分子生物学检验技术第3章

1、分子生物学检验技术第3章第三章 蛋白质组与蛋白质组学DNAmRNA蛋白质转录翻译基因蛋白质细胞特异性基因表达生理状态蛋白质互相作用温度应激状态培养条件药物作用数量有限构造相对稳定复杂性多变性直接反响生命现象复杂的调控束蝎睹裔佰拉填久羽框加绊叔拟潍多沽果完诺惫劝翻炒讹疹娶循札律野睁分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第三章 蛋白质组与蛋白质组学第一节 蛋白质组与蛋白质组学的定义第二节 蛋白质组及其质点的别离与分析第三节 蛋白质互相作用的研究第四节 蛋白质数据库及其应用冶荡京揩筏茸匈猜潍补言襟萄笨棺穷钞艺状垮绎扫势彻服囚罗犊押民钵屹分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第一节

2、 蛋白质组与蛋白质组学的定义迷荫咽硝绒鸥息骇档棚杀皑砂磨摔欣拂钠输录妨悍侈辽羚留茁量烹高枣钢分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 第一节 蛋白质组与蛋白质组学的定义 蛋白质组 protein + genome proteome 一种基因组所表达的全部蛋白质 一个细胞或一个机体的基因所表达的全部蛋白质伶勇瞧涩及薛振妊式镊妨捕莫辩吉抉解趟轰乳讽乃逢甫均显伞酮兽严爵系分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章蛋白质组学说明生物体全部蛋白质的表达形式与功能形式从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、构造、性质、表达程度与修饰状态理解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的互相作用

3、与联络,提醒蛋白质的功能与细胞生命活动的规律 一、蛋白质组与蛋白质组学的定义苇睬亦窄替脖墙瓜庆性头汗零肢般陶使示姆院乾貌产世弊缚单茄异桩惋储分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第二节 蛋白质组及其质点的别离与分析毙睦戍桌右舟通吠槽彩媚磊谁菱洪畦拔嫡量霜求临锄侮刃倡芜呸初裳眉超分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 一、别离纯化第二节 蛋白质组及其质点的别离与分析二、分析鉴定淆谭蛋壶绥兔眼卞育磕碱咐舟腺噎澜凹食阐猿署阴幻亥全敲娜狱闻阂窟舱分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、 分 离 纯 化 二破碎细胞 三蛋白质混合物的别离方法 四蛋白质别离纯化的条件 一选择

4、材料 脾膊灌瞧绝如纵州茨探寿践踊氨寡癌绒浚众缚刘誉殆茫仔抬纽批态机嗜讹分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章目的蛋白质的含量提取蛋白质的材料一、分 离 纯 化 一选择材料 匝盗基讼杜溢叹漾晓丰轩普词硷几盛挺藏携庭掖迎逢骨涣哆雇饼兆柜绅拂分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、分 离 纯 化二破碎细胞 机械法物理法化学法婉稗垢弟含奄鄙纠扶泣楚瞎暴煞那么馈包揽呜叮赣阔扇昭隔叔淮彦宠莎弱唐分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性 质、生物学功能的差异进展： 透析和超滤 平衡离心 凝胶过滤层析 三蛋白质混合物的别离方法一、分 离

5、纯 化缴驹逐束膊涛挚操惧卒钮腺酷拎似小辖起般崇吝痪糖笆竭掇私奔设痘俐灌分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 毛细管电泳 离子交换层析 亲和层析一、分 离 纯 化裤诉未寝煞简臀育塔剑汞嘉汉父旗绞鳞铡塘爽残笆庄女野热纱恋看肯卓达分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章四 蛋白质别离纯化的条件缓冲液盐、金属离子和螯合剂复原剂去垢剂蛋白酶抑制剂 外表效应蛋白质的环境因素 温度 储存 一、 分 离 纯 化芋连鹏豪级皱遏墨台颗各系蜂妊植靛辣弄蜕三院慈恒蚕嘶霄咒牲炒疹虹揩分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、分析鉴定 三图像分析技术四放射性核素标记亲和标签法五蛋白质芯片技术

6、六质谱技术 一Western印迹技术 二二维凝胶电泳2-DE技术七其它方法甜千饱期鸵斡沁荣冬堡羔添掂孩症谰选侩羊茂讥卒良登担滋亦罚甸章险输分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、分析鉴定一Western印迹技术根本操作步骤： 蛋白样品的制备 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质的电转移蛋白质与抗体的结合反响 目的蛋白质的显示western 印迹根本步骤图示扯烬角考缕螟忻滞尸羞蓝吾胖把藐摊誉饯咯都晕琳广朵顾动珍恬螺凌狂厢分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二二维凝胶电泳2-DE)技术目前蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术之一由两相组成： 第一相：等电聚焦凝胶电泳 (根据蛋白质

7、电荷差异) 第二相：SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (根据蛋白质分子量差异)二、分析鉴定死表兵粗盅硒洗骂澜护日副晃清善预随阴事司举啡臻哺粉鲸氰抄凋脑灸罩分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、分析鉴定2-DE 技术原理儒功秸鼎塞刷倦挂览泞鳖馒叔坞循铸受械拧攒录论拨卫绳担仰碾航口厦赶分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章2-DE分析的根本步骤蛋白质溶解变性复原去除蛋白质杂志利用不同pK固定化电解质配置不同pH范围的凝胶利用软件设计配置 第一相电泳(IPGIFE)平衡第二相电泳(SDSPAGE)考马斯亮蓝染色银染色铜染色样品制备IPG胶制备双相电泳染色二、分析鉴定奏芥住灼刘奇撅屹质

8、讹谤甸储侄燃雪阐嚷蹋杰般区疥郎陵陕概忙浦牲查协分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章2-DE获得的蛋白质图谱二、分析鉴定餐势感峪逞呀酱揽茄巷上裔谜袭棵欠犹芋储给鱼衡挪搪毒坑作谜屈赞替佩分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 通过2-DE得到的蛋白质别离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为根底的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。 (三)图像分析技术二、分析鉴定控淌隐队馒劣华某软痪沁腊颊知戈艳涤乒瞳忌犯珊铝桥蜀终荒戒吩淳饱竭分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 2-DE图像分析软件包操作过程： 图像采集斑点检测背景消减获得蛋白质相关信息图像内及图像间

9、的比较二、分析鉴定撞裙蛰卞整掩疹逆具崇适桌治掠吮冉暇弱窖腰旅俄绪坦况额咐劣父妓断茶分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 四放射性核素标记亲和标签法正常细胞 D0亲和标签病理细胞 D8亲和标签混合并消化生物素亲和纯化液相色谱质谱联用分析测量两个不同样品中蛋白质的相对丰度二、分析鉴定召荔皆缸捡争贡到焉专抓瑚捉画持腐兑矽巷壁措弓痹既眼谢吞汪疚英骇面分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章五蛋白质芯片技术二、分析鉴定捡兢绢蹭为束偏芋魏协揩就鸿藻缎铆狂拘壬总遮楼邦知窍剁长赋悯呜岳品分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章原理 样品分子离子化后，根据不同离子间的质量和电荷比值m

10、/e的差异确定分子量。应用 蛋白质的序列分析 研究蛋白质的修饰六质谱技术二、分析鉴定 扔赔团豪划疯示律许颠炬甭砂般誓乌泊镣还敬疙蛮咽挪晾溪孵芋貌沧恐索分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章七 其它方法Edman降解法测定蛋白质多肽的排列顺序核磁共振NMR、荧光光谱法测定溶液中蛋白质分子的构造X射线衍射分析法、小角中子衍射法测定晶体蛋白质的分子构造等二、分析鉴定慢坤注鲍汀峙根拇单撅竖涅悼换江涵灾赘沁差炊腾八商毒骗葬严绿愚丸腺分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第三节蛋白质互相作用的研究皆衍汾筐蝎唤罕扭洗惰瓣呈舀泰钙消记潞敞茶慕癌碑海毯庶郊椭僚潍越扇分子生物学检验技术第3章分

11、子生物学检验技术第3章第三节蛋白质互相作用的研究二、蛋白质核酸一、蛋白质蛋白质此特侯渭审贪塌攫硼峪谤怜忻狮债捐亢漱窃到衡引症讲括喧隋瘫霸析夺鞠分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、蛋白质蛋白质二蛋白质之间的互相作用力三蛋白质互相作用的研究方法一蛋白质-蛋白质互相作用的形式柠先幻湖讨士程疙蔽笋角尺莆祝隙地铰漫棍婴蓄公材秤晋余跋东蝇翌痉肝分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一蛋白质-蛋白质互相作用的形式一、蛋白质蛋白质申毋莱摹磕殖鞋由醉纪硒楞象羌眨兢枷霉馅败挫用糜捕忍捌巍走睛砸榷材分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二蛋白质之间的互相作用力氢键范德华力疏水键离

12、子键一、蛋白质蛋白质兵涌融誓燕菌饱腹新送苞航碾愉涛绑托秸涉三休譬嗓士演谈抛卡守蓄跳拭分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、蛋白质蛋白质三蛋白质互相作用的研究方法 哩揍按谦容残伏浅刻祟咎丘妨传拨首如塔柯怒捐趁赁挣呸瘤破蝶铆呸惩庇分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 蛋白质亲和层析 亲和印迹 免疫沉淀 交联 酵母双杂交 噬菌体展示 生物传感芯片质谱 蛋白质工程中的定点诱变技术 一、蛋白质蛋白质研究方法传统技术新技术氏冈剔颧毋事啦侍底应伍桨蹈驭躁后植镰勋炔鞭蔑寓送月水糙求钉浪握蝶分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 DNA-BD具有与报告基因转录调控区特异结合的

13、功能，DNA-AD那么具有活化转录的功能。报告基因一、蛋白质蛋白质陵看鸵嗓轴鲍恍公巧嫡船新钦诅睡撂囊拉商推洼访窍绒薪涌霖医郑炔棚巾分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章DNA-BD和DNA-AD分开时不能激活转录，只有当两者在空间上接近时，才能呈现转录因子的活性。只有当蛋白质X与蛋白质Y间发生互相作用时，才能激活报告基因的转录，而当两者单独作用时均无此功能 。一、蛋白质蛋白质售梆衫溃股甥哦奉串手绰崖买买塘札过萝底斟团残踪贡疡曹椎簿无块以俭分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、蛋白质-核酸二滤膜结合三甲基化干扰四DNase足纹五核酸-蛋白质杂交一凝胶滞后试验姿陨毁悉赵霖康

14、烙赖乔社贝蠕霉洋滨逃奎托萨遗住赵苹威贵虞远菱凶匆甫分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、蛋白质-核酸一凝胶滞后试验蛋白质可以与末端标记的核酸探针特异性结合，所形成的复合物电泳时在凝胶中的泳动速度比未与蛋白结合的游离探针慢，即表现为相对滞后该实验可以评价蛋白与核酸结合的特异性褐晴传毛替刑炙溪挚酌韩摈施顿延仰幻础羽赔虚柔纹狙挂沟漾女培场阵喊分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二滤膜结合法 利用硝酸纤维素滤膜不能结合双链DNA，但可与蛋白质结合的特性，将与蛋白质结合的DNA片段与游离DNA片段别分开。二、蛋白质-核酸喻敦介斧辖菩昧豆娃揪价擦腰枚斡矽锰橡归锻浆劣浚什念夯您液翌

15、蚊稽椒分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章三甲基化干扰 经甲基化修饰的DNA探针可以干扰蛋白质的结合。将DNA 甲基化后与蛋白质进展反响，只有在结合位点上未被修饰的DNA 片段才能与蛋白质结合。DNA探针的末端标记及探针的甲基化蛋白质与甲基化探针的结合及 DNA蛋白质结合探针的别离结合物及对照探针的化学切割DNA片段的序列测定二、蛋白质-核酸跑埃凭包敏妆酚蛛技贴何烙且灼办读铣卒败沙辖宪粥尘饮病浩爪柑粒节轴分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章二、蛋白质-核酸 用特殊方法将DNA从被修饰的碱基处进展切割，并经电泳别离，由于未结合蛋白质的DNA可在随机修饰的位点被切割，而结合

16、蛋白质的DNA在结合位点上未被修饰而不能被切割，由此可获得蛋白质与核酸定位结合的信息。 三甲基化干扰妮陶险擞幅焰涣绢杉彬缓啊援蚁繁掖吵卓赃阑酚沥揽吧恢抵氖歉射绍瞬舰分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章四DNase足纹目前广泛用于蛋白质准确结合位点的研究方法原理： DNase可以随机水解核苷酸中的磷酸二酯键，将DNA切成单核苷酸，而结合有蛋白质的DNA免于DNase的水解。 二、蛋白质-核酸誊例懦梧恃蝶穗器拎扭桶衬各耪纲也将岳华梧纺炬孩咳有禽谗照牛污傻娄分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章DNase足纹分析原理示意图驰施荆喳渔绥邀秦凳港被溯擎滩遍驱啡株束补拾碎婉类触墓揍蛛

17、闸蜜煎斋分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章五核酸-蛋白质杂交实验TBE缓冲液中DNA蛋白质杂交放射自显影 用于鉴定蛋白质与DNA的特异性结合和确定结合蛋白质的分子量。 根本步骤：蛋白质杂交SDS转移至NC膜或Nylon膜缓慢复性、封闭、预杂交参加同位素标记的DNA片段作探针屡次洗膜二、蛋白质-核酸竖茸臃衫那么衙辛吹努殊暗等妨细疆秉约辰快呸腋筒舱痛栽逞崎鄙谐恳缕族分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第四节 蛋白质数据库及其应用伎醉坦这灯逛巍垮朽盔皖龋术秀晋训守武等妓近样保鲜注挤糟讼厅缝练静分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章第四节 蛋白质数据库及其应用二、蛋

18、白质数据库的应用一、蛋白质数据库(Protein Database)汛拆鸟咳胃苫蚤作泰鳃蛆届帽殷年咎碘吏琴宰舰存彤黎蟹诸垂尊夜纠紫札分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、蛋白质数据库一蛋白质序列数据库二蛋白质构造数据库三蛋白质直系同源簇数据库四DIP数据库麻绵托居汤例庸缚凌蹈扳臼籽弯陀孰芝润郧赔嗓董拱磷舶澜遮氰坤瞬陷胁分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章一、蛋白质数据库一蛋白质序列数据库 SWISS-PROT数据库： PIR和PSD数据库羊卵鬼戌恰谚鸣节茸届残拉哼貌馈诽蝴酱扯蜘炭赵蘸蒸谊阵背汤晾贺杰阶分子生物学检验技术第3章分子生物学检验技术第3章 蛋白质数据库 蛋白质构造分类数据库 PROS