cha药物的杂质检查课件

1、2022/8/16第三章 药物的杂质检查 3.1 概述 3.2 一般杂质的检查方法3.3 特殊杂质的检查方法第1页，共78页。2022/8/16概 述3.1 概述 检查有效性：以动物实验为基础，最终以临床疗效来评价；安全性：热原检查、毒性试验、刺激性试验、过敏试验、升压或降压物质检查等。纯度要求：对各类杂质的检查；制剂通则：含量均匀性，溶出度、释放度、装量差异、生物利用度的均一性；第2页，共78页。2022/8/16一、药物的纯度与要求药物的纯度 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣。概 述含量测定杂质检查理化常数外观性状结构药物纯度药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑；考虑杂质的

2、生理作用； 药物合格不合格化学试剂不能代替药品！第3页，共78页。2022/8/16药物的杂质 指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。 药物的纯度与要求例：乙酰水杨酸 水杨酸 第4页，共78页。2022/8/16二、杂质的来源在贮藏过程中引入合成过程中，原料不纯；有一部分原料没有反应完全；反应中间产物和副产物在精制时没有除净；在制成制剂的过程中，产生新的杂质；制剂生产过程中所用溶剂、试剂的残留；与生产器皿接触引入杂质； 受外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、异构化、发霉等变化。 由生产过程中引入概 述第5页，共78页。2022/8/16例：乙酰水杨

3、酸 水杨酸 二羟乙基过氧化物（有毒） 麻醉乙醚例：例：差向四环素（毒性高、活性低） 四环素杂质的来源与种类第6页，共78页。2022/8/16按理化性质分类无机杂质、有机杂质、残留溶剂按毒性分类普通杂质（信号杂质）毒性杂质（有害杂质）按来源分类一般杂质、特殊杂质一般杂质 是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。特殊杂质 是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。 杂质的来源与种类三、杂质的种类第7页，共78页。2022/8/16四、杂质的限量杂质限量 是指药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。杂质的量 杂质限量合格不合格杂质的量

4、概 述第8页，共78页。2022/8/16杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法 标准对照法杂质对照品或纯品溶液供试品溶液在相同条件下处理 平行操作 比较结果 颜色比色浑浊比浊色斑比较色斑特点：不需知道杂质的准确含量；必须有对照品或是纯品。 杂质的限量第9页，共78页。2022/8/16杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法 标准对照法例1：中国药典规定检查砷盐时，应取标准砷溶液2.0ml（每1ml相当于1ug的As）制备的标准砷斑，今依法检查溴化钠中的砷盐，规定含砷量不得超过0.0004% ，问应取供试品多少克？ 杂质的限量第10页，共78页。2022/8/16杂质限

5、量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法 标准对照法例2：检查对乙酰氨基酚中的氯化物，取对乙酰氨基酚2.0g，加水100ml，加热溶解，冷却，滤过，取滤液25ml，依法检查氯化物，所产生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10ug的Cl-）制成的对照液比较，不得更浓，问氯化物的限量？杂质的限量第11页，共78页。2022/8/16杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法 灵敏度法供试品溶液特点：以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量不需对照品 试剂无正反应合格 有正反应不合格 杂质的限量第12页，共78页。2022/8/16杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法

6、、比较法 比较法供试品 测定特定的待检杂质的参数 如：测定A、pH值等 结果规定的限量 特点：不需要对照品 杂质的限量第13页，共78页。2022/8/16一般杂质的检查方法3.2 一般杂质的检查方法氯化物检查法硫酸盐检查法重金属检查法一般杂质的检查方法溶液颜色检查法铁盐检查法砷盐检查法易炭化物检查法溶液澄清度检查法干燥失重测定法残留溶剂测定法炽灼残渣检查法水分测定法第14页，共78页。2022/8/16（一）原理一、氯化物检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml

7、50ml 暗处放置5min 暗处放置5min一般杂质的检查方法第15页，共78页。2022/8/16供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗处放置5min 暗处放置5min（三）注意事项及讨论1. 条件 纳氏比色管应配对 ；氯化物检查法第16页，共78页。2022/8/16供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗处放置5min 暗处放置5min（三）注意事项及讨论1.

8、条件 纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；可以加速氯化银的生成；产生较好的乳浊；可避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀。氯化物检查法第17页，共78页。2022/8/16供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗处放置5min 暗处放置5min（三）注意事项及讨论1. 条件 纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；使生成白色浑浊而不是白色沉淀 氯化物检查法第18页，共78页。2022/8/16供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310ml

9、H2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml 暗处放置5min 暗处放置5min（三）注意事项及讨论1. 条件 纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；暗处放置 ；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察 ；平行操作。 氯化物检查法第19页，共78页。2022/8/16反复过滤至澄清H2O（三）注意事项及讨论2. 供试品溶液不澄清时的处理方法过滤3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法稀HNO3H2OAgNO31ml 暗处放置10min标准NaCl溶液AgNO31mlH2O无Cl- 暗处放置5min 暗处放置5min50ml5

10、0ml内消色法2倍量的供试品氯化物检查法第20页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法外消色法 向供试品溶液中加入某种试剂，使供试品溶液的颜色褪去或与对照品溶液颜色相同后再依法检查。 4. 供试品溶液显碱性时的处理方法先中和为中性后再检查；避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。5. 预先排除干扰物。氯化物检查法第21页，共78页。2022/8/16（一）原理二、硫酸盐检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准K2SO4溶液H2OH2O25% BaCl2 5ml25% BaCl2 5mlH2OH2O50ml50ml放置10mi

11、n放置10min40ml40ml稀HCl 2ml稀HCl 2ml一般杂质的检查方法第22页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论1. 条件 纳氏比色管应配对 ；酸性条件稀盐酸；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察 ；平行操作。 2. 供试品溶液不澄清时的处理方法过滤3. 供试品溶液有色时的处理方法内消色法/外消色法硫酸盐检查法第23页，共78页。2022/8/16过硫酸铵 50mg过硫酸铵 50mg（一）原理三、铁盐检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准铁溶液H2OH2O30% 硫氰酸铵 3ml30% 硫氰酸铵 3mlH2OH2O50ml50ml25ml25ml稀HCl 4ml

12、稀HCl 4ml35ml35ml一般杂质的检查方法第24页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论供试品溶液标准铁溶液H2OH2O25ml25ml过硫酸铵 50mg过硫酸铵 50mg稀HCl 4ml稀HCl 4ml35ml35ml30% 硫氰酸铵 3ml30% 硫氰酸铵 3mlH2OH2O50ml50ml纳氏比色管应配对；酸性条件稀盐酸加过硫酸铵氧化剂： 加过量硫氰酸铵 比色方法：白色的背景上，自上而下的观察。稀盐酸可以防止铁盐水解氧化供试品中 Fe2+生成Fe3+ ；防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。增加生成的配合物的稳定性，提高灵敏度；消除Cl-、PO43-、SO42-等离子与铁

13、盐形成配合物的干扰。铁盐检查法第25页，共78页。2022/8/16四、重金属检查法重金属 指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。Pb第一法第四法重金属含量低的药物(25g)第三法使用范围微孔滤膜法硫化钠法溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物方法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的药物炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、乙醇的药物第二法一般杂质的检查方法第26页，共78页。2022/8/16第一法 硫代乙酰胺法黄色至棕黑色混悬液（一）原理（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准铅溶液H2O醋酸盐buffer（pH3.5）2mlH2O醋酸盐buffer（pH

14、3.5）2ml25ml25ml硫代乙酰胺 2ml摇匀放置2min硫代乙酰胺 2ml摇匀放置2min重金属检查法第27页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论1. 条件 用Pb(NO3)2先配制贮备液，并加入硝酸防止铅盐的水解，临用前稀释；醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 硫代乙酰胺试液 ；平行操作； 比色方法：白色背景，自上而下的观察 ；重金属检查法硫代乙酰胺法第28页，共78页。2022/8/162. 供试品溶液有色时的处理方法外消色法/内消色法外消色法用稀焦糖溶液调节对照管颜色与样品管颜色一致。 用对测定不干扰的指示剂调节对照管颜色与样品管颜色一致。内消色法重金属检查法硫代乙酰胺

15、法第29页，共78页。2022/8/163. 干扰物的排除方法高铁盐（Fe3+）供试品中微量高价Fe3+存在 供试品为铁盐（大量的Fe3+）药物本身能生成不溶性硫化物加入掩蔽剂 重金属检查法硫代乙酰胺法第30页，共78页。2022/8/16第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 （一）原理 供试品在500-600炽灼破坏后，加HNO3加热处理，再按第一法进行检查。 （二）操作重金属检查法第31页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论HNO3处理后必须蒸干除尽氧化氮；炽灼温度：500600；含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿。重金属检查法炽灼后硫代乙酰胺法第32页，共78

16、页。2022/8/16第三法 硫化钠法 （一）原理 （二）操作（标准对照法，比色）（三）注意事项及讨论碱性条件：NaOH显色剂：Na2S 重金属检查法黄色至棕黑色混悬液第33页，共78页。2022/8/16第四法 微孔滤膜法 （一）原理：同第一法 （二）操作CABFE滤器下部滤器上盖连接头辅助滤板D滤膜(直径10mm, 孔径3.0m)垫圈(外径10mm,内径6mm)重金属检查法微孔滤膜过滤法检查重金属装置第34页，共78页。2022/8/16五、砷盐检查法古蔡氏法白田道夫法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）奇列氏法（次磷酸法）一般杂质的检查方法第35页，共78页。2022/8/16（一

17、）原理 砷()的反应： As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3（黄色） AsH3 + 2As(HgBr)3 3AsH(HgBr)2 （棕色） AsH3 + As(HgBr)3 3HBr + As2Hg3（黑色） 砷盐检查法古蔡氏法第36页，共78页。2022/8/16（二）操作8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体古蔡氏法检砷装置砷盐检查法古蔡氏

18、法标准砷斑 供试品砷斑第37页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论 各试剂的作用HCl：提供酸性环境，反应物；加KI和酸性SnCl2的作用：做还原剂，还原砷()为砷()砷盐检查法古蔡氏法 As3+ + 3Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O第38页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论 各试剂的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI被氧化生成的I2又可以被SnCl2还原为I I与反应中产生的Zn 2能形成稳定的配位离子，有利于生成AsH3的反应不断进行。砷盐检查法古蔡氏法 As3+ + 3

19、Zn + 3H+ AsH3+ 3Zn2+ AsO33- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H2O第39页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论 各试剂的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI和酸性SnCl2可抑制SbH3生成 锑斑，影响结果观察SnCl2可以与Zn生成锌锡齐，起去极化的作用，使氢气均匀连续发生 砷盐检查法古蔡氏法第40页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论 各试剂的作用醋酸铅棉花的作用 ：吸收H2S，排除硫化物干扰 砷盐检查法古蔡氏法第41页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论2. 反应的最佳条件 加Zn粒：能通过1号

20、筛（850-1000m）；约2g盐酸酸性下反应温度2540，45min标准砷溶液2ml（1g/ml）砷盐检查法古蔡氏法3. 供试品砷斑和标准砷斑应平行操作，并立即观察； 供试品砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。第42页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论4. 干扰物的排除 如供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等应在检查前加入HNO3处理，氧化成硫酸盐，再做检查；供试品若为铁盐，需先加酸性SnCl2试液，将Fe3+还原为Fe2+ 砷盐检查法古蔡氏法第43页，共78页。2022/8/16（三）注意事项及讨论4. 干扰物的排除 供试品为共价键结合的砷化物，要先进行有机破坏，否则检出结

21、果偏低或难以检出。排除方法：酸破坏法/碱破坏法酸破坏法：+稀硫酸与溴化钾，如：葡萄糖中砷盐的检查碱破坏法：+氢氧化钙，500-600灼烧，如：中药麻仁丸中砷 盐的检查 +无水碳酸钠碱融，如：苯甲酸钠中砷盐的检查砷盐检查法古蔡氏法第44页，共78页。2022/8/16（四）古蔡氏法的特点优点：灵敏度高。缺点：不适于含锑的药物。砷盐检查法古蔡氏法第45页，共78页。2022/8/16五、砷盐检查法白田道夫法一般杂质的检查方法（一）原理棕褐色的胶态砷 （二）特点优点：不受锑干扰 。缺点：灵敏度低 。第46页，共78页。2022/8/16五、砷盐检查法 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 一般

22、杂质的检查方法（一）原理红色的胶态银 红色的胶态银 第47页，共78页。2022/8/16（二）操作Ag-DDC法检砷装置砷盐检查法Ag-DDC法AsH3发生瓶醋酸铅棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液吸收硫化氢气体Ag-DDC第48页，共78页。2022/8/16（三） Ag-DDC法的特点优点：灵敏度高； 可限量也可定量； 锑干扰小缺点：吡啶有恶臭，中国药典改为Ag-DDC的三乙胺-氯仿（1.8：98.2）溶液代替，灵敏度略低。 砷盐检查法Ag-DDC法第49页，共78页。2022/8/16五、砷盐检查法奇列氏法（次磷酸法） 一般杂质的检查方法（一）原理（二）特点优点

23、：不受S2-、SO32-、Sb的干扰，适用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物砷盐的检查 缺点：灵敏度较古蔡氏法低 。第50页，共78页。2022/8/16六、溶液颜色检查法一般杂质的检查方法是控制药物中有色杂质量的方法 中国药典收载有三种方法： 第一法 目视比色法，即与标准比色液比较的方法。第二法 分光光度法。第三法 色差计法 第51页，共78页。2022/8/16七、易炭化物检查法一般杂质的检查方法易炭化物指药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。方法：H2SO4炭化后与对照液比较。 对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液

24、按规定方法配成的对照液；（3）高锰酸钾液。 第52页，共78页。2022/8/16八、溶液澄清度检查法 一般杂质的检查方法澄清度检查是检查药品溶液的混浊程度。它可以反映药物溶液中微量不溶性杂质的存在。 方法：与浊度标准液比浊。浊度标准液制备原理： 甲醛腙（白色混浊） 肼 第53页，共78页。2022/8/16溶液澄清度检查法 澄清指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂或未超过0.5号浊度标准液。 第54页，共78页。2022/8/16九、炽灼残渣检查法一般杂质的检查方法炽灼残渣 指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。0.1%0.2%12 mg第55

25、页，共78页。2022/8/16十、干燥失重测定法一般杂质的检查方法干燥失重 药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。 用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。 恒重 供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。第56页，共78页。2022/8/16干燥失重测定法分类适用范围备注常温常压干燥受热较稳定的药物 105，一般2-4h，干燥至恒重 干燥剂干燥适用于受热易分解或挥发的供试品 常用干燥剂：硅胶、五氧化二磷、浓硫酸等 减压干燥法 适用于熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的供试品 热分析法研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，对物

26、质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法 包括：热重分析法、差热分析法等 干燥失重测定方法： 第57页，共78页。2022/8/16十一、水分测定法一般杂质的检查方法2005版中国药典二部收载两种方法：费休氏法、甲苯法 （一）费休氏法A供试品消耗的费休试液的体积B空白消耗的费休试液的体积F每1ml费休试剂相当于水的重量(mg)W供试品的重量第58页，共78页。2022/8/16水分测定法费休氏法费休试液的配制 称取碘(置硫酸干燥器内48小时以上)110g，置干燥的具塞烧瓶中，加无水吡啶160ml,注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300ml，称定重量，将烧瓶置冰浴中冷却

27、，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存。临用前应标定浓度 第59页，共78页。2022/8/16（二）甲苯法适用于含挥发性成分的药品 A500ml的短颈圆底烧瓶；B水分测定管；C直形冷凝管，外管长40cm。 甲苯法装置水分测定法第60页，共78页。2022/8/16十二、残留溶剂测定法一般杂质的检查方法残留溶剂 指在合成原料药、辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。第61页，共78页。2022/8/163.3 特殊杂质的检查方法特殊杂质 是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入

28、的杂质。 原理：利用药品和杂质在理化性质及生理作用的差异 方法：色谱分析法 光谱分析法 化学分析法 物理分析法 生物学分析法 特殊杂质的检查方法第62页，共78页。2022/8/16一、色谱分析法包括：薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法 （一）薄层色谱法（TLC法）1、杂质对照法 适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况。例：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查 N-甲基哌嗪供试品(50mg/ml)10lN-甲基哌嗪对照品(50mg/ml)10l特殊杂质的检查方法第63页，共78页。2022/8/162、供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况 例：氢化可的松中“其

29、他甾体”的检查 供试品液：3mg/ml对照液：60g/ml（供试液稀释50倍）判断： 供试品溶液的杂质斑点数3个； 颜色对照液主斑点颜色。 薄层色谱法第64页，共78页。2022/8/163、杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用4、对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量时，可以用含待检测杂质符合限度要求的与供试品相同的药物作为对照品。薄层色谱法第65页，共78页。2022/8/16内标法加校正因子法外标法加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法 峰面积归一化法（二）高效液相色谱法（HPLC法）HPLC法检查杂质的方

30、法有五种：特殊杂质的检查方法第66页，共78页。2022/8/161、内标法加校正因子法 适用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。高效液相色谱法对照品+内标进样，求校正因子 供试品+内标进样，求Cx 内标物浓度 杂质对照品浓度 供试品中杂质的峰面积内标物的峰面积杂质对照品的峰面积 供试品中杂质浓度 第67页，共78页。2022/8/162、外标测定法 适用于有对照品的杂质，而且进样量能够精确控制的情况。 3、加校正因子的主成分自身对照测定法高效液相色谱法例：红霉素中红霉素B、C的检查： 对照品液(0.2mg/ml)进样20l，调灵敏度，使主峰达满量程的20%； 供试品液(4m

31、g/ml)进样20l，红霉素B、C校正后的A，均不得大于对照品液的主峰面积；其它单个杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积（5.0%）。对照品液：供试品的稀释液 第68页，共78页。2022/8/164、不加校正因子的主成分自身对照法 该方法适用于没有杂质对照品的情况。高效液相色谱法对照品液：供试品的稀释液 例:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的检查： 对照品液(0.01mg/ml)进样20l，调灵敏度，使主峰达10%30% 样品液(0.14mg/ml)进样20l，杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积的1.0%。 第69页，共78页。2022/8/165、面积归一化法 适用于粗略测量供试品中杂质的含量。高效液相色谱法 例：利巴韦林中有关杂质的检查： 对照品液(5g/ml)进样10l,调灵敏度，使主峰达满量程的20%25% 样品液(0.4mg/ml)进样10l, 各杂质峰的面积之和不得超过总峰面积