，那么应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。7.3.2.5假设一切稀释度均无菌落生长，那么以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。7.3.2.6假设一切稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，那么以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例7)。7.3.3菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(见表1中“报告

8、方式栏)。 表1稀释度选择及菌落数报告方式例次 稀释液及菌落数两稀释液之 比菌落总数cfu/g(mL)报告方式cfu/g(mL)10-110-210-31多不可计16420-16 40016000或1.6X1042多不可计295461.637 75038000或3.8X1043多不可计271602.227 10027000或2.7X1044多不可计多不可计313-313 000310000或3.1X105527115-270270或2.7X1026000-1X10 107多不可计30512-30 50031000或3.1X104附件2GB/T4789.3-2003 食品卫生微生物学检验大肠菌群

9、测定 1范围本规范规定了食品中大肠菌群的测定方法。本规范适用于食品中大肠菌群的测定。2术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染目的来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的能够。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最能够数(MPN)表示。3援用规范GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培育基和试剂4设备和资料4.1温箱：361。4.2冰箱：04。4.3恒温水浴：44.50.5。4.4天平。4.5显微镜。4.6均质器或乳钵。4.7平皿：直径为90mm。4.8试管。4.9吸管。4.

10、10广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL。4.11玻璃珠：直径约5mm。4.12载玻片。4.13酒精灯。4.14试管架。5培育基和试剂5.1乳糖胆盐发酵管：按GB/T4789.28中4.9规定。5.2伊红美蓝琼脂平板：按GB/T4789.28中4.25沥规定。5.3乳糖发酵管：按GB/T4789.28中4.10规定。5.4EC肉汤：按GB/T4789.28中4.11规定。5.5磷酸盐缓冲稀释液：按GB/T4789.28中3.22规定。5.6生理盐水。5.7革兰氏染色液：按GB 4789.28中2.2规定。6检验程序 大肠菌群检验程序如下：图略稀释检样乳糖胆盐发酵管361 48h2h产气大肠菌群阴

11、性伊红美蓝琼脂平板361 48h2h不产气报告革兰氏染色乳糖发酵管361 48h2h革兰氏阳性革兰氏阴性无芽胞杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性报告报告报告7操作步骤7.1检样稀释7.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成110的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8 00010000r/min的速度处置1min，做成110的均匀稀释液。7.1.2用1mL灭菌吸管汲取110稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1100的

12、稀释液。7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。7.1.4根据食品卫生规范要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。7.2乳糖发酵实验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置361温箱内，培育242h，如一切乳糖胆盐发酵管都不产气，那么可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，那么按以下程序进展。7.3分别培育将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置361温箱内，培育1824h，然后取出，察看菌落形状，并做革

13、兰氏染色和证明实验。7.4证明实验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进展革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置361温箱内培育242h，察看产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。7.5报告根据证明为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值(见表1)。 阳性管数 MPN100mL(g)95%可信限1mL(g)X30.1mL(g)X30.01mL(g)X3下 限上 限000000000123303060905900000111101233060901205130000022220123609012016000003333

14、01239013016019011110000012340701101505102002101111111101237011015019010302303602222000001239014020026010303603703333000001232303906409504070150120013003800注1:本表采用3个稀释度1mL(g)、0.1mL(g)、0.01mL(g)，每稀释度三管注2：表内所列数量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL(g)、0.01mL(g)、0.001mL(g)时，那么表内数字应相应添加10倍。其他

15、可类推。表1 大肠菌群最能够数MPN检索表附件3GB/T4789.15-2003 食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数1 范围本规范规定了食品中大肠菌群的测定方法。本规范适用于食品中大肠菌群的测定。2援用规范GB 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培育基和试剂3设备和资料3.1冰箱：04。3.2恒温培育箱：2528。3.3恒温振荡器。3.4显微镜：10X100X。3.5架盘药物天平：0500 g，准确至0.5 g。3.6灭菌具玻塞锥形瓶：300 mL。3.7灭菌广口瓶：500 mL。3.8灭菌吸管：1 mL具0.01 mL刻度、10 mL具0.1 mL刻度。3.9灭菌平皿。3.10灭菌试

16、管：16mmX160mm。3.11载玻片、盖玻片。3.12灭菌牛皮纸袋、塑料袋。3.13灭菌金属勺、刀。4培育基和试剂4.1马铃薯-葡萄糖琼脂培育基，附加抗菌素按GB/T 4789.28中4.78规定。4.2孟加拉红培育基：按GB/T 4789.28中4.25沥规定。4.3灭菌蒸馏水。5 检验程序检样粮 食块状食品粉状食品液状食品糊状食品25g+225ml无菌水25ml+225ml无菌水做成几个适当倍数的稀释液 选择三个适宜稀释度，各取1mL参与灭菌平皿内每皿参与适量培育基可先用马铃薯-葡萄糖琼脂附加抗菌素、高盐察氏培育基或孟加拉红培育基菌落计数 2528 5d报 告6操作步骤6.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水的具塞锥形瓶中，振摇30min，即为110稀释液。6.2用1mL灭菌吸管汲取110稀释液10mL，注入灭菌试管中，另用1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。6.3取1mL110稀释注入含有9 mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液。6.4按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL，