复方丹参注射液抗睾丸缺血再灌注损伤的实验研究

1、复方丹参注射液抗睾丸缺血再灌注损伤的实验研究【摘要】目的讨论复方丹参注射液抗缺血再灌注损伤作用。方法建立人尸睾丸离体缺血再灌注损伤模型，用复方丹参注射液干预后，观察睾丸形态构造，并以TUNEL技术显示生精细胞凋亡，NADPHd法显示一氧化氮合酶NS活性，硝酸盐复原酶法测定组织匀浆N含量。结果缺血再灌注使睾丸组织构造破坏，生精细胞凋亡指数增高，NS活性增强，N合成增多；复方丹参注射液干预明显改善了睾丸组织形态，并使细胞凋亡指数和N生成量显著下降，NS活性降至正常程度。结论活血化淤中药复方丹参注射液具有显著的改善缺血再灌注损伤作用，调节NS活性，降低损伤组织中N程度可能是其作用机制之一。【关键词】

2、缺血再灌注损伤；睾丸；丹参；细胞凋亡；一氧化氮hinaAbstrat：bjetiveTexplretheprtetiveehanisandeffetfpundsalviailtirrhizainjetinagainstisheia-reperfusininjury(IRI).ethdsTheislatedhuantestesIRIdelassetup,andpundsalviailtirrhizainjetinasusedintheexperientalgrup.Histlgialhangeserebserved,ellapptsisasdetetedbyTUNELtehnlgy,ativit

3、yfnitrixidesynthetase(NS)asdetetedbyNADPHdethd,andnentratinfnitrusxideNasdetetedbynitrateredutaseethd.ResultsIsheia-reperfusinulddestryhistlgialstrutureftestes;theappttiindex,theNSativityandtheNnentratinereinreased.pundsalviailtirrhizainjetinulddn-regulateallindexes.nlusinpundsalviailtirrhizainjetin

4、anpreventthetissuefrIRIbyregalatingtheNlevel.Keyrds：Isheia-reperfusininjury；Testes；Salviailtirrhiza；Apptsis；Nitrusxide缺血再灌注损伤isheiareperfusininjury，IRI的机制和防治研究对休克治疗、动脉搭桥、溶栓疗法、心脏外科体外循环、断肢再植和器官移植等临床技术的开展具有重要意义。一氧化氮nitrusxide，N可能在缺血再灌注所致组织器官构造和功能损伤的过程中起了重要作用1。我们建立人尸睾丸离体缺血再灌注损伤模型，用活血化淤中药复方丹参注射液进展干预后，观察睾

5、丸的组织形态、生精细胞凋亡指数、一氧化氮合成酶nitrixidesynthetase，NS活性及N含量的影响，理解该药抗缺血再灌注损伤的作用及机制。1材料与仪器26人捐赠尸睾。复方丹参注射液20g10l-1，每毫升含相当于原生药丹参SalviailtrrhizaBge，降香DalbergadrifereT.hen各1g，批号001208，华西医科大学制药厂提供；高渗枸橼酸盐嘌呤液(规格为每袋500l，上海市血液中心)。SDJS-2型精细输液器即蠕动泵浙江新昌国康仪器厂，小型三用水浴箱温度范围37100，温波1，北京市医疗设备厂。2方法2.1睾丸离体缺血再灌注损伤模型建立26对睾丸离体后立即置于

6、4高渗枸橼酸盐嘌呤液中，剔除鞘膜及多余结缔组织，精索动脉插管固定，4高渗枸橼酸盐嘌呤液灌洗至精索内静脉流出液清亮后，备用。其中6对睾丸立即取材作正常对照12只。其余20对睾丸中，每两只分别分配到缺血再灌注组20只和复方丹参组20只。缺血再灌注组用4高渗枸橼酸盐嘌呤液低温灌洗至精索内静脉流出液清亮后置于250l该保存液中4冷存12h，再以500l保存液复温至37行循环灌注6h；复方丹参组用含1.5gl-1复方丹参注射液的高渗枸橼酸盐嘌呤液同样操作。2.2组织学及酶组织化学染色常规石蜡切片HE染色，观察睾丸组织学构造。新颖冰冻切片按NADPHd组织化学法2显示一氧化氮合酶NS，阳性反响为蓝色沉淀。

7、用NiknElipseE600光学显微镜观察，并用SptAdvaned3.0.4.软件采集图象，Iage-PrPlus4.1.0.9软件计算灰度值Integratedptialdensity，ID，=AreaAverageDensity。2.3睾丸组织细胞凋亡检测睾丸组织石蜡切片采用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)技术染色3试剂盒购自青岛海泰生物技术显示凋亡细胞。阳性细胞的细胞核被染成棕黄色。计数睾丸生精细胞凋亡指数即每500个细胞核中的阳性细胞核的数目。2.4睾丸组织匀浆N含量测定每克睾丸组织加5l生理盐水，制备20%睾丸组织匀浆，离心取上清，硝酸盐复原酶法4测定N含量。检测试剂盒购自南

8、京建成生物工程公司。2.5统计学处理数据以s表示，SPSS统计软件包进展t检验。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1睾丸组织形态观察3.1.1正常对照组曲细精管圆形或椭圆形，各期生精细胞分布正常，间质中血管完好，内皮细胞层呈扁平梭状。3.1.2缺血再灌注组血管内皮细胞肿胀脱落，曲细精管萎缩，基膜与生精上皮明显别离，生精细胞排列紊乱，数量明显减少，间质水肿。3.1.3复方丹参组形态构造根本正常，仅见少数血管内皮细胞肿胀。3.2各组睾丸组织细胞凋亡指数、NS活性和组织匀浆N含量比拟缺血再灌注组睾丸组织细胞凋亡指数、NS活性和组织匀浆N含量均显著高于正常对照P0.05,0.05，P0.001；复方丹参

9、组各项指标均显著低于缺血再灌注组P0.01,0.01，P0.001，与正常对照组相比，细胞凋亡指数和组织匀浆N含量仍较高P0.01，NS活性无显著差异。结果见表1。表1各组睾丸组织细胞凋亡指数、NS活性和匀浆N的含量略4讨论结合中医学理论和现代医学知识，笔者认为缺血再灌注损伤具有血瘀证的根本病理改变，如血液粘度增高、高凝状态，血栓形成，毛细血管嵌顿、阻塞等。且有研究证明活血化瘀中药丹参可通过抗氧化、扩张周围血管、降低血液粘度等机制保护低温保存器官5。本研究建立人尸睾丸离体缺血再灌注损伤模型，用复方丹参注射液进展干预，讨论该药抗缺血再灌注损伤的作用效果及机制。结果发现，缺血再灌注使睾丸形态构造明

10、显破坏，生精细胞凋亡指数，组织NS活性和N含量显著增高；而复方丹参注射液干预可明显减轻组织构造的损伤，使凋亡指数、NS活性及N生成量显著下调。有研究者曾建立离体大鼠心肌缺血再灌注Langendrff模型于体外研究缺血再灌注6。我们用捐赠人尸睾丸建模，所得结果对研究人类本质器官缺血再灌注损伤更具指导意义。已有研究报道，缺血再灌注可引起细胞内a2+堆积，上调NS活性，从而持续生成过量N7。而高浓度N可能通过多种途径诱导细胞凋亡。大量N与互相作用生成细胞毒性物质N-和H-，损伤DNA；过量N与FeS复合物结合，抑制许多FeS酶的正常功能，导致线粒体功能损伤和细胞DNA合成障碍；N能刺激TNF相关的凋

11、亡诱导配体表达，将死亡信号传递到胞内，激活半胱天冬蛋白酶系统，上调p53，抑制NFB活化促进细胞凋亡7。本研究也进一步证实，N是缺血再灌注导致组织损伤的一条重要途径，并发现活血化淤中药丹参注射液可抑制组织NS活性，保持组织中N的正常程度，抑制细胞凋亡，从而发挥良好的抗缺血再灌注损伤作用。【参考文献】1李胜富，蒋红梅，李幼平，等.人内皮细胞缺氧再给氧损伤及益生注射液对其拮抗机理研究J.华西医科大学学报，2002，332：215.2杨静，刘志华，程绪杰，等.辛伐他汀对内皮细胞分泌N、NS的影响J.苏州大学学报医学版,2022,26(6):983.3高翠莲，陈玉川，肖俊辉，等.TUNEL法检测大鼠死后心肌细胞核DNA断裂与死亡时间关系研究J.中国法医学杂志,2022,22(5)：299.4王松，段春燕，王清.1，25-二羟维生素D3对脊柱结核患者外周血单个核细胞的N及iNS的影响研究J.中国药房,2022,19(19):1474.5杨文锋，王