黄嘌呤氧化酶试剂盒

1、黄嘌吟氧化酶（XOD）测定试剂盒说明书一、测定意义黄嘌吟氧化酶主要存在与哺乳动物的乳汁及肝脾中，属需要脱氢酶类，是体内核酸代谢中的重要酶，在肝细胞损伤时，此酶早于SGPT释放于 血清中，并且升高明显，其对鉴别肝细胞性黄有明显的意义，并且在缺氧过程中黄嘌吟脱氢酶很快形成黄嘌吟氧化酶，其对自由基的产生起了重 要的作用。二、测试原理：XOD可催化次黄嘌吟生成黄嘌吟，与此同时产生超氧阴离子自由基，当有电子受体及显色剂存在的情况下，生成紫红色结合物，根据后者生成 量的多少可以推算出XOD的活力。三、试剂组成与配制（50T）试剂一：液体，20ml，3瓶，-20C以下保存，尽量避免反复冻溶试剂二：液体，5m

2、l，1瓶 4C保存试剂三：液体，6ml，2瓶 4C避光保存试剂四：粉剂，2支，稀释液0.6ml*2支，-20C以下保存，尽量避免反复冻溶试剂五：60ml终止液，1瓶 4C保存一、操作：样本前处理：（1）血清（浆）的测定：血清可直接取样进行检测；血浆需以3000-3500转/分，离心10分钟，小心吸取澄清的上清进行检测。若仍有浑 浊可反复离心。（2）红细胞的测定：抗凝全血以1000转/分，离心10分钟，弃上清，取下层红细胞加双蒸水按1： 49的比例制成溶血待测，配好的溶血 液最好当天做检测，4C存放时间不超过8小时。（3）组织的测定：组织称重按重量/体积比加9倍的生理盐水制成10%的匀浆，200

3、0转/分，离心10分钟取上清待测。操作表：蒸馏水mla*b*试剂一 ml11试剂二ml0.050.05试剂三ml0.20.2试剂四ml0.020.02混匀，37C水浴20分钟试剂五ml1.01.0混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。注：a*为蒸馏水量。B*为取样量，a与b在数值上相等。五、参考取样量血清：100ml； 1： 49溶血液50ml； 10%肝组织匀浆25ul-100ul六、计算公式：血清XOD活力（U/L）=（测定管OD值-空白管OD值）/呈色物摩尔消光系数x （反应液总体积/取样量）x （1/光径x反应时间）溶血液XOD活力（U/gHb）=（测定OD值-空白

4、管OD值）/呈色物摩尔消光系数x （反应液总体积/取样量）x （1/光径x反应时间）：血红 蛋白含量（gHb/L）3. 组织XOD活力（U/gprot）=（测定OD值-空白管OD值）/呈色物摩尔消光系数x （反应液总体积/取样量）x （1/光径x反应时间）：匀浆蛋 白含量（gprot/L） 七、注意点：试剂一、试剂四放-20C保存，尽量避免反复冻融。组织块要用生理盐水漂洗后，滤纸吸干，称重后0C以下可保存3个月以上。血浆中XOD的检测：血浆在检测过程中容易引起混浊，需在测试前以3000-3500转/分，离心10分钟，小心吸取澄清的上清，弃去上层的脂 肪与下层沉淀，若仍有混浊可反复离心。产品简介

5、:产品编号产品名称产品包装产品价格S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒100次319.00 元谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒（Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit是一种简单易行的通 过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase）活性的试剂盒。 绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中性组成部分。细胞内也有很少量 的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。本试剂盒如果和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒（S0058）配合使用，可以定

6、量检测出样品中不含硒的 谷胱甘肽过氧化物酶。谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。 细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽 （GSH）还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发 生明显上调或下调。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽（GSH ）催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有 机醇。如果以过氧化氢为底物进行检测，则同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶（Catalase）的酶活性会干 扰谷胱甘

7、肽过氧化物酶的测定。本试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH 产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出 谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中，谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此 NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。本试剂盒利用了如下的反应原理，GPx为谷胱甘肽过氧化物酶，GR为谷胱甘肽还原酶，R-OOH为过氧 化物。2GSH + R-OOH-GSSG + R-OH + HONADPH + H4 + GSSG-*NADP+ + 2GSH本试剂盒提供的有机过氧化物试

8、剂(t-Bu-OOH)在没有谷胱甘肽过氧化物酶存在的情况下不会和GSH产 生反应，也不会被细胞内的过氧化氢酶催化而分解。因而可以较为特异地检测出谷胱甘肽过氧化物酶的活 力。由于t-Bu-OOH不能被不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶所催化，所以本试剂盒可以比较特异地定量检测最 常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。可检测组织匀浆产物、细胞裂解产物等样品中谷胱甘肽过氧化物酶的活性。一个试剂盒可进行100次 检测。包装清单：产品编号产品名称包装S0056-1样品匀浆液100mlS0056-2谷胱甘肽过氧化物酶检测缓冲液50mlS0056-3谷胱甘肽还原酶40日lS0056-4NADPH5mgS0056-5还原型

9、谷胱甘肽(GSH)14mgS0056-6过氧化物试剂(t-Bu-OOH)200p l说明书1份保存条件：谷胱甘肽还原酶4C保存，其余-20r保存，半年有效NADPH溶解后宜-70C保存，4C可以保存一天， -20C保存一周后NADPH会减少10%以上。GSH在配制成溶液后，适当分装，-20C保存。注意事项：本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品中 的还原剂无法避免，例如DTT、巯基乙醇等，则这些还原剂的总浓度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以 抑制40%的酶活力。常用的Triton X-100. Tween 20等去垢剂都含有较高水平的过氧化物，会影响本试剂盒的测定。如果 必须使用这些去垢剂，最好使用纯度较高并注明含较低过氧化物的去垢剂。为消除样品中可能含有的可以消耗NADPH的酶的干扰，可以检测不加过氧化物试剂的样品作为对照。样品可以立即测定，也可以-70C冻存待以后测定。一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。谷胱甘肽还原酶配制在接近饱和的硫酸铵溶液中，存放一段时间后容易出现硫酸铵结晶，属正常现象。 室温孵