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1、精选优质文档-倾情为你奉上精选优质文档-倾情为你奉上专心-专注-专业专心-专注-专业精选优质文档-倾情为你奉上专心-专注-专业南京中医药大学药学院毕业设计(论文)开题报告课 题 名 称:玉竹质量控制的方法学研究学 生 姓 名: xxxxxxxxxxxxxxx 学 号: xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx 指 导 教 师: xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 所 在 学 院: 药学院 xxxxxxxxx 专 业 名 称: 中药资源与开发 x 实 习 单 位: xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx大学药学院2011年3月15日说 明1根据教育部对毕

2、业设计(论文)的评估标准,学生必须撰写毕业设计(论文)开题报告,由指导教师签署意见、教研室或实习单位审查,学院教学院长批准后实施。2开题报告是毕业设计(论文)答辩委员会对学生答辩资格审查的依据材料之一。学生应当在毕业设计(论文)工作前期内完成,开题报告不合格者不得参加答辩。3毕业设计开题报告各项内容要实事求是,逐条认真填写。其中的文字表达要明确、严谨,语言通顺,外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现缩写词,须注出全称。4本报告中,由学生本人撰写的对课题和研究工作的分析及描述,应不少于2000字,没有经过整理归纳,缺乏个人见解仅仅从网上下载材料拼凑而成的开题报告按不合格论。5开题报告检查原则上

3、在毕业实习开始后8周内完成,各教研室或实习单位完成毕业设计开题检查后,应写一份开题情况总结报告报药学院。南京中医药大学本科毕业设计(论文)开题报告学生姓名姚晓学号专业/年级/班级中药资源与开发/07年级/1班指导教师姓名xxx职称主任药师所在单位或部门质量部指导教师姓名职称所在单位或部门课题来源企业自建课题类型基础研究课题名称玉竹质量控制的方法学研究毕业设计(论文)的内容和意义一研究内容:以指纹图谱为手段研究玉竹变化明显的有效成分、指标性成分、炮制后产生的新成分的含量变化等。通过TLC和HPLC等分析比较玉竹不同产地化学成分的变化情况,包括量变和质变,寻找控制其质量变化明显的特征性成分、成分群

4、或炮制后新产生的成分,然后对生、制玉竹中具有一定特异性的主要化学成分、药效成分或炮制后新产生的成分进行分离和结构鉴定,得到单体化合物,作为玉竹分析用或鉴别用对照品。二研究意义玉竹为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill) Druce的干燥根茎,为湖南省道地药材,又名尾参,玉参,萎蕤,铃铛菜,地管子,甜根草。玉竹味甘,微寒,归肺、胃经。具有养阴润燥,生津止渴等功效, 用于肺胃阴伤,燥热咳嗽,咽干口渴,内热消渴。现代研究表明,玉竹具有扩张冠脉、降血脂、降血糖和增强免疫力等作用,在保健食品中得到广泛的应用。临床需炮制后方可药用。炮制方法主要有清蒸、蜜蒸、酒蒸、清炒、蜜炒等几

5、种.。玉竹根茎中主要含有甾体皂苷、多糖、黄酮及其糖苷以及多种蒽醌类化合物。对于玉竹药材质量的控制,主要是利用薄层-分光光度法测定玉竹中甾体皂苷成分含量;分光光度法测定其多糖含量,中国药典2010年版规定玉竹的多糖含量以葡萄糖(C6Y12O6)计不低于60%。这些分析方法。都是控制玉竹某类总含量,一方面不能全面反映药材的质量,另一方面这些分析方法受到的干扰因素比较多,选择性、专属性、灵敏度、重复性和准确度差。纹图谱具有专属、快速、简便的特点,同时能容纳多个样品,及呈现多种信息,有分离和鉴别的双重作用,特别适合鉴别成分复杂的中药饮片。本课题以指纹图谱为手段研究不同产地批次玉竹变化明显的有效成分、指

6、标性成分、炮制后产生的新成分的含量变化等,从而为制定其质量标准提供依据。研究方案和技术路线 一研究方案1.玉竹,经HPLC跟踪检测的方法和化学提取、分离及结构鉴定炮制后产生的新的成分,该成分含量的高低可以明显地指示玉竹的质量,可作为玉竹饮片的含量测定的指标成分,并建立以该成分为对照品的玉竹饮片HPLC含量测定的方法。2玉竹,经TLC检测的方法和化学提取、分离及结构鉴定炮制后产生的新的成分,该成分含量的高低可以明显地指示玉竹的质量,可作为玉竹饮片的含量测定的指标成分,并建立以该成分为对照品的玉竹饮片TLC含量测定的方法。技术路线查文献HPLC研究TLC研究相关成分 提取方法 考察流动相检测波长提

7、取次数、时间溶剂 优化,确定实验条件 建立指纹图谱结果 中药质量控制 研究进度2011年1月-2月完成玉竹中化学成分及其炮制方法的文献检索;制定实验方案,书写开题报告。2011年2月-4月 按照既定实验方案进行实验研究。2011年4月-5月整理实验资料,撰写结题报告;完成毕业论文特色与创新 为寻找其合理的玉竹质量控制方法,为制定质量标准提供依据。以相关成分为对照品,通过TLC、HPLC等技术,研究药材的内在质量,尽可能增加新成分的含量测定或鉴别项目,最终完成指纹图谱对中药的质量控制。指导教师意 见指导教师签名: 年 月 日教研室或实习单位意 见负责人签名: 年 月 日学院意见 教学院长签名:

8、年 月 日文献综述玉竹研究进展摘要: 对近年来玉竹及其制剂中相关鉴别方法进行系统整理,总结出系统的检测方法,为保证玉竹的品质,确保疗效的稳定奠定基础。关键词:玉竹;TLC;HPLC;图谱玉竹为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill) Druce的干燥根茎,为湖南省道地药材。玉竹味甘,微寒,归肺、胃经。具有养阴润燥,生津止渴等功效, 用于肺胃阴伤,燥热咳嗽,咽干口渴,内热消渴【1】。从玉竹中已经分离鉴定了甾体皂苷、黄酮、生物碱、多糖、甾醇、鞣质、黏液质和强心苷等多类成分,其中多糖、黄酮是玉竹中主要有效成分,现代药理实验研究证明其具有增强耐缺氧、抗衰老、抗氧化、降血糖、抗

9、肿瘤和提高免疫力等作用2 迄今为止,对玉竹及其制剂中的相关成分的测定,一般有紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、IR光谱法及气相色谱-质谱联用技术等。在目前水平条件下,单一指标性成分的量测定往往难以反映中药整体质量,而指纹图谱具有整体性、系统性、全面性的特点,能较全面的反映中药品质,现已成为中药质量评价和控制研究的热点之一。本文对玉竹的TLC、HPLC研究进展进行了整理,希望能够以此为基础,探索新方法、新途径,从而为从整体上控制玉竹药材质量提供科学依据。1 玉竹的化学成分1.1 多糖类在玉竹化学成分的研究方面,Tomoda等从玉竹中分离到玉竹粘多糖,由D-果糖,D一甘露糖,D一葡萄糖及

10、半乳糖醛酸所组成,摩尔比为6:3:1:1.5【3】。Tomoda等分离得到玉竹果聚糖A、B、c、D,糖的组成为果糖与葡萄糖,其组成比为:97.5:2.6;96.2:3.8;95.3:4.8;90.4:9.6【4】 丁登峰等采用热水提取,乙醇多次沉淀获得玉竹多糖【5】。根茎中还含有4种玉竹果聚糖(Polygonatum-fructan O-A,B,C,D),它们分别是(Tomoda et al.1973):(1)玉竹果聚糖甲(Polygonatum-fructan O-A)分子量4940,果糖:葡萄糖为97.5%:2.6%;(2)玉竹果聚糖乙(Polygonatum-fructan O-B)分子

11、量4320,果糖:葡萄糖为96.2%:3.8%;(3)玉竹果聚糖丙(Polygonatum-fructan O-C)分子量3120,果糖:葡萄糖为95.3%:4.8%;(4)玉竹果聚糖丁(Polygonatum-fructan O-D)分子量1750,果糖:葡萄糖为90.4%:9.6%;谢建军等(2009)优化了玉竹多糖提取工艺,结果发现影响多糖提取率的的最主要因素是醇沉浓度,通过对比不同处理方法的多糖含量,确定最佳提取条件为:90温度下,生药与提取溶液的比例130,提取3h,最后在90%乙醇浓度下进行醇沉。杨辉等(2006)在多糖含量测定引入蒽酮-硫酸比色法,丰富了玉竹多糖的含量测定方法【5

12、】。1.2 氨基酸据研究,玉竹含有多种氨基酸,如:天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸等。其中含有人体必需氨基酸7种,即赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,其中,包含人体半必需氨基酸2种,即精氨酸和组氨酸。玉竹中总氨基酸的含量为11.22% 12.20%,游离氨基酸160.87220.23mol.g-1,其中,必需氨基酸的含量为3.54%3.87%,半必需氨基酸含量为1.25% 1.7%,不同干燥方法其含量存在差异【6】。1.3 微量元素玉竹含有多种微量元素。据测定,玉竹中含

13、有Cu、Zn、Fe、Mg、Mn、Cd、Ca、P、Na等, Ca、Mg、P、Cu等的含量丰富,这些微量元素在人体新陈代谢中起着非常重要的作用。Fe、Zn、Mn、Cu等元素对生物体内的免疫系统起着重要的调节作用, Ca是构成骨骼和牙齿的主要成分【7,8】。1.4 甾体皂苷玉竹含铃兰苦苷(convallamarin)、铃兰苷(convallarin) 【9】。25 (R,S)-螺甾-5-烯-3, 14-二醇-3-O-D-吡喃葡萄糖基 (12)-D-吡喃葡萄糖基(13)-D-吡喃葡萄糖基(14)-D-吡喃半乳糖苷。25 (R,S)-螺甾-5-烯-3-醇-3-O-D-吡喃葡萄糖基(12)-D-吡喃葡萄糖

14、基(13)-D-吡喃葡萄糖基(14)-D-吡喃半乳糖苷【10】。含有黄精C、POD,黄精螺甾醇(polyspirostanol) Poa、黄精螺甾醇苷( polyspirostanoside) POb, POe, PO1, PO2, PO3, PO4, PO5, PO6, PO7, PO8及PO9等甾族化合物。22-羟基-25 (R,S)-呋甾-5-烯-12-酮-3, 22, 26-三醇-26-O-D-吡喃葡萄糖苷等【11】。1.5 黄酮类已知含白屈菜酸(chelidonic acid)、氮杂环丁烷-2-羧酸和山柰酚阿拉伯糖苷(kaempferol arabinoside);另外从日本变种香玉

15、竹(polygonatum odoratum var. pluriforum)的叶中分得了黄精素(polygonatum)、牡荆素-2-O-槐糖苷及牡荆素(vitexin)、牡荆素-2-O-葡萄糖苷等。对玉竹挥发油化学成分作了研究,采用GC-MS的方法,确定了32种化合物【12】。彭秧锡等将反相高效液相色谱法用于玉竹中黄酮类化合物槲皮素的分离与测定【13】。1.6 挥发油黎勇等人用GC-MS的方法对玉竹挥发油化学成分进行分析,共检出40种成分,占总检出88.84%,并确定了32种化合物,主要成分为不饱和烯烃 (37.05% ),除此之外还含有一些醇、醛、酸、酯及烷烃【14】。1.7 其他成分玉

16、竹还含有淀粉、蛋白质、生物碱、维生素、鞣质、粘质和二肽成分【15】。浆果中含有铃兰苦苷及铃兰苷,可溶性蛋白质3.07% 4.36%【16】。嫩苗鲜品中含胡萝卜素、维生素B2、维生素C等。可溶性糖含量43.26% 46.29%,淀粉8.07% 15.78%,水溶性多糖11.08% 12.64%【17】,不同干燥方法含量略有不同。2 不同炮制方法对玉竹质量的影响中国历代典籍记载的玉竹炮制方法主要有清蒸、蜜蒸、酒蒸、清炒、蜜炒等几种,陈胜璜等实验结果表明【1】,玉竹经上述方法处理后,以水溶性浸出物为考察指标,发现蜜蒸品含量最高,清炒品含量最低;以醇溶性浸出物为指标进行评价,结果与水溶性浸出物基本相同

17、。将多糖、水溶性浸出物及醇溶性浸出物三者进行综合比较,无论是蜜炒还是清炒,三项指标的和均较蜜蒸或清蒸要低得多,故玉竹的炮制最好采用蒸法,可根据临床应用的需要分别选取蜜蒸、酒蒸或清蒸玉竹。3质量标准中含量的研究目前玉竹的质量标准,中国药典2010版中规定,玉竹中玉竹多糖的含量6.0%为质量指标【18】。湖南产玉竹中的玉竹多糖含量有的高达8.0%。对不同种玉竹中的总甾体皂苷的含量测定范围在0.1%0.4%。薯蓣皂苷元的含量范围在0.02%0.07%【19】。王晓丹等采用原子吸收分光光度法,对佳木斯地产玉竹中的8种微量元素进行了测定【20】。对玉竹药材的质量检测表明,水分13.0%,总灰分7.0%,

18、水溶性浸出物50%,杂质(泥、沙等)3%。3.1玉竹中相关成分的TLC研究进展杨先国等对玉竹的黄酮类成分进行薄层色谱指纹图谱研究采用薄层色谱法,甲苯-醋酸乙酯-甲酸(541)为展开剂,氨水熏蒸显色,用R=500 nm,S=280nm双波长扫描。建立了由10个特征荧光斑点构成的玉竹黄酮类成分的薄层指纹图谱。【21】3.2玉竹中相关成分的HPLC研究进展3.21成分HPLC研究王强等采用水提醇沉法从玉竹中提取总多糖,通过DEAE-纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B分子筛层析分离纯化得到一种中性多糖,应用UV光谱分析了中性多糖的纯度,凝胶过滤法测定了其分子质量,IR光谱和HPLC色谱

19、对其结构和单糖组成进行初步分析,表明其平均分子质量为1.21106D,主要由甘露糖和葡萄糖组成,其物质的量比为5:1,同时含有少量半乳糖。杨先国、刘塔斯等采用HPLC法测定了玉竹中的玉竹酮,含量范围在0.04%-0.55%。【21】3.22指纹图谱研究刘塔斯等用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术进行基因组DNA多态性分析得到指纹图谱。随着中药研究的现代化,中药的质量研究逐渐从单一有效成分或指标成分的定性定量分析转向有效成分群体分析,因此,积雪草药材的质量控制,除要建立有效成分的含量测定方法,制定含量限度外,建立有效成分群的指纹图谱分析方法,更有利于全面掌握药材质量10。中药指纹图谱是综合的、

20、可量化的鉴别手段,是当前符合中药特色的,评价中药产品质量的最终标准是安全与有效,所以还应与药效相结合,将中药色谱指纹图谱中化学成分的变化和中药药效结果从数量上联系起来,建立起中药的“谱效学”,最终完成指纹图谱对中药的质量控制。参考文献1 陈胜璜,蒋孟良,周日宝. 不同炮制方法对玉竹质量的影响.湖南中医药大学学报,2007, 27(3): 18-19.2王强,李盛钰,杨帆,等玉竹中性多糖的分离纯化及单糖组成分析. 食品科学, 2010,31(15):100-1023 Tomoda M,Yoshida,Tanaka H,et al.II. Isolation and character-izati

21、on of a mucous polysaccharide, odoratan, from Polygonatumodoratum var japonicum rhizomes J. Chemical & Pharmaceu-tical Bulletin, 1971, 19 (10): 2173-217.4 Tomoda M, Satoh N; Sugiyama A. Isolation and characteriza-tion of fructans from Polygonatum odoratum var. japonicum J. Chemical & Pharmaceutical

22、Bulletin, 1973, 21 (8): 1806-1810.5丁登峰,向大雄,刘韶,等. 玉竹多糖的提取及其对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠血糖的影响.中南药学,2005,3,(4):222-2246张永清,丁少纯.干燥方法对玉竹药材质量的影响 J.基层中药杂志, 1998, 12(4): 14- 16.7徐践,马萱,李聪晓,等.功能型山野菜玉竹 J.蔬菜, 2003, (8): 29- 308王晓丹,宗希明,吴洪斌,等.佳木斯白头翁、玉竹、扁蓄、长白沙参、绵马贯众、关卷术中微量元素的测定 J.佳木斯医学院学报, 1997, 20(4): 5.9中国医学科学院药物研究所.中草药有效成分的研究

23、(第一分册) M.北京:人民卫生出版社, 1972: 44310 Lin HW, Han GY, Liao SX, Studies on the Active Constitu-ents of the Chinese Traditional Medicine Polygonatum odora-tum (Mill.) Druce J. Acta pharmaceutica Sinica, 1994, 29 (3): 215-222.11 Qin HL, Li ZH, Wang P. A new furostanol glycoside fromPolygonatum odoratum J. Chinese Chemical Letters, 2003, 14 (12), 1259-1260.12 Li Y, Sun ZZ,

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