诊断标准国家应急预案全国监测方案北京应急预案

1、鼠疫诊断标准1 范围本标准规定了鼠疫的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对鼠疫的诊断、报告。2 术语与定义下列术语和定义适用于本标准。2.1 鼠疫患者 plague patients人类受到鼠疫菌感染所引起的疾病，称为人类鼠疫；发生人类鼠疫的个体，称为鼠疫患者。鼠疫患者可在鼠疫疫源地内由宿主或媒介感染；或与其他有传染性的鼠疫患者接触感染；或接触染疫动物、动物制品、鼠疫实验室及其实验用品感染。2.2 急热（急性热病）待查 suspect acute-fever to be determined急性发热的患者，包括需要将鼠疫作为诊断考虑之一的患者。

2、对这种类型的患者，应当按照本标准采取适当的标本，进行针对鼠疫的各种检验。2.3 疑似鼠疫 probable plague怀疑为鼠疫的患者。对疑似鼠疫的患者应予以隔离治疗，并开始对其接触者进行调查。2.4 确诊鼠疫 confirmed plague确定为鼠疫的患者。患者确诊为鼠疫时，应当按照鼠疫控制应急预案，采取鼠疫控制措施。3 诊断依据3.1 临床表现 突然发病，高热，白细胞剧增，在未用抗菌药物或仅使用青霉素族抗菌药物情况下，病情迅速恶化，在48h内进入休克或更严重的状态。 急性淋巴结炎，淋巴结肿胀，剧烈疼痛并出现强迫体位。 出现重度毒血症、休克综合征而无明显淋巴结肿胀。 咳嗽、胸痛、咳痰带血

3、或咯血。 重症结膜炎并有严重的上下眼睑水肿。 血性腹泻并有重症腹痛、高热及休克综合征。 皮肤出现剧痛性红色丘疹，其后逐渐隆起，形成血性水泡，周边呈灰黑色，基底坚硬。水泡破溃后创面也呈灰黑色。 剧烈头痛、昏睡、颈部强直，谵语妄动、脑压高、脑脊液浑浊。3.2 接触史 患者发病前10d内到过动物鼠疫流行区。 在10d内接触过来自鼠疫疫区的疫源动物、动物制品、进入过鼠疫实验室或接触过鼠疫实验用品。 患者发病前10d内接触过具有3.1.1及3.1.4特征的患者并发生具有类似表现的疾病。3.3 实验室检验结果 患者的淋巴结穿刺液、血液、痰液，咽部或眼分泌物，或尸体脏器、管状骨骺端骨髓标本中分离到鼠疫菌。检

4、验材料的采取及分离步骤见附录A和附录B。 上述标本中针对鼠疫菌caf1及pla基因的PCR扩增阳性，同时各项对照成立。操作步骤见附录C。 上述标本中使用胶体金抗原检测（操作步骤见附录F）、酶联免疫吸附试验（操作步骤见附录D）或反相血凝试验（操作步骤见附录E）中任何一种方法，检出鼠疫菌F1抗原。 患者的急性期与恢复期血清使用酶联免疫吸附试验或被动血凝试验检测，针对鼠疫F1抗原的抗体滴度呈4倍以上增长。4 诊断原则4.1 具有项临床表现；或具有3.2.1项接触史，同时出现3.1.2至3.1.8中任何一项临床表现者为急热待查。4.2 发现急热待查患者具有或3.2.3项接触史，或获得3.3.3项实验室

5、检验结果，应作出疑似鼠疫诊断。4.3 急热待查或疑似鼠疫患者，获得项、若3.3.2+3.3.3项、或者3.3.4项检验结果，应作出确诊鼠疫诊断。5 诊断分型5.1 按临床表现诊断的鼠疫病例，为腺型鼠疫。5.2 按临床表现诊断的鼠疫病例，为败血型鼠疫。5.3 按临床表现诊断的鼠疫病例，为肺型鼠疫。5.4 按临床表现诊断的鼠疫病例，为眼型鼠疫。5.5 按临床表现诊断的鼠疫病例，为肠型鼠疫。5.6 按临床表现诊断的鼠疫病例，为皮肤型鼠疫。5.7 按临床表现诊断的鼠疫病例，为脑膜炎型鼠疫。6 排除鼠疫诊断6.1 在疾病过程中，确诊为其他疾病，可以解释所有的临床表现，且针对鼠疫进行的所有实验室检测结果均

6、为阴性。6.2 在疾病过程中未确诊鼠疫，发病30d后，针对鼠疫F1抗原的抗体检验结果仍为阴性，或达不到滴度升高4倍的标准。附录A（规范性附录）检验材料的采取、保存和运输A.1 具有标准描述临床特征的患者，应在开始抗菌治疗前，依其症状和体征，按以下规定部位采取检材。 所有具有上述临床特征的患者，除采取相应部位材料外，均应采取静脉血3mL5mL，供检菌和血清学诊断用。发病后7d内采取的为急性期标本，由于就诊等原因最迟不应超过发病后14d。发病后第15至第30日期间还应采取第二份恢复期静脉血标本，专供血清学诊断用。两份血液标本采取的间隔不应少于7d。 符合3.1.2特征的患者按下列要求取材： 选取肿

7、大之淋巴结，用碘酒、酒精局部消毒，以左手拇指、食指固定，用灭菌注射器（12号16号针头）刺入淋巴结，抽取组织液适量，保存于灭菌试管内或直接接种于血琼脂平板。 淋巴结肿大不明显者，可先向淋巴结内注射0.3mL0.5mL灭菌生理盐水，稍停后再行抽取。 感染后期，可在肿大的淋巴结周围穿刺抽取组织液。 符合3.1.3特征的患者可只取静脉血。 符合3.1.4特征的患者按下列要求取材： 请患者对溶血（0.1%）赫氏琼脂平板咳嗽，或将带血痰液标本收集于灭菌容器内。 用灭菌棉拭子涂擦咽部分泌物，将拭子保存于灭菌容器内。 符合3.1.5特征的患者用棉拭子或无菌毛细吸管，采取眼的分泌物。 符合3.1.6特征的患者

8、取患者粪便材料备检，应特别注意大便中带血的部分。 符合3.1.7特征的患者按下列要求取材： 水泡、脓泡期，可将脓泡表面用酒精消毒，以灭菌注射器由泡的侧面刺入泡内，抽取内容物。 溃疡、结痂期以灭菌镊子持灭菌棉球涂擦溃疡面和痂皮下的创面，将棉球保存于灭菌容器内。 符合3.1.7特征的患者用腰椎穿刺法抽取脑脊液。 对于鼠疫患者的密切接触者，鼠疫污染材料的接触者，以及早期未出现典型可疑症状的疑似鼠疫患者，均应按A.1.1和A.1.4的规定取材备检。A.2 疑似鼠疫尸体的取材 首例疑似鼠尸体应解剖取材。 取材前应作好解剖器材、场所选择和尸体处理的准备。 以无菌手续采取肝、脾、肺、心血及有可疑病理改变的淋

9、巴结等组织，分别置于灭菌容器内。尸体有腐败迹象时，必须取管状骨骺端骨髓。 如不能解剖，可行局部取材。用腰椎穿刺器按淋巴结、心、肝、脾及肺的顺序穿刺采取组织，分别保存于灭菌试管内，尸体腐败时可穿刺取骨髓。A.3 所取血液标本应分离血清；血块及所取其他材料均应保存于灭菌器皿内；组织块可保存于灭菌生理盐水中。A.4 所取标本按照卫生部人间传染的病原微生物名录的规定进行包装。A.5 运输按照卫生部可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定执行。附录B（规范性附录）鼠疫菌检验程序及结果判定B.1 鼠疫菌检验基本要求B.1.1 鼠疫菌检验必须在卫生部人间传染的病原微生物名录规定的相应等级的

10、生物安全实验室内进行。B.1.2 检验人员必须事前熟悉实验室管理制度，自身防护制度，技术操作规程等。B.1.3 应两人以上同时进入实验室工作。B.1.4 及时准确做好各项记录。B.2 鼠疫菌特异抗原及基因检测B.2.1 来自待检患者和疑似鼠疫尸体的标本，应在分离鼠疫菌的同时进行鼠疫特异抗原及基因检测，以便做出早期诊断。B.2.2 抗原及基因检测的操作步骤与结果判定见附录。B.2.3 如抗原及基因检测为阳性结果，负责检验的单位在收到标本后，应在规定时间内做出传染病报告。B.2.4 抗原与基因检测的标本及所用过的各种器材，应视为污染物品，须经灭菌处理。B.3 鼠疫菌培养B.3.1 新鲜材料可直接涂

11、布溶血（0.1%）赫氏琼脂平板，按三段法划线。B.3.2 腐败材料可划线于龙胆紫（1：10万1：20万）溶血平板。B.3.3 液体材料及骨髓，用灭菌接种环取标本划线。脏器材料先在平板表面压印，再划线，棉拭子可直接涂布于培养基表面。B.3.4 同一患者或尸体的不同材料可以分格涂于同一平板表面。每份标本接种一式两个平板，一个作分离培养，另一个做鼠疫噬菌体裂解试验。B.3.5 置28温箱培养，于14h96h内每日观察以发现具有鼠疫菌典型形态的菌落。没有严重污染的平板，必须持续培养7d，无疑似鼠疫菌落出现时，方可弃去。B.4 鼠疫噬菌体裂解试验B.4.1 在B.3.4中用于噬菌体裂解试验的平板上，于划

12、线一侧滴噬体一滴，倾斜平板使其垂直流过划线。B.4.2 分离培养中发现可疑鼠疫菌落时，用接种环取可疑菌落重新划线于溶血（0.1%）赫氏琼脂平板，再滴加鼠疫噬菌体。B.4.3 置28温箱，24h观察有无噬菌现象，噬菌带宽于噬菌体流过的痕迹时，方可判定为鼠疫噬菌体试验阳性。B.5 动物接种B.5.1 患者、尸体标本，特别是腐败标本应在进行细菌培养的同时接种小白鼠（18g20g）或豚鼠（250g300g）。B.5.2 脏器组织置于消毒乳钵内，加入适量生理盐水，制成悬液。B.5.3 新鲜标本可采用腹腔或皮下接种，豚鼠接种0.5mL1.0mL，小白鼠接种0.2mL0.4mL。B.5.4 腐败标本可采用经

13、皮接种，剃去动物腹毛，并造成轻微划痕，将材料以棉拭子涂布于剃毛之皮肤上并擦之。B.5.5 接种实验动物后，做好标记，放入饲养笼内，挂牌记载编号、接种日期、途径等。每日饲喂1次2次，直至动物死亡或经7d后杀死剖检。B.5.6 动物死亡后，按B.3和B.4进行检验。B.5.7 如7d动物没有死亡，应处死动物，取动物的脾脏及有可疑病变组织制成匀浆，接种第2组动物，动物死亡或观察7d后处死，按B.5.6或C加D.2或E.2或F.2检验。同时采集血清，做D.1或E.1或F.1试验。无阳性发现方可做出阴性报告。B.6 鼠疫菌判定依据B.6.1 分离获得鼠疫菌，并按B.4.3的标准判定鼠疫噬菌体裂解试验阳性

14、时，方可做出鼠疫细菌学判定。负责检验的单位应在噬菌体裂解试验结果产生后，在规定时间内做出鼠疫菌鉴定报告。B.6.2 实验动物死亡，从死亡实验动物体内重新分离到鼠疫菌，并经噬菌体裂解试验证实，负责检验的单位应做出鼠疫强毒菌的鉴定报告。附录C（规范性附录）聚合酶链式反应（PCR）检测鼠疫菌特异性基因C.1 目标基因C.1 从疑似鼠疫的标本中检测鼠疫菌时，以鼠疫菌的fra及pla二基因的片段作为PCR扩增的目标基因。 针对上述目标基因采用的引物序列和扩增产物的长度如下：目标基因引物序列产物长度Fra1F 5-GGAACCACTAGCACATCTGTT-3249bp1R 5-ACCTGCTGCAAGT

15、TTACCGCC-3pla2F 5-ACTACGACTGGATGAATGAAAATC-3456bp2R 5-GTGACATAATATCCAGCGTTAATT-3C.1.3 上述引物合成后如为冻干状态，短暂离心后打开，加入适量灭菌三蒸水混合均匀配制成浓度为100mol/L的储存液，-20保存。使用前配制成10mol/L浓度的工作液。C.2 内部对照C.2.1 内部对照以鼠疫菌EV株DNA为模板，采用上述1F和1R引物首先扩增出fra基因249bp片段，再以16SrRNA基因引物：F 5-AGCGGCAGCGGGAAGTAGTT-3R 5-TCAACCCCTTCCTCCTCGCT-3扩增出16Sr

16、RNA基因396bp片段。采用TOPO TA Cloning Kit克隆fra基因片段，鉴定为阳性的克隆子质粒采用Hpa I酶切，再以T4 DNA连接酶将16S rRNA基因片段连接在上述质粒的缺口中。连接后的质粒再次克隆。成功插入fra和16S rRNA基因片段的质粒作为内部对照模板。C.2.2 按上述方法建成的内部对照模板，根据测定的质粒含量配制成浓度为0.56g/mL的工作溶液。该对照模板以上述的1F和1R引物扩增的产物长度为645bp。C.3 试剂保存：引物、dNTP、Taq DNA聚合酶、Goldview染料、分子量标准（marker）保存于-20，均应尽量减少冻融次数。C.4 标本

17、处理C.4.1 与鼠疫菌分离采取同样的标本，如需长距离运送标本时，标本中可加入3倍量的95%乙醇进行浸泡。C.4.2 组织标本置适当容器中，加等体积蒸馏水，捣碎制成匀浆。体液标本与组织标本匀浆置微型离心管中，封闭管口，置沸水浴中加热10min，取上清作为PCR反应中的待检标本。C.5 PCR反应体系（总量25L），采用其他总量时，下列配方按比例改变。无菌去离子水13.5L10反应缓冲液2.5L4dNTP混合物（每种2.5mmol/L）2L引物（1F、1R、2F、2R）各1L内部对照模板（IC）1L待测标本1LTaq DNA聚合酶1LTaq DNA聚合酶应在临用前取出，使用前置于冰上，最后加入反

18、应体系，加入完毕后尽快将酶收回冷冻保存，并立即短暂离心反应体系后开始扩增。C.6 扩增：预变性95 5min；然后95 1min，55 1min，72 1min，30个循环；最后保持72 5min。共1小时40分。C.7 电泳C.7.1 反应完毕后，向反应管中加入溴酚蓝指示剂5L，混合均匀，短暂离心。C.7.2 向电泳胶体的每一孔中加入上述处理的反应产物8L，每一板胶体至少在连缘的2孔中加分子量标准。C.7.3 使用20cm胶体时，80V100V（不超过5V/cm）电压下在TBE缓冲液中电泳约1h.C.7.4 用凝胶成像仪读取结果并照相。无凝胶成像仪时可在紫外透射灯下观察结果并用相机照相。C.

19、8 判读结果C.8.1 电泳后显示符合249bp、456bp及645bp长度的3条带型者为阳性；显示一条目标条带与对照条带者为鼠疫弱毒菌；只显示645bp一条带者为阴性；无扩增条带者应改变对标本的处理方法后再行测试。C.8.2 显示多数、不规则条带，并与上述预计长度均不相符者为阴性。C.8.3 在疫源地内首次检出阳性结果时扩增产物应测序以核实真伪；获得正确对照结果但目标带长度不符，或在出现目标长度的条带同时出现额外条带时，应以克隆测序的方法核实。C.9 溶液及电泳胶体制备C.9.1 0.5mol/L EDTA（pH8.0）：在800mL蒸馏水中加入186.1gEDTA，在磁力搅拌器上搅拌，用N

20、aOH（约20g）调pH至8.0。然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。C.9.2 5TBE储存液Tris54g0.5mol/L EDTA（pH8.0）20mL硼酸27.5g蒸馏水补足至1 000mLC.9.3 琼脂糖凝胶1%琼脂糖，冷却至5060每100mL加入5L Goldview染料，倾注胶体。附录D（规范性附录）酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鼠疫抗体及抗原D.1 酶联免疫吸附试验测定抗鼠疫IgG抗体D.1.1 包被酶联免疫吸附试验使用酶标通用微量滴定板（平板底）作为吸附介质，测定抗体时，使用经33%饱和度硫酸铵两次盐析提纯的F1抗原包装，F1抗原以包被缓冲液配制成10g/mL溶液，每

21、孔加100L，4过夜，倾去，加封闭液300L（满孔），封闭24h。D.1.2 标本准备以患者的血清作为标本，标本应经56 30min灭活，保存在4。D.1.3 标本稀释标本稀释应在未包被的微量板上或其他容器中进行。每份标本的首孔加180L稀释缓冲液，而后各孔加100L。先在首孔中加入血清20L，混匀后吸出100L加入下一孔中，依次倍比稀释，最后的100L弃去。D.1.4 加样D. 加样前，新包被的酶标板应倾去孔中的液体，置洗板机上以洗涤缓冲液洗3次；如使用手工洗板，应每孔加洗涤缓冲液300L，置3min，倾去，在吸水材料上轻拍除去残留的液体，如此重复3次。D. 将按D.1.3稀释的标本加入至清

22、洗过的酶标板相应孔中，每次实验还需加入：以缓冲液工替血清的空白对照、1：10稀释的已知阴性血清对照以及适当稀释的阳性血清对照。37静置60min，温育时可将酶标板叠放，最上方的酶标板加盖。D.1.5 加入酶标记第二抗体D. 完成D.1.4.2步骤后，倾去孔中的液体，按D.1.4.1洗板3次。D. 向各孔中加入1：1 000（或按说明书）稀释的酶标记第二抗体（通常使用辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG）100L，37静置60min。D.1.6 显色D. 完成D.1.5.2步骤后，倾去孔中的液体，按D.1.4.1洗板3次。D. 在使用辣根过氧化物酶的情况下，加入TMB反应液100L，室温中反应30mi

23、n，然后加入终止液（0.5mol/L H2SO4）50L。D.1.7 完成D.步骤后，使用酶标仪判读结果，酶标仪以空白对照孔调零，阳性及阴性血清对照孔的读数应符合事先的标定，被检孔OD值达阴性对照孔的2.1倍时始判为阳性，达到该阳性标准的最高稀释度为抗体的滴度。D.2 酶联免疫吸附试验测定鼠疫菌F1抗原D.2.1 包被鼠疫菌免疫兔血清血凝滴度在1：40 000以上，以包被缓冲液1：2 000稀释用于包被，每孔50L。4过夜，倾去，加封闭液300L（满孔），封闭24h。D.2.2 标本准备测定抗原时，待查患者可采取血清、淋巴穿刺液、咽拭子浸出液、脑脊液等液体标本，也可采取血块等组织标本。尸检则采

24、取各有关的组织标本。将组织标本在灭菌容器中制成悬液，加9倍组体积的稀释液（加5%甲醛）混悬，静置，取上清液作为1：10标本。D.2.3 标本稀释与处理D. 血清、脑脊液等体液标本以稀释缓冲液稀释10倍，而淋巴穿刺液、咽拭子浸液和各种组织上清液直接进行稀释。D. 分两列在未包被的微量板上或其他容器中进行稀释。第一列为试验列，每孔加稀释缓冲液50L；第二列为抑制列，首孔加180L稀释冲液，而后各孔加100L。先在第二列首孔中加入标本20L，混匀后吸出50L加入第一列首孔，另100L加入本列下一孔中，依次倍比稀释，最后的100L弃去。D. 第二列每孔中加入以稀释缓冲液1：20稀释的鼠疫菌免疫兔血清5

25、0L。D. 稀释好的试验列及抑制列37静置60min，温育时可将酶标板叠放，最上方的酶标板加盖。D.2.4 加样D. 加样前，按D.1.4.1规定洗板。D. 将按D.2.3稀释并处理的标本加入至清洗过的酶标板相应孔中，每次实验还需加入：以缓冲液代替标本的空白对照、1：100稀释的已知阴性血清对照以及1：100稀释的同一阴性血清加F1抗原至1mg/mL作为阳性对照。37静置60min,温育时可将酶标板叠放，最上方的酶标板加盖。D.2.5 结合单克隆抗体D. 加入抗体前，按D.1.4.1规定洗板。D. 小鼠抗鼠疫菌F1抗原IgG单克隆抗体杂交瘤腹水，首先加硫酸铵至25%饱和度，弃去沉淀，再加硫酸铵

26、至33%饱和度，收集沉淀，以稀释缓冲液溶解配制成1.8mg/mL溶液，4保存。使用前1：4 000稀释，每孔中加入50L，室温或37静置60min。D.2.6 加入酶标记第二抗体。D. 加第二抗体前，按D.1.4.1规定洗板。D. 向各孔中加入1：1 000（或按说明书）稀释的酶标记（通常使用辣根过氧化物酶标记）羊抗鼠IgG200L，室温或37静置60min。D.2.7 按E1.6中的规定进行显色操作。D.2.8 判读结果首孔稀释度以1：200计，阳性及阴性血清对照孔的读数应符合事先的标定，被检孔OD值达阴性对照孔的2.1倍时始判为阳性，达到该阳性标准的最高稀释度为抗体的滴度，抑制列至少低于试

27、验列4倍时判断为特异性结果。D.3 液体配制 包被液配方为：Na2CO3 1.59g，NaHCO3 2.93g，加蒸馏水至1 000mL。D.3.2 封闭液：5%BSA。D.3.3 洗涤缓冲液（pH7.4）配方为：NaCl 8.2g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 2.9g，KCl 0.2g，吐温0.5mL，加蒸馏水至1 000mL。D.3.4 稀释缓冲液配方为：NaCl 8.2g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 2.9g，KCl 0.2g，加蒸馏水至1 000mL。D.3.5 终止液：0.5mol/L H2SO4。附录E（规范性附录）间接血凝试验和反相血凝试验E.1 间接血凝

28、试验（IHA）测定鼠疫F1抗体E.1.1 试剂E. 鼠疫F1抗原致敏血球抗原致敏血球为戊二醛固化并经单宁酸处理的羊血球，再以33%饱和度硫酸铵两次盐析提纯的F1抗原致敏。用于间接血凝试验的抗原致敏血球应定期进行试剂质量检测，并符合以下标准：a）用细菌凝集效价为1：320的鼠疫全菌血疫血清，血凝滴度应不低于1：40 000；b）与假结核耶尔森菌免疫血清交叉滴度应不高于1：5。E. 单宁酸血球：与鼠疫F1抗原致敏血球同一批次的单宁酸血球。E. 稀释液：含1%正常兔血清的生理盐水。E. 抑制剂：含50g/mL100g/mL鼠疫F1抗原的稀释液。E. 阳性参考血清。E.1.2 按照D.1.2准备标本。

29、E.1.3 操作步骤E. 初筛试验操作步骤E.1 每份被检血清在V型孔微量血凝板稀释5孔。E.1.3.1.2 用移液器向每孔分别加入25L稀释液。E.3 在第1孔中加入被检血清25L，吸排4次6次，充分混匀后，取25L移至第2孔，充分混匀，依次稀释至最后一孔，弃掉25L。E.4 分别在各孔内加入1%鼠疫F1抗原致敏血球25L，振荡混匀，置37温箱或室温2h后观察结果。E.5 结果判定a）“#”：凝集血球铺满孔底，有明显折边，抗体过量时，凝集呈疏松花圈状；b）“+”：凝集血球铺满孔底，无折边；c）“+”：血球不完全凝集，在孔底呈整齐的圆圈，但圈内外有非常明显的血球凝集；d）“+”：在孔底形成较小

30、的圆圈，在圈内外只有很少的血球凝集；e）“-”：血球全部沉积在V型孔的底部，呈整齐的小珠状。呈现“+”以上的凝集现象时，进行复判操作。E. 复判操作步骤E.1 每份初筛阳性的血清在V型孔微量血凝板稀释两列，第一列为血凝抑制试验列，第二列为血凝试验列。E.2 用移液器向第一列每孔内加抑制剂25L，向第二列每孔内加稀释剂25L。E.3 用移液器分别取被检血清25L加入各列的第一孔内，吸排混匀46次，再吸取25L加入相应列的第二孔内，混匀。依此类推稀释至最后一孔，吸出25L弃入消毒液中。置37温箱10min15min。E.4 在第一、二列各孔中，用移液器加入稀释至1%的鼠疫F1抗原致敏血球悬液25L

31、。震荡混匀，置37 2h观察结果。至此，每列第1孔的稀释度为1：4。E.5 每组同时设下列对照：E.5.1 空白对照：稀释液25L+1%鼠疫F1抗原致敏血球25L。E.5.2 阴性对照：1：20被检血清25L+1%单宁酸血球25L。E.5.3 阳性对照：稀释的阳性参考血清+1%鼠疫F1抗原致敏血球25L。E.6 结果判定E.6.1 方法同E.1.3.1.5。E.6.2 空白对照、阴性对照孔不应呈现凝集，阳性对照成立。最终结果，当血凝抑制列呈“+”凝集的孔比血凝试验列少2孔以上，判定为特异性凝集。阳性血清最终效价为凝集排呈现“+”的最高稀释度。E.2 反相血凝试验（RIHA）测定鼠疫F1抗原E.

32、2.1 试剂E. 1%鼠疫F1抗体致敏血球。E. 抑制剂为1：100稀释的鼠疫免疫血清。E. 阳性对照血清：阴性混合血清加F1抗原至1mg/mL，1：100稀释后作为阳性对照。E.2.2 按照D.2.2准备标本。E.2.3 操作步骤E. 初筛试验操作步骤E.1 每份被检液在V型孔微量血凝板稀释5孔。E.2 用移液器向每孔分别加入25L稀释液。E.3 用第1孔中加入被检液25L，吸排4次6次，充分混匀后，取25L移至第2孔，充分混匀，依次稀释至最后一孔，弃掉25L。E.4 分别在各孔内加入1%鼠疫F1抗体致敏血球25L，振荡混匀。置37温箱或室温2h后观察结果。E.5 结果判定：方法同间接血凝初

33、筛试验（E.1.3.1.5）。E. 反相血凝的确证试验（复判）E.1 每份初筛阳性的被检材料在V型孔微量血凝板做二列复判试验，第一列为抑制列，第二列为凝集列。E.2 用移液器向抑制列每孔加入25L抑制剂，向凝集列每孔加25L稀释液。E.3 分别向每列第1孔中加入被检液25L，两列分别进行倍比稀释，方法同E.2.3.1.3，至每列最后一孔弃25L，室温作用15min。E.4 各孔内加入1%鼠疫F1抗体致敏血球25L，振荡混匀，置37温箱或室温2h后观察结果。E.5 设置对照E.5.1 空白对照：稀释液25L+1%鼠疫F1抗体致敏血球25L。E.5.2 阴性对照：被检液25L+1%单宁酸血球25L

34、。E.5.3 阳性对照：阳性对照血清+1%鼠疫F1抗体致敏血球25L。E.6 结果判定：方法同间接血凝（E1.3.1.5）。最终结果，空白对照、阴性对照孔不出现凝集现象，阳性对照成立。当抑制列呈“+”凝集的孔比试验列少2孔以上，判定为特异性凝集。阳性最终效价为凝集排呈现“+”的最高稀释度。附录F（规范性附录）胶体金纸上色谱方法检测鼠疫抗体及抗原F.1 胶体金纸上色谱方法检测鼠疫抗体F.1.1 标本准备以患者的血清作为标本。F.1.2 检测拆开鼠疫F1抗体胶体金检测试剂的包装，将以生理盐水1：10稀释的血清200L滴入加样孔内，从滴加样品开始计时，15min后观察结果。F.1.3 判读结果出现两

35、条紫红色条带，即质控线和检测线皆显色为阳性结果；仅质控线显色为阴性结果；无条带出现或仅有检测线出现，说明试剂失效，应重新检测。F.2 胶体金纸上色谱方法检测鼠疫菌抗原F.2.1 标本准备与附录D中D.2.2相同的方式获取并处理标本。F.2.2 检测拆开鼠疫F1抗原胶体金检测试剂的包装，将待测标本200L滴入加样孔内，从滴加样品开始计时，15min后观察结果。F.2.3 判读结果出现两条紫红色条带，即质控线和检测线皆显色为阳性结果；仅质控线显色为阴性结果；无条带出现或仅有检测线出现，说明试剂失效，应重新检测。 第三部分 国家鼠疫控制应急预案（卫生部，2007）1 总则1.1 编制目的有效预防和快

36、速应对、及时控制鼠疫疫情的暴发和流行，最大限度地减轻鼠疫造成的危害，保障公众身体健康与生命安全，维护社会稳定。1.2 编制依据中华人民共和国传染病防治法、中华人民共和国国境卫生检疫法、国内交通卫生检疫条例、突发公共卫生事件应急条例、国家突发公共事件总体应急预案、国家突发公共卫生事件应急预案等法律法规和相关预案。1.3 工作原则鼠疫疫情应急处理工作要坚持以人为本、预防为主；依法规范、科学防控；政府负责、部门配合；社会参与、加强宣传；强化监测、综合治理；快速反应、有效处置的原则。1.4 鼠疫疫情分级根据鼠疫发生地点、病型、例数、流行范围和趋势及对社会危害程度，将人间鼠疫疫情划分为特别重大（级）、重

37、大（级）、较大（级）和一般（级）四级。 特别重大鼠疫疫情（级）有下列情形之一的为特别重大鼠疫疫情（级）：（1）肺鼠疫在大、中城市发生，并有扩散趋势；（2）相关联的肺鼠疫疫情波及2个以上的省份，并有进一步扩散趋势；（3）发生鼠疫菌强毒株丢失事件。 重大鼠疫疫情（级）有下列情形之一的为重大鼠疫疫情（级）：（1）在1个县（市）行政区域内，1个平均潜伏期内（6天，下同）发生5例以上肺鼠疫或败血症鼠疫病例；（2）相关联的肺鼠疫疫情波及2个以上县（市），并有进一步扩散趋势；（3）在1个县（市）行政区域内发生腺鼠疫流行，1个平均潜伏期内多点连续发生20例以上，或流行范围波及2个以上市（地）。 较大鼠疫疫情（

38、级）有下列情形之一的为较大鼠疫疫情（级）：（1）在1个县（市）行政区域内，1个平均潜伏期内发生肺鼠疫或败血症鼠疫病例数14例；（2）在1个县（市）行政区域内发生腺鼠疫流行，1个平均潜伏期内连续发病1019例，或流行范围波及2个以上县（市）。 一般鼠疫疫情（级）腺鼠疫在1个县（市）行政区域内发生，1个平均潜伏期内病例数19例。2 应急组织体系及职责2.1 应急指挥机构卫生部依照职责和本预案的规定，在国务院统一领导下，负责组织、协调全国鼠疫疫情应急处理工作，并根据特别重大鼠疫疫情应急处理工作的实际需要，向国务院提出成立国家鼠疫应急指挥部的建议。地方各级人民政府卫生行政部门依照职责和本预案的规定，在

39、本级人民政府统一领导下，负责组织、协调本行政区域内鼠疫疫情应急处理工作，并根据鼠疫疫情应急处理工作的实际需要，向本级人民政府提出成立地方鼠疫应急指挥部的建议。国务院和地方各级人民政府根据本级人民政府卫生行政部门的建议和实际工作需要，决定是否成立国家和地方鼠疫应急指挥部。地方各级人民政府及有关部门和单位要按照属地管理的原则，切实做好本行政区域内鼠疫疫情应急处理工作。 国家鼠疫应急指挥部的组成和职责国务院分管卫生工作的领导同志担任国家鼠疫应急指挥部总指挥，卫生部部长担任副总指挥，负责对特别重大鼠疫疫情应急处理工作的统一领导，统一指挥，做出处理鼠疫疫情的重大决策。指挥部成员单位根据鼠疫疫情应急处理的

40、需要确定，主要有卫生部、外交部、发展改革委、教育部、科技部、公安部、财政部、民政部、铁道部、交通部、信息产业部、农业部、商务部、质检总局、环保总局、民航总局、工商总局、林业局、食品药品监管局、旅游局、新闻办、红十字总会、中央宣传部、总后卫生部、武警总部等。指挥部各成员单位职责如下：卫生部：负责组织制订鼠疫防治技术方案，统一组织实施鼠疫应急医疗救治工作和各项预防控制措施，并进行检查、督导；开展疫区卫生处理，对疫情做出全面评估，根据鼠疫防控工作需要，依法提出隔离、封锁鼠疫疫区的建议，制订鼠疫疫情信息发布标准，授权有关单位对外及时发布鼠疫疫情信息，负责组织全社会开展爱国卫生运动。发展改革委：紧急动用

41、国家医药储备，迅速向疫区提供预防、控制疫情和治疗患者以及消毒等方面的储备药品和器械；及时组织调运疫区人民生产、生活所必需的物资。外交部：做好鼠疫应急处理的有关涉外事务，协助职能部门向相关国际组织及有关国家通报情况、接待国际组织考察、争取国际援助等方面工作。交通部、铁道部、民航总局：按国内交通卫生检疫条例及其实施办法，负责各自职责范围内的交通卫生检疫工作，优先运送疫情处理人员、药品器械和有关物资。质检总局：涉及国境卫生检疫时，按中华人民共和国国境卫生检疫法及其实施细则的规定办理。农业部：负责做好疫区家畜的鼠疫动物病防疫和动物防疫监督工作。商务部：负责疫区重要生活必需品的应急供应工作。林业局：负责

42、疫区野生动物异常情况的监测，并在疫情发生时，协助做好疫情发生地的隔离工作。公安部：协助做好鼠疫疫区封锁，加强疫区治安管理和安全保卫工作。工商总局：加强市场监管，严把市场主体准入关，严厉查处集贸市场上非法收购、出售和加工旱獭等鼠疫宿主动物及其产品的单位、个人。指导集贸市场开办者和有关动物及产品经营者搞好自律管理。财政部：做好鼠疫控制应急资金的安排并及时拨付，加强资金管理监督。民政部：对符合救助条件的鼠疫患者提供医疗、生活救助。科技部：协助提供鼠疫疫区处理所需技术，支持相关科学技术研究。教育部：对学生进行鼠疫防治知识宣传教育。中央宣传部、新闻办：按照疫情控制的统一部署和有关部门、地方的请求，做好疫

43、情处理的宣传报道。宣传鼠疫防治知识，提高公众防疫与保健意识。信息产业部：组织和协调各基础电信运营企业予以积极配合，保障疫情控制期间疫区的通信畅通。旅游局：组织旅游全行业认真做好鼠疫疫情的预防和应急处理工作。红十字总会：充分发挥志愿者作用，协助相关部门在企业、社区、乡村、学校等广泛开展鼠疫预防知识的宣传普及工作，提高公众的防护意识。中国人民解放军和武装警察部队应完成营区内的疫情处理任务，并协助和支持地方做好疫情控制工作。其他有关部门根据本部门职责和鼠疫应急处理的需要，组织做好紧急物资的进口、市场监管、污染扩散的控制及国家鼠疫应急指挥部交办的相关工作等。 地方鼠疫应急指挥部的组成和职责地方鼠疫应急

44、指挥部由相应级别人民政府有关部门组成，地方各级人民政府分管卫生工作的负责人担任总指挥，负责对本行政区域内鼠疫疫情应急处理的协调和指挥，做出本行政区域内鼠疫疫情处理的决策，决定拟采取的重大措施等事项。相应职责如下：（1）组织协调有关部门参与鼠疫应急处理工作。（2）根据鼠疫应急处理工作需要，调集本行政区域内各类人员、物资、交通工具和相关设施、设备投入疫情防控工作。（3）划定控制区域：发生鼠疫疫情时，县级以上地方人民政府报经上一级人民政府决定，可以宣布疫区范围；经省、自治区、直辖市人民政府核准，可以对本行政区域内疫区实施封锁；封锁大、中城市的疫区或者封锁跨省、自治区、直辖市的疫区，以及封锁疫区导致中

45、断干线交通或者封锁国境的，由国务院决定。（4）人群聚集活动控制：当地人民政府可以在本行政区域内采取限制或者停工、停业、停课，停止集市、集会，以及其他人群聚集的活动。（5）流动人口管理：对流动人口采取预防管理措施，对鼠疫患者、疑似鼠疫患者采取就地隔离、就地观察、就地治疗等措施，对密切接触者视情况采取集中或居家医学观察。（6）交通卫生检疫：省、自治区、直辖市人民政府组织铁路、交通、民航、质检等部门在交通站点和出入境口岸设置临时交通卫生检疫站，对出入境、进出疫区和运行中的交通工具及其乘运人员和物资、宿主动物进行检疫查验，对病人、疑似病人及其密切接触者实施临时隔离、留验和向地方卫生行政部门指定的医疗卫

46、生机构移交。（7）信息发布：鼠疫事件发生后，地方人民政府有关部门要按照规定做好信息发布工作。信息发布要及时、准确、客观、全面。（8）开展群防群控：街道、乡（镇）以及居委会、村委会应协助卫生行政部门、医疗卫生机构和其他有关部门，做好疫情信息的收集、报告、人员转移或隔离及公共卫生措施的实施。2.2 日常管理机构卫生部卫生应急办公室（突发公共卫生事件应急指挥中心）负责全国鼠疫疫情应急处理的日常管理工作。各省、自治区、直辖市人民政府卫生行政部门及军队、武警系统突发公共卫生事件日常管理机构，负责本行政区域或本系统内鼠疫疫情日常管理协调工作。2.3 鼠疫应急处理专业机构和救治机构及其任务 应急处理专业机构

47、：各级疾病预防控制机构或鼠疫防治的专门机构是鼠疫应急处理的专业机构。具体任务：（1）负责鼠疫疫情的监测，做好疫情信息收集、报告与分析工作，为预警提供依据。（2）制订流行病学调查计划和疫情控制的技术方案；开展对鼠疫病人、疑似病人、病原携带者及其密切接触者的追踪调查；对人群发病情况、分布特点进行调查与分析；查明传染源和传播途径，提出并实施有针对性的预防控制措施；及时向本级人民政府卫生行政部门和上级疾病预防控制机构报告情况。（3）对鼠疫样本进行实验室检测、复核、确定并上报实验室诊断结果。（4）国家疾病预防控制机构负责省级疾病预防控制机构专业技术人员的应急培训和全国鼠疫疫情处理的技术指导及专业支持；省

48、级疾病预防控制机构负责辖区内疾病预防控制机构专业技术人员的应急培训和技术支援。应急处理救治机构：各级医疗机构是鼠疫应急处理的救治机构，省级卫生行政部门可根据当地情况，确定重点救治机构。具体任务：（1）开展病人接诊、隔离、治疗和转运工作；对疑似病人及时排除或确诊；对密切接触者实施医学观察和预防性治疗等。（2）及时报告疫情，协助疾病预防控制机构人员完成标本的采集、流行病学调查工作。（3）做好医院内的感染控制工作，实施消毒隔离和个人防护，防止出现院内交叉感染；严格处理医疗垃圾和污水，避免环境污染。（4）负责或协助完成鼠疫患者死亡后尸体的解剖、消毒、焚烧等处理工作。3 监测与预警3.1 建立国家、省、

49、市（地）、县四级鼠疫监测体系。国家疾病预防控制中心负责制定全国鼠疫监测方案，并指导各地实施。鼠疫疫源省（区、市）及监测省（区、市）各级疾病预防控制机构或鼠疫防治专业机构，按照全国鼠疫监测方案要求开展鼠疫日常监测工作。必要时，在疫源不明地区或新发现的鼠疫疫源地区开展鼠疫自然疫源地调查工作。3.2 省级卫生行政部门要按照全国的统一规定和要求，结合本省（区、市）实际情况，组织开展鼠疫的主动监测，并加强鼠疫监测工作的管理和监督，保证监测质量。3.3 各级卫生行政部门要对鼠疫监测、动物鼠疫疫情处理及鼠疫自然疫源地调查工作给予必要的经费支持。3.4 各级卫生行政部门应根据报告的鼠疫疫情危害性和紧急程度，及

50、时发布、调整和解除预警信息。预警信息包括鼠疫型别、预警级别、起始时间、警示事项、应采取的措施和发布机关等。 预警信息的发布单位：级为卫生部，级为省级卫生行政部门，级为市（地）级卫生行政部门，级为县级卫生行政部门。 按本预案鼠疫疫情分级，预警级别对应如下：特别重大鼠疫疫情（级）、重大鼠疫疫情（级）为级预警，较大鼠疫疫情（级）为II级预警，一般鼠疫疫情（级）为级预警，动物间鼠疫疫情达到下列强度时为IV级预警：在某一类型鼠疫疫源地发生动物鼠疫大流行（黄鼠疫源地流行范围200km2，黄胸鼠、齐氏姬鼠疫源地流行范围500km2，沙鼠、田鼠、旱獭疫源地流行范围1000km2）；或局部地区出现动物鼠疫暴发流

51、行，且波及到县级以上城市；或动物鼠疫发生在交通便利、人口稠密地区，对人群构成严重威胁。4 信息管理与报告4.1 信息管理 完善国家鼠疫防治信息管理系统，构建覆盖全国的国家、省、市（地）、县（市）疾病预防控制机构或鼠疫防治专门机构的信息网络，承担鼠疫疫情相关信息收集、处理、分析、报告等工作。 各级卫生行政部门负责辖区内鼠疫防治管理信息工作的组织实施、管理和平台建设，不断完善本辖区内鼠疫防治信息管理系统，为系统的正常运行提供必要的保障条件。 各级疾病预防控制机构或鼠疫防治机构承担责任范围内鼠疫疫情监测、信息报告与管理，负责收集、分析核实辖区内疫情信息和其他相关信息资料。4.2 信息报告 执行职务的

52、各级各类医疗卫生人员是人间鼠疫疫情的责任报告人；各级疾病预防控制机构和鼠疫防治专门机构为网络直报的责任报告单位。 医疗机构发现疑似鼠疫病例，应立即向所在地的疾病预防控制机构或鼠疫防治专业机构报告；疾病预防控制机构或鼠疫防治专业机构在判定人间鼠疫或疑似人间鼠疫疫情后，按规定时限在2小时内进行网络直报。 地方疾病预防控制机构和鼠疫防治专业机构是动物鼠疫疫情的责任报告单位。在判定发生动物鼠疫疫情后，责任报告单位在2小时内，进行网络直报。 在开展鼠疫疫情监测期间，鼠疫监测数据由县级鼠疫防治机构随时报告，或按规定报告阶段性鼠疫监测数据，并视监测情况随时进行网络直报，报告间隔最长不得超过4个监测周期（28

53、天）。发现异常情况时，相关数据及时进行网络直报。5 鼠疫疫情的分级反应发生人间或动物间鼠疫疫情时，疫情发生地的县级、市（地）级、省级人民政府及其有关部门按照分级响应的原则，做出相应级别应急反应。同时，根据鼠疫疫情发展趋势和防控工作的需要，及时调整反应级别，以有效控制鼠疫疫情和减少危害，维护正常的生产、生活秩序。5.1 特别重大鼠疫疫情（级）的应急反应 特别重大鼠疫疫情应急处理工作由国务院统一领导。卫生部接到特别重大鼠疫疫情报告后，应立即组织专家调查确认，并对疫情进行综合评估，必要时，向国务院提出成立国家鼠疫应急指挥部的建议。国务院根据卫生部的建议和鼠疫疫情处理的需要，决定是否成立国家鼠疫应急指

54、挥部，指挥部成立后即按职责开展工作。 协调和指导疫区防控工作，负责分析疫情发展趋势，提出应急处理工作的建议报告国务院，并及时向国务院有关部门、军队相应机关通报。 国务院有关部门设立临时性鼠疫应急处理机构，负责部门之间以及与地方政府之间的协调，开展职责范围内的应急处理工作。 疫区省、自治区、直辖市人民政府按照国务院或国务院有关部门的统一部署，结合本地区实际情况，负责组织协调市（地）、县（市）人民政府开展鼠疫疫情的应急处理工作。5.2 重大鼠疫疫情（级）的应急反应 重大鼠疫疫情应急处理工作由疫情发生地省级人民政府组织领导。根据省级卫生行政部门的建议和疫情处理的需要，省级人民政府成立地方鼠疫应急指挥

55、部，迅速掌握疫情态势并控制疫情，确定应急工作内容并组织实施；及时将疫情变化和工作进展情况报告国务院并抄送国务院有关部门，同时通报当地驻军领导机关和国境卫生检疫机关。 省级卫生行政部门迅速了解疫情发生的时间、地点、传染源和病例情况，确定疫情严重程度，分析疫情发展趋势，及时提出应急工作建议，负责向当地人民政府报告和通报政府有关部门，同时报国务院卫生行政部门。 卫生部承担协调和指导疫情防控工作，及时派遣专家，组织分析疫情趋势，提出应急处理工作的建议报告国务院，并及时抄送国务院有关部门；根据疫情变化和工作进展，适时建议国务院召集有关部门通报疫情和疫区控制情况，研究后续的应急处理对策。 国务院根据疫情和

56、疫区省级人民政府的请求，确定对疫区进行紧急支援的任务和时限。5.3 较大鼠疫疫情（级）应急反应 较大鼠疫疫情应急处理工作由疫情发生地市（地）级人民政府组织领导。根据市（地）级卫生行政部门的建议和疫情处理的需要，成立鼠疫应急指挥部，掌握和分析疫情态势，确定应急处理工作任务并组织实施，及时将疫情变化和工作进展情况报告省级人民政府。 市（地）级卫生行政部门迅速了解疫情发生的时间、地点、传染源、发病情况，确定疫情严重程度，分析疫情发展趋势和提出应急工作建议，及时向当地人民政府报告，同时报省级卫生行政部门。 省级卫生行政部门负责协调和指导疫情控制工作，派遣专家协助开展防治工作，提出应急处理工作的建议。省

57、级人民政府根据疫情和市（地）级人民政府的请求，确定对疫区进行紧急支援的任务和时限。 卫生部根据省级卫生行政部门的请求，给予必要的技术和物资支持。5.4 一般鼠疫疫情（级）的应急反应 一般鼠疫疫情应急处理工作由县级人民政府组织领导。根据县级卫生行政部门的建议和疫情处理的需要，县级人民政府成立鼠疫应急指挥部，组织有关部门密切配合，采取紧急处理措施，救治鼠疫患者，控制传染源，切断传播途径，做好疫区内生产、生活安排，保证疫情控制工作顺利进行。 县级卫生行政部门和医疗卫生机构，要及时了解疫情态势，确定疫情严重程度，提出控制措施建议，及时向当地人民政府报告并通报当地驻军领导机关，同时上报市（地）级卫生行政

58、部门。遇有紧急情况，可同时报告省级卫生行政部门，直至国务院卫生行政部门。 市（地）级卫生行政部门负责协调和指导疫区控制工作，协助分析疫情趋势，提出应急处理工作的建议。市（地）级人民政府根据疫情和县级人民政府请求，确定对疫区进行紧急支援的任务和时限。 省级卫生行政部门根据市（地）级卫生行政部门请求，给予必要的技术和物资支持。5.5 级预警（即动物间鼠疫疫情发生）后应采取的控制措施 县级卫生行政部门建立疫区处理组织。县级卫生行政部门要迅速了解情况，掌握疫情态势，确定疫情严重程度，提出控制措施建议，立即向当地人民政府报告并通报当地驻军领导机关。同时迅速逐级上报上级卫生行政部门，直至国务院卫生行政部门

59、。 市（地）级卫生行政部门协调和指导疫区控制工作，分析疫情趋势，提出应急处理工作的建议。市（地）级人民政府根据疫情和县级人民政府请求，对疫区做出应急反应。 省级卫生行政部门根据市（地）级或县级卫生行政部门请求，给予必要的人力和物资支持。5.6 毗邻地区的应急反应发生鼠疫疫情地区的卫生行政部门要及时向毗邻地区卫生行政部门通报疫情和已采取的措施。与发生鼠疫疫情相毗邻的地区，应根据疫情特点、发生区域和发展趋势，主动分析本地区受波及的可能性和程度，重点做好以下工作：密切保持与鼠疫发生地区的联系，及时获取相关信息；组织做好本行政区域应急处理所需的人员与物资准备；加强鼠疫监测和报告工作；开展鼠疫防治知识宣

60、传和健康教育，提高公众自我保护意识和能力；根据上级人民政府及其有关部门的决定，开展联防联控和提供技术、物资支援。6 应急反应等级的确认、终止及评估6.1 鼠疫应急反应等级的确认按本方案1.4分级原则，特别重大鼠疫疫情（级），由卫生部予以确认；重大鼠疫疫情（级）由省级以上卫生行政部门予以确认；较大鼠疫疫情（级）由市（地）级以上卫生行政部门予以确认；一般鼠疫疫情（级），由县级以上卫生行政部门予以确认。6.2 鼠疫应急反应的终止鼠疫疫区控制工作按中华人民共和国国家标准人间鼠疫疫区处理标准及原则GB159781995的要求全部完成相应应急处置工作，经验收大、小隔离圈内已达到灭鼠灭蚤标准及环境卫生标准，