同济医院检验科ISO15189体系文件33.醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DAE）染色

1、同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ133第2版标题: 醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DAE）染色第1章 第33节第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 目的：保证醋酸ASD萘酚酯酶染色检测结果准确、可靠。 适用范围；醋酸ASD萘酚酯酶染色检测。 项目名称：醋酸ASD萘酚酯酶（AS-DAE）染色 检测方法：化学染色法 原理：血细胞内的醋酸ASD萘酚酯酶将基质液中的醋酸ASD萘酚水解，产生ASD萘酚，后者与基质液中的坚牢蓝BB偶联形成不溶解有色沉淀，定位于胞浆内。 试剂6.1 品牌： 丙酮 上海试剂三厂 37%甲醛 上海试剂三厂磷酸氢二钠 上海新华化

2、工厂 磷酸二氢钾 上海试剂二厂醋酸AS-D萘酚 SIGMANN-二甲基甲酰胺溶液 上海华工试剂厂坚牢蓝BB SIGMA氟化钠 上海试剂三厂6.2 货号： 丙酮 13-20102365II 37%甲醛 13-20102569II磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 13-001-0802-113II醋酸AS-D萘酚 208-439NN-二甲基甲酰胺溶液 坚牢蓝BB 223-432氟化钠 13-2010279188II6.3 包装规格： 丙酮 500ml 37%甲醛 500ml磷酸氢二钠 500g 磷酸二氢钾 500g醋酸AS-D萘酚 5gNN-二甲基甲酰胺溶液 500ml 坚牢蓝BB 25g氟化钠 500g6

3、.4 内含物：6.4.1 0.067mol/L磷酸盐缓冲液PH7.06.4.2 固定液：甲醛丙酮溶液 丙酮 45ml 37%甲醛 25ml6.4.3 基质液：6.4.3.1 称取4mg醋酸AS-D萘酚于小试管内，加入0.5mlNN-二甲基甲酰胺溶液；6.4.3.2 称取20mg坚牢蓝BB，加入0.3ml缓冲液（PH7.0）溶液，在加入19.2ml缓冲液（PH7.0）混匀。6.4.4 NaF抑制试液：10ml上述溶液+15%NaF溶液0.1ml 仪器：显微镜 操作步骤8.1 新鲜涂片冷固定液固定30秒.8.2 水洗待干.8.3 浸入基质液,在37 摄氏度水温内孵育1小时.8.4 流水冲洗干净.8

4、.5 用苏木素复染1-2分钟 线性范围：无10. 参考范围：用油镜观察,胞浆内出现蓝色颗粒为阳性反应。11 临床意义：正常血细胞的染色反应11.1 粒细胞系统:原粒细胞为阴性反应或阳性反应,自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均为阳性反应,一般为(+)(+),此反应不被氟化钠抑制。11.2 单核细胞系统:原始单核细胞为阴性反应或阳性反应,幼单核细胞和单核细胞均为阳性反应,一般为(+)(+),此反应能被氟化钠抑制。11.3 红细胞系统:早期幼红细胞可呈阳性反应,随细胞的成熟阳性反应的程度逐渐减弱,此反应不被氟化钠抑制。11.4 淋巴细胞:淋巴细胞可呈弱阳性反应,次反应不被氟化钠抑制.11.5 巨核细胞系统:巨核细胞和血小板为阳性反应。12 病人准备标本要求：采取病人骨髓液涂片13 注意事项：13.1 标本新鲜13.2 染色时间要充分。13.3