植物细胞工程的基本设备和无菌操作 课件

1、植物细胞工程的根本设备和无菌操作福建农林大学生命科学学院张 健一、根本设备1、植物细胞工程实验室的组成 洗涤室 灭菌室 配制室 无菌操作室 培养室 鉴定室 驯化移植室2、根本设备 玻璃器皿和器械 无菌操作设备 培养设备 其它设备二、无菌操作1、各种灭菌方法及其适用范围A 干热灭菌法B 湿热灭菌法C 熏蒸灭菌法D 过滤灭菌法E 药剂灭菌法F 灼烧灭菌法G 照射灭菌法2、无菌操作过程A 清洗 玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗B 灭菌 培养材料的灭菌以药剂灭菌法为主主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力 培养基灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌C 接种经过外表灭菌的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移

2、植到培养基上培养的过程。接种室无菌操作室的灭菌接种台的灭菌工作人员本卷须知三、培养基的组成及母液的配制1、培养基的组成 无机营养： 大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、Cu等 有机营养： 碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖 氮源：氨基酸类、酰胺类 活性物质：烟酸、肌醇、生物素等 植物激素： 生长素类：IAA、NAA、IBA等 细胞分裂素类：冲动素、玉米素等 其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯 附加物类： 琼脂、椰乳、水解蛋白等2、培养基母液配制配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类和激素类分别配制成比培养基浓度大假设干倍的母液。当配制培养基时，只需

3、按预先计算好的量吸取母液稀释即可。母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长，当母液出现沉淀或霉菌团时，那么不能使用。实验一 培养基母液的配制 1、实验目的：掌握培养基母液的配制方法。 2、实验内容：1培养基母液配制的各种准备工作；2以常用根本培养基MS母液的配制以及各种附加成分母液的配制为例，学习培养基母液的配制方法.3、实验仪器：主要包括电子天平、烘干箱、蒸馏水器、冰箱、各类常用玻璃器皿和容器等。4、实验操作方法： 玻璃器皿的清洗与枯燥 药品用量计算 称取药品 大量元素母液的配制 微量元素母液的配制 钙盐和铁盐母液的配制 激素及其它有机物母液的配制.5、作业：1按MS培养基配方需要量计算配制

4、100ml母液所需药品量、母液浓度及配制500ml培养基各种母液吸取量 2为什么在配制培养基之前要先配制母液？ 实验二：MS培养基的配制与灭菌 1、 实验目的:学习培养基的配制与灭菌操作方法.2、 实验内容：培养基的配制,培养基的灭菌.3、 实验仪器：主要为台秤,高压灭菌锅,各种玻璃器皿和容器等。 4、 实验操作方法：量取大量元素 量取微量元素 量取钙盐、铁盐和其它有机物 称取蔗糖和琼脂 配制MS培养基 调PH值 分装培养基 培养基灭菌. 5、 作业：1高压蒸汽灭菌本卷须知有哪些？ 2列表计算配制300ml以下培养基pH5.8所需的各种母液及其它成分用量。 A MS根本培养基附加琼脂10g/L B MS根本培养基附加IAA1mg/L、BA2mg/L、琼脂10g/L、蔗糖30g/L实验三：无菌操作技术 1、实验目的：掌握细胞工程中的无菌操作技术。学习植物外植体的消毒技术、离体培养的无菌操作技术。2、实验内容：以柑桔种子为例，完成从外植体外表消毒到接种整个过程的操作。每人均独立操作完成。3、实验仪器：主要