黄金咽喉片中柠檬酸的薄层鉴别及含量测定

1、黄金咽喉片中柠檬酸的薄层鉴别及含量测定何兵，冯文宇，田吉，李春红，艾洪兵【摘要】目的建立黄金咽喉片中柠檬酸的薄层鉴别及含量测定方法。方法采用薄层色谱法对柠檬酸进展定性鉴别，并采用高效液相色谱HPL法测定柠檬酸的含量，色谱柱为：DikaKrasil18柱2504.6，5；流动相为，乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199；检测波长：210n；柱温：25；流速：0.6lin-1；进样量：10l。结果在薄层层析色谱中能检出柠檬酸，柠檬酸在1.0410.4g范围内具有良好的线性关系r0.9999，平均回收率为98.85，RSD为0.37。结论该方法简便、快速、有效、灵敏、准确，具有良好的重复性和回收率，

2、可作为该制剂中柠檬酸的定性与定量分析方法。【关键词】黄金咽喉片柠檬酸薄层鉴别Abstrat：bjetiveTestablishtheethdfrtheTLidentifiatinandntentdeterinatinfitriaidinHuangjinYanhuTabletethdsitriaidinHuangjinYanhuTabletasidentifiedbyTL,andthententfitriaidasdetetedbyHPLTheseparatinasarriedutnaDikaKrasil18lun2504.6，5Thebilephaseasaetnitrile-0.1%phsp

3、hriaid0.1%triethylaineslutin199.Thedetetinavelengthassetat210n，thelunteperatureas25，theflrateas0.6lin-1andthesaplesizeas10lResultsitriaiduldbedetetedbyTL，thealibratinurveshedgdlinearityvertherangef1.04-10.4gr0.9999.Theaveragereveryas98.85ithRSD0.37。nlusinThisethdissiple，rapid，effiient，sensitive，aura

4、teandithgdrepeatabilityandrevery，itanbeusedasaquantitativeanalysisethdfrthispreparatinKeyrds：HuangjinYanhuTablet;itriaid;TLidentifiatin黄金咽喉片是由青蒿黄花蒿、金银花、乌梅、青果、甘草和薄荷6味中药提取的有效部位及有效成分组成的复方制剂，具有芳香透邪、清热解毒、生津润燥、利咽止痛等成效。临床上主要用于治疗急慢性咽炎、喉炎、扁桃体炎、口腔黏膜溃疡；亦可辅佐治疗细菌或病毒感染的其他呼吸道疾玻柠檬酸为乌梅中的主要活性成分，为完善其质量控制标准，本文采用薄层色谱法对乌

5、梅中所含的主要成分柠檬酸进展定性鉴别，并采用高效液相色谱法对其进展定量测定。1仪器与试药1.1仪器戴安高效液相色谱仪P680A四元低压梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，T-100柱温箱，hrelen色谱工作站；瑞士Preisa电子天平XR205S-DR；QX25-06超声波清洗器上海必能信超声，功率250，频率25kHz，硅胶G薄层预制板青岛海洋化工厂。1.2对照品柠檬酸111679-202201，中国药品生物制品检定所提供。在选定色谱条件别离后,未见其他杂质峰，含量以100%计。1.3试药乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。1.4样品黄金咽喉片及阴性对照样品，泸州医学院药学

6、院药物研究所提供，规格每片0.5g，批号051212，051213，051214。2方法与结果2.1薄层鉴别2.1.1试液的制备对照品溶液：取柠檬酸对照品，加醋酸乙酯制成浓度为2gl-1的溶液，作为柠檬酸对照品溶液。供试品溶液：取本品2片，研细，参加酸性醋酸乙酯溶液醋酸乙酯-甲酸=95520l，超声处理15in，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2l使溶解，即得。同法制得3批样品的供试品溶液。阴性对照液：取按处方比例及制备工艺制得缺乌梅提取物的阴性对照样品，按供试品溶液制备项下方法制成阴性对照溶液。2.1.2薄层层析照薄层色谱法1试验，汲取上述溶液各6l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醚-甲醇

7、-甲酸-水(30441)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1的溴酚蓝乙醇溶液，置日光下检视。供试品色谱中，蓝紫色背景下，在与柠檬酸对照品色谱相应的位置上，显一样黄色的斑点，阴性对照无此斑点。结果见图1。2.2含量测定2.2.1色谱条件色谱柱为DikaDiansil182504.6，5；流动相为乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199；检测波长210n；柱温25；流速0.6lin-1；进样量10l。2.2.2试液的制备对照品溶液：取经五氧化二磷减压枯燥至恒重的柠檬酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含柠檬酸0.5g的溶液，即得。供试品溶液：取重量差异项下的本品20片，精细称定，研

8、细，取约0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加水50l，称定重量，超声处理30in，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。阴性对照溶液：取按处方比例及制备工艺制得不含乌梅提取物的阴性对照样品，按供试品溶液制备项下方法制成阴性对照溶液。2.2.3系统适应性实验分别精细汲取对照品溶液、供试品溶液、缺乌梅提取物的阴性对照溶液各10l，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见图2。从图2中可见，柠檬酸的保存时间约为15.5in，柠檬酸峰与其前后色谱峰的别离度分别为1.78，3.61，拖尾因子为1.04，理论塔板数以柠檬酸峰计为14198，柠檬酸峰纯度因子为997，阴性对照在

9、柠檬酸峰处无干扰，即本试验条件下柠檬酸与其他组分别离完全。2.2.4线性关系考察分别精细汲取柠檬酸对照品溶液0.52gl-12，4，6，8，10，15，20l，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积A对进样量g进展回归，得标准曲线方程：A1.8162+0.0325，r0.9999。结果说明，柠檬酸在1.0410.4g范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系。2.2.5精细度实验精细量取对照品溶液制备项下对照品溶液10l，重复进样5次，柠檬酸峰面积平均值为9.4018，RSD为0.17n5，说明仪器精细度良好。2.2.6稳定性试验取本品批号051214的供试品溶液，室温下放置，分别于0

10、，2，4，6，8，10，12，24，36h测定，柠檬酸的峰面积平均值为3.8675，RSD为0.15n9，说明供试品溶液在36h内稳定。2.2.7重复性实验取同一批样品批号051214，照供试品溶液制备项下方法，平行制备5份供试品溶液，分别测定，测得柠檬酸平均含量为21.3580gg-1，RSD为0.13n5，说明本法重复性良好。2.2.8回收率实验精细称取含量21.3580gg-1的本品批号051214细粉9份，每份0.5g，分成3组，每组2份，分别精细添加柠檬酸对照品溶液2.68gl-13，4，5l，照供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算回收率。结果见表1。实验

11、结果说明，本法具有良好的回收率。表1样品回收率实验测定结果略2.2.9样品的测定分别精细量取对照品溶液和供试品溶液10l，按上述色谱条件测定。结果见表2。表2黄金咽喉片中柠檬酸含量测定结果略3讨论在鉴别乌梅提取物中的柠檬酸时选用了4个展开系统，乙醚-氯仿-甲酸-甲醇521.50.52、乙酸丁酯-甲酸-水4223、正丁醇-醋酸-水4:1:54、异丙醚-甲醇-甲酸-水(30441)5，结果前3个展开系统别离效果均不如第4个展开系统。显色剂曾比拟了1三氯化铁乙醇溶液、10硫酸乙醇溶液、0.1甲基橙乙醇溶液、0.1溴甲酚绿乙醇溶液及0.1溴酚蓝乙醇溶液。结果前3种显色剂斑点均不明显，而喷以0.1溴甲酚

12、绿乙醇溶液在蓝色背景下显黄色斑点，0.1溴酚蓝乙醇溶液在蓝紫色背景下显黄色斑点。两种显色剂效果均较好，但蓝紫色背景下的黄色斑点比照度更强，应选用0.1溴酚蓝乙醇溶液作显色剂。由于是采用酸碱指示剂显色，而展开剂中含有甲酸，故在喷显色剂前宜用电吹风热风档把甲酸挥尽置枯燥箱中120烘烤，效果并不理想。薄层板下沿由于长时间浸泡在展开剂中，甲酸不易挥尽，可遮住薄层板上沿斑点局部，用氨气薰一下薄层板下沿黄色局部即可。试验中针对配制供试品溶液的不同提取方法超声、回流及溶剂萃取，不同提取溶剂甲醇、75甲醇、50甲醇、25甲醇、水和流动相，不同溶剂体积10，25，50，75，100l及不同提取时间15，30，4

13、5，60in分别考察。结果以50l水超声提取30in含量最高，杂质峰较少。采用二极管阵列检测器在190380n范围内分别扫描对照品、样品溶液中柠檬酸峰的紫外吸收，结果柠檬酸峰为末端吸收，其最大吸收峰在190n，在210n左右处有一拐点，250n处已根本无吸收，为防止与其他杂质的干扰，测定波长选择在210n。在流动相选择试验中，考察了0.01lL-1磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH为2.76；0.5磷酸二氢铵溶液用磷酸调节pH2.87；甲醇-0.1磷酸溶液595；乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199等的不同比例、流速及柱温。试验发现流动相以乙腈-0.1磷酸0.1三乙胺溶液199，流速为0.6lin-1，柱温为25时保存时间适宜，别离效果最理想，故采用此流动相。实验采用薄层色谱法对黄金咽喉片中柠檬酸进展定性鉴别，并采用HPL测定其含量，结果准确可靠，精细度好，具有良好的重复性和回收率，可用于该制剂中柠檬酸的质量控制。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京:化学工业出版社,2022:附录31.2陈勇,甄汉深,董艺.广山楂及其叶质量分析研究J.时珍国医国药,1999,10(07):511.3王学杰,昊清.苍乌合剂的质量标准研究J.时珍国医国药,2002,13(09):515.4