同济医院检验科ISO15189体系文件07幽门螺旋杆菌IgA（ＨＰ－IgA）抗体测定

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ707第2版标题：幽门螺旋杆菌IgA（IgA）抗体测定第7章 第07号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页 目的：检测血清标本中的幽门螺旋杆菌IgA抗体。 适用范围：同济医院检验科免疫室。 项目名称：幽门螺旋杆菌IgA（IgA ）抗体测定。 检测方法：酶免疫分析法。 检测原理：待测样本加入已包被抗原的反应空内孵育，若标本中含有抗抗体，侧该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复和物，加入酶标抗抗体，经孵育后，酶标抗抗体连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。 试剂：6.1 品牌：美国Life

2、Key公司。6.2 包装规格：96人份。6.3 内含物:6.3.1 酶标板：1块，96人份；6.3.2 标本稀释液：1瓶，12ml；6.3.3 质控（低）：1 vial；质控（高）：1 vial；6.3.4 底物A：1瓶，6ml；底物B：1瓶，6ml；6.3.5 浓缩洗涤液（20*）：1瓶，25ml；6.3.5 酶联物；1瓶，12ml； 6.3.6 终止液：1瓶，6ml；6.3.7 说明书: 1份。7. 仪器品牌、型号：BIO RAD UV-3550酶标仪，测定波长为450nm；参考波长为965nm；8. 操作步骤：8.1 打印工作单:8.1.1 打开电脑及打印机电源，8.1.2 双击齐效检验

3、系统，登陆工号与密码；8.1.3 双击报告处理，单击标本申请信息打开标本申请明细信息查询，打开左上角的所有信息，选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择IgA执行查询，点击打印申请单，打印出工作单。8.2 排列被检测标本:根据工作单上的库位号找出相应标本，并按工作单上的顺序排列。8.3 按以下步骤开始操作:8.3.1 浓缩洗涤液1瓶加入双蒸水475ml稀释，未用完的放回2-8。8.3.2 配置Calibrator：按需要量用样品稀释液1：4稀释质控（高），混匀。8.3.3 取出所需板条，其余仍密封放回2-8。8.3.4 每孔加入100ul标本稀释液，然后加入5ul已稀释血清标本。加入1

4、00ul质控及Calibrator至各孔中，空白对照孔中加入标本稀释液100ul，用封板纸封 住反应孔，在平板混合器上震荡30秒钟混合。3730分钟。8.3.5 洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul，静置30秒后甩出液体，在后叠吸水纸上拍干，洗5次。8.3.6 每孔加入酶联物100ul，3730分钟。8.3.7 洗板同8.3.3。8.3.8 每孔加入底物A、B各50ul，混匀，37避光15分钟。8.3.9 打开平板混合器的电源，把平板放在平板混合器上震荡，8.3.10 每孔加入终止液50ul，在450nm处读数。8.4 结果：Cut-Off值为Calibrator的平均值。Index值

5、=样品OD值/Cut-Off的OD值。Index1为阳性；Index在0.91-0.99间为可疑；Index0.90为阴性。8.5 发送报告：详见免疫报告发送程序。9. 参考范围：正常人阴性。10. 临床意义：幽门螺旋杆菌的存在与许多胃肠道疾病，非溃疡性消化不良，胃腺癌和淋巴瘤有关，有95-98%的十二指肠溃疡和60-90%的胃溃疡病人存在此病原体试剂盒组成。研究也表明，微生物治疗清除此病原体，与症状消退和疾病治愈相关。11. 病人准备、标本要求：标本为血清时最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它体液标本时无特殊要求。标本最好为新鲜采集，不可有溶血、脂血或浑浊。如需保存可于2-8冷藏不超过48

6、小时或冷冻长期保存，要避免标本反复冻融。12. 注意事项：12.1 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25，使用后立即冷藏保存试剂。12.2 洗板不正确可以导致不准确的结果，在加入酶联物或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。12.3 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。12.4 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。12.5 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。12.6 在储存和温育时避免强光直接照射。12.7 平衡至室温后再打开密封以防水滴凝聚在冷板条上。12.8 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。12.9 不