分光光度法测定水果精

1、分光光度法测定水果精一、背景知识 抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水。自然界存在两种形式的维生素C：抗坏血酸复原型VC和脱氢抗坏血酸氧化型DHVC，抗坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱氢抗坏血酸又易复原成抗坏血酸。化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13。两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合成的L-抗坏血酸。 维生素C是目前人类所知道的用处最为广泛的治疗药，预防维生素C缺乏症，进步动物免疫力和抗应急才能，小剂量维生素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以进步动物在疾病、逆境和生理应急等情况下的抵抗才能，它帮助人体对铁的吸收，可防止有害

2、(低密度)胆固醇的氧化。维生素也是非常有效的自由基去除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2、Fe3等,都能加速其氧化，易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在于新颖植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧化剂的保护使它免受破坏。二、实验目的1、掌握铁II-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法；2、理解铁II-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件；3、掌握利用配位掩蔽法消除光复原作用的方法；4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法；5、理解抗坏血酸测定的意义，6、理解样品处理与制备、含量测定的全过程。三、实验原

3、理+ 2 Fe3+ =+ 2 Fe 2+ + 2H+Fe2+ +3 Phen邻菲罗啉 = Fe (Phen)3 2+ (红色，max =510nm )Fe3+ (剩余) + 3 Phen邻菲罗啉= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + h = Fe (Phen)3 2+Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen四、仪器与试剂仪器： 电子天平；分光光度计1厘米比色皿； 移液管5、10 mL；比色管或容量瓶(25或50 mL)试剂： 100 g/L Fe3+ 标准溶液； 0.1%W/V邻菲罗啉(Phen)溶液； 40g/mL抗坏血酸； 0.2

4、mol/L HAc-NaAc缓冲溶液pH 4.75； 1%W/V 氟化钠溶液； 1% HAc溶液。五、实验步骤1、吸收曲线的绘制 参加准确汲取的40g/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系列干净50 mL 容量瓶中，依次参加100 g/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再参加5.0mL0.1%W/V邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；参加5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再参加2.0 mL 1 %W/V氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。同时制作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比，测定不同波长条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长max。2. 标准曲线的绘制 参

5、加准确汲取的40g/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列干净50 mL 容量瓶中，依次参加100 g/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再参加5.0 mL 0.1%W/V邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；参加5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再参加2.0 mL 1 %W/V 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。以相应试剂空白作参比，在最大测定波长max处测定吸光度As, 用Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备 新颖水果去皮、去核后准确称重组织捣碎机中捣碎

6、转移至烧杯中50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀脱脂棉粗滤精滤液转移至250 mL容量瓶中1% HAc溶液定容摇匀，静置蔬菜去根，洗干净，沥干待测或4、药片溶液的制备 VC片20片准确称重求平均片重后研细取适量(相当于VC l00 mg)准确称重后置1000 mL容量瓶加水到刻度摇匀，并过滤弃去初滤液，准确汲取续滤液2 mL置50 mL容量瓶中待测六、数据记录和结果处理1、吸收曲线的绘制/nm420430440450460470480490A/nm500510520530540550560A分光光度计型号： 比色皿厚度： 年 月 日 标准溶液水果Vc药片吸取溶液/mL1.002.003.004.005.006.007.008.00V1V2Vc的含量/g.mL-1 吸光度A2、标准曲线的绘制与待测样品测定附:光度计的使用说明数据处理要求1 要求利用计算机采用用Excel电子表格绘制吸收曲线,要求图形美观,大方,坐标选取合理